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專利名稱：酶法測定d－3－羥基丁酸試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
；本發(fā)明涉及一種酶法測定D-3-羥基丁酸試劑盒。該產(chǎn)品為生物工程領(lǐng)域高科技產(chǎn)品，是國家按醫(yī)療器械管理的體外診斷試劑。
背景技術(shù)：
；糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病，多發(fā)病，原因是血酮體增高引起，D-3-羥基丁酸酮體重要組成部分，占酮體總量70％，酮癥診斷治療不及時將有生命危險，D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。放射化學法因有射線，化學品難于接受，毛細管等速電泳操作時間長，復雜不適于批量檢測。氣相色譜特導性差。目前，在《臨床化學診斷方法大全》中介紹了酶法測定D-3-羥基丁酸方法，但未涉及D-3-羥基丁酸試劑盒，文獻介紹的方法只能現(xiàn)配現(xiàn)用，不能長期保存，本試劑盒可冷藏保存一年以上，長期使用。

發(fā)明內(nèi)容
；本發(fā)明的目的在于提供一種長期保存的酶法D-3-羥基丁酸測定試劑盒。
1本發(fā)明的技術(shù)方案一種酶法測定D-3-羥基丁酸試劑盒。其特征在于試劑盒含有D-3-羥基丁酸脫氫酶、氧化型輔酶I、3羥甲基氨基甲烷、吐溫-80、2-甲基-4-異噻唑-3-酮、乳糖。各組份含量最佳毫摩爾比為每升3羥甲基氨基甲烷60-140，氧化型輔酶I 2.0-3.4，D-3-羥丁酸脫氫酶30-100IU，保護劑兼賦型劑乳糖1-5克，2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。上述成分加水至一升，調(diào)PH在6.5-7.1
2.意義陳述；本發(fā)明配方中，3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用，吐溫-80有乳化作用，D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用，保護劑乳糖對D-3-羥基丁酸脫氫酶有保護作用、氧化型輔酶I參與底物反應，以上各成分含量濃度為測量D-3-羥基丁酸最佳濃度值。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明配方中3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用，吐溫-80有乳化作用，D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用，保護劑乳糖既對β-羥丁酸脫氫酶有保護作用、氧化型輔酶I參與底物反應，試劑抗干擾能力強，中等程度溶血，乳糜血，血糖20mmOl/l以下，膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾，本試劑盒為液體試劑，有效期一年。冷藏一年試劑盒中酶活力損失小于5％。
具體實施例方式
；取超純水一升用前將水加熱至沸，密封備用。將3羥甲基氨基甲烷60-140mmol，氧化型輔酶I 2.0-3.4mmOl，D-3-羥基丁酸脫氫酶30-100IU，保護劑乳糖1-5克，2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。上述成分加水至一升，調(diào)PH在6.5-7.1，將試劑溶液分裝成5-10毫升/瓶，隨時備用。本試劑盒比原來試劑盒的優(yōu)越性是省去了冷凍干燥工藝，降低成本，使用方便。
權(quán)利要求
本發(fā)明涉及一種酶法測定D-3-羥基丁酸試劑盒。1.一種酶法測定D-3-羥基丁酸試劑盒，其特征在于含有D-3-羥基丁酸脫氫酶、氧化型輔酶I、3羥甲基氨基甲烷、吐溫-80、2-甲基-4-異噻唑-3-酮、乳糖。各組份含量最佳毫摩爾比為每升3羥甲基氨基甲烷60-140，氧化型輔酶I 2.0-3.4，D-3-羥基丁酸脫氫酶30-100IU，保護劑乳糖1-5克，2-甲基-4-異噻唑-3-酮0.1-0.6活性單位、吐溫-80 0.1-0.6克。意義陳述本發(fā)明配方中本發(fā)明配方中3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用，吐溫-80有乳化作用，D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮起防腐作用，保護劑乳糖對D-3-羥基丁酸脫氫酶有保護作用、氧化型輔酶I參與底物反應，試劑抗干擾能力強，中等程度溶血，乳糜血，血糖20mmOl/l以下，膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾，本試劑盒為液體試劑，有效期一年。冷藏一年試劑盒中酶活力破壞小于5％，氧化型輔酶I小于10％，本試劑盒線性范圍達5.0mmol/l，正常參考范圍0.038-0.286mmol/l，回收率96.5-103.8％之間，變異系數(shù)CV＝5.7％，X＝0.26mmol/l，SD＝0.015，n＝20。由3羥甲基氨基甲烷組成的緩沖系統(tǒng)作為緩沖劑PH6.8以上各成分含量濃度為測量D-3-羥基丁酸最佳濃度值。本發(fā)明的有益效果3羥甲基氨基甲烷作為緩沖劑有維持PH的作用，吐溫-80有乳化作用，D-3-羥基丁酸脫氫酶起催化劑作用、2-甲基-4-異噻唑-3-酮可防腐，本試劑盒使用的保護劑可有效穩(wěn)定氧化型輔酶I。試劑抗干擾能力強，中等程度溶血，乳糜血，血糖20mmOl/l以下，膽紅素100umol/l以下對測定不產(chǎn)生干擾，凍干試劑冷藏一年，試劑盒中活力小于5％，還原型輔酶I破壞小于10％，本試劑盒線性范圍達5.0mmol/l，正常參考范圍0.038-0.286mmol/l，回收率96.5-103.8％之間，變異系數(shù)CV＝5.7％，X＝0.26mmol/l，SD＝0.015，n＝20。本項產(chǎn)品為液體試劑無需冷凍干燥，冷藏有效期一年。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種酶法測定D－3－羥基丁酸試劑盒。本產(chǎn)品是生物工程領(lǐng)域高科技產(chǎn)品，是一種體外診斷試劑。本產(chǎn)品經(jīng)檢索填補了國內(nèi)空白，本產(chǎn)品經(jīng)多年研究，解決了酶試劑盒的穩(wěn)定性問題，省略了原來試劑盒需要冷凍干燥的工藝，降低成本，使用者更加方便。為解決這些問題試劑盒使用了新型防腐劑2－甲基－4－異噻唑－3－酮、抗干擾試劑吐溫－80、新型緩沖劑3羥甲基氨基甲烷－鹽酸緩沖系統(tǒng)，酶穩(wěn)定劑乳糖。這種配方可以使試劑盒由凍干型改為液體型，本產(chǎn)品主要提供全國大中小醫(yī)院檢驗科使用，糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病多發(fā)病，原因是血酮體增高引起，D－3－羥基丁酸是酮體重要組成部分，占酮體總量70％，酮癥診斷治療不及時將有生命危險，D－3－羥基丁酸檢測對糖尿病酮癥酸中毒具有特異的診斷價值。
文檔編號G01N33/68GK1962876SQ20061015102
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月13日
發(fā)明者于永光 申請人:于永光