專利名稱：檢測胃癌特征蛋白的優化質譜模型及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于質譜檢測技術領域，特別涉及對胃癌血液優化的質譜檢測方法。 一種通過 能與蛋白質結合的磁珠基質去捕獲生物標志，并用有定量控制的質譜分析來檢測胃癌生物 標志。在此提及的此項發明涉及蛋白質檢測領域，為一種新的非侵入性的體外質譜檢測 方法。本發明可以應用到己經脫離人體的體液中的胃癌生物標志組合的檢測方法或試劑 盒。
背景技術：
胃癌的發生是一個多基因突變導致抑癌基因失活、癌基因活化的過程。腫瘤的發生、 發展是一個十分復雜和漫長的過程，伴隨多基因和蛋白的分子改變。基因組學研究由于自 身的限制難以完全闡明基因與蛋白質參與過程及其具體作用。蛋白質組學高靈敏度的分析 技術有助于捕獲那些在腫瘤演變過程中細微的分子變化，使之成為診斷和監測腫瘤演變的 重要線索。目前臨床上對惡性腫瘤預后評估主要依賴于臨床表現、病理學及傳統腫瘤標志(tumor marker),但腫瘤早期復發或轉移時常常無明顯臨床表現，而病理學證據很難得 到且重復性差。我國胃癌發病率高，其死亡率又占各種惡性腫瘤之首位，因此，胃癌是一 個嚴重危害我國人民健康的常見病，應引起重視。目前己有的腫瘤標志物單項指標的靈敏 度僅為18-40%，聯合應用的結果雖然可達60-80%，但假陽性率較高，難以作為早期檢 測。胃癌的高死亡率使得人們不斷地尋求一種有效的早期檢測方法，臨床上僅以一種蛋白 作為血清學檢測指標在敏感性和特異性上是遠遠不足的，而影象學檢測一旦發現占位病變 則已經不是很早期了。能夠使疾病在發生的極早期就能夠得己發現，并得到控制和治療， 進而大大提高治愈率或明顯改善病人的預后和生活質量。近年來隨著臨床蛋白質組學的開 展，使得胃癌的早期發現成為可能。蛋白質的分離技術在蛋白質組學中應用分離技術有兩個目的。第一、通過將蛋白質的 混合物分離成單一蛋白質或蛋白質小組以簡化復雜的蛋白質混合物；第二、通過標記的方 法可以比較兩個蛋白質的混合物樣品中蛋白質的不同表現。其中主要的技術有雙向電泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)、 高效液相層析(high-performanceliquid chromatography, HPLC)、毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)、親禾口 層析(affinity choromatography)、蛋白芯片(protein microarray)、磁性微球(magnetic beads,簡稱磁珠)和免疫組等。特別是蛋白芯片和磁珠兩項新的蛋白指紋圖譜技術克服 了以往技術的缺點，具有高靈敏度、高通量、結果重復性好、可機械化操作和方法靈活等 特點。待測樣品來源廣泛，不需作特殊前處理，可以直接點樣檢測，如血清、尿液及組織 液等；檢測快速， 一般一例標本的檢測時間僅需約5分鐘，從標本制備到出結果全過程僅 約1小時。蛋白芯片和磁珠兩項新的蛋白指紋圖譜技術有可能在體液中潛在生物標志(biomarker)檢測方面創造革命性突破(許洋，蛋白質指紋圖譜技術在實驗診斷與臨床 醫學中的研究進展，基礎醫學與臨床，2007,27:134-142)。基質輔助激光解析/電離飛行 時間質譜 (matrix-assisted laser desorption/ionization time of fight mass spectrometry, MALDI-T0F-MS)與蛋白芯片分離技術聯合應用即為表面增強激光解析/電 離飛行時間質譜(surface enhanced laser desorption /ionization time of fight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)。 2-DE最先被用于臨床蛋白組學研究，但其對疏水性、強 酸性和強鹼性蛋白的分辯率不夠，而且不能檢測低豐度蛋白，故實用價值受限。近來，蛋 白芯片與質譜技術(SELDI-T0F-MS)的結合，己被成功地用于腫瘤研究；但由于磁珠表面 的結合面積遠遠大于蛋白芯片，從而磁珠的靈敏性比蛋白芯片更高(劉建棟等，血液蛋白 質組與質譜儀檢測流程標準化初探。基礎醫學與臨床，2007,27:193-197)。磁珠具有優于 二維電泳、蛋白芯片和其他質譜方法的特點，已被廣泛地用于腫瘤生物標志的篩查等研究(屠世良等，癌胚抗原陰性結直腸癌的檢測和結直腸癌預后相關生物標志，基礎醫學與臨 床，2007)。該技術具有操作簡便、無需離心樣品、可直接分析原始生物樣本(如血清、 尿液等)、樣本用量小等特點，同時適合多樣品平行檢測和直接進行蛋白質全景式的搜索 和分析，特別是對小分子量蛋白和低豐度蛋白具有較高的捕獲效果，可以與其他蛋白質組 學方法互補，目前已被廣泛地用于腫瘤標志的篩査和臨床檢測，并均已獲得很好的結果。 但國內迄今尚無采用磁珠與質譜技術獲得檢測胃癌血清特征蛋白的報道。
發明內容
本發明的目的是為克服對目前胃癌血清檢測技術的不足之處，建立一種檢測胃癌特征 蛋白的優化質譜模型及其制備方法和應用，該模型為早期檢測提供了新的途徑和方法，并 為進一步發現新的腫瘤生物標志提供了基礎。本發明提出的檢測胃癌血清蛋白質的質譜模型，其特征在于從血清中篩選出7個上調蛋白和3個下調蛋白作為特征蛋白；選取上述10個特征蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，根據各蛋白質峰 的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，建立了胃癌患者與正常人、胃良性疾病、 胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移患者兩兩鑒別的血清特征蛋白檢測質譜模型(圖3-5)， 所說的特異蛋白質質荷比m/z和臨界峰值均值M分別為m/z:1465， M^10.21; m/z=5089， M》8.29; m/z=11471， M》13.23; m/z=6443， M《2. 76; m/z=1465， M》16.77; m/z=8936， M》10.71; m/z=11680， M》21.64; m/z=8892， M^11.56;分子量(ra/z)誤差< 0.01%， 臨界峰值均值M的CV 〈 5 10%。本發明提出上述的檢測胃癌血清蛋白質譜模型的制備方法，包括以下步驟1) 4X:條件下2小時內收集經病理明確診斷的胃癌患者血清及經體檢確定為正常健康 者的血清作為兩組血清標本，進行一8(TC低溫冷凍備用；2) 采用WCX磁珠或C8及C18疏水基質磁珠對所述胃癌患者及正常人的兩組血清標本 的蛋白進行吸附；3) 用激光解吸/電離飛行時間質譜儀，用氮激光儀(337 nm)和80 cm或120 cm飛 行管分析陣列，或用電噴霧電離已洗脫的生物標志后用液相色譜質譜聯用儀(LC-MS)對 結合在磁珠上的兩組血清蛋白進行讀取，設定最高檢測分子量為50 kDa，優化分子量范 圍1000 15000 Da，最佳聚集中心8000 Da，數據采集參數范圍20 80，激光強度150-180, 檢測敏感度為7-8，收集總數為130次，由此獲得兩組蛋白質譜圖譜；4) 在每次實驗數據收集前，用All-in-one標準蛋白及質譜的標準化質控0型血清校 正儀器，用2746 土 1 Da、 5909 土 1 Da、 6634 土 1 Da標準峰為質譜內標定性(分子量) 質控標準，使分子量誤差〈0.01%，從而獲得的精確的蛋白質譜圖譜；5) 定量性質譜調控每次測試前，用質譜的標準化質控血清(漿)，將標準化質控血 清中用于定量的標準峰6634.0 Da等強度調至50%信號強度的最大值，使臨界峰值均值M 的CV < 5 10%，并收集精確的質譜圖譜數據；6) 對所得數據進行Mann-Whitney V檢驗統計學處理，根據胃癌患者和正常人血清之 間蛋白峰值的差異(共得到213個蛋白峰，認定P值小于10—5時具有統計學意義，CV 〈 5 10%;初步分析篩選出胃癌患者與正常人群有IO個差異多肽蛋白，不同峰的分子量、臨界 峰值均值M及特征蛋白的表達變化見表一表一 胃癌患者特征蛋白的表達變化 蛋白分子量(m/z)胃癌患者蛋白臨界峰值均值特征蛋白的表達變化M±SD1465 10. 21 ±6. 295089 8. 29 ±6. 275916 7. 31±5. 938892 11.56±8.3311471 13.23±12.2211680 21.64±17. 128936 10. 71±8. 3117250 3. 71±3. 056443 2. 76土2. 818696 2.87±1.45表一中向上箭頭"t "為在胃癌患者血清中高表達的上調特征蛋白；向下箭頭"I " 為在胃癌患者血清中低表達的下調特征蛋白；將上述10個差異蛋白作為胃癌質譜檢驗模型的特征蛋白；6)由于多個特征蛋白組合起來才可將胃癌與正常人等完全分開，故選取上述10個特 征蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨 界峰值均值M，建立了胃癌患者與正常人、胃良性疾病、胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移 患者兩兩鑒別的血清特征蛋白檢測質譜模型(圖3-5)，所說的特異蛋白質質荷比m/z和 臨界峰值均值M分別為m/z4465， M》10.21; m/z=5089， M》8. 29; m/z=11471， M》13.23; m/z=6443， M《2. 76; m/z=1465， M^16.77; m/z=8936， M》10. 71; m/z=11680， M》21. 64; m/z=8892， M》11.56;其中胃癌患者與正常人鑒別的質譜模型A由m/z=1465， M》10.21;m/z=5089， M》8. 29繪制而成，胃癌患者與胃良性疾病鑒別的質譜模型B由m/Z=11471， M》13.23; m/z=6443， M《2. 76繪制而成，胃癌患者與胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移鑒 別的質譜模型C由m/z=1465， M》16. 77; m/z=8936， M》10. 71; m/z=11680， M》21.64; m/z=8892， M》11. 56繪制而成；分子量(m/z)誤差〈0. 01%，臨界峰值均值M的CV 〈 5 10%。利用該質譜模型，只要將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界峰值均 值M與本發明質譜模型逐一進行對比分析，就可用于胃癌檢驗。利用該質譜模型A-C (圖3-5)，將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界 峰值均值M與本發明的質譜模型逐一進行對比分析，經臨床試用及雙盲測試，其鑒別胃癌 患者與正常人的敏感性為96%，特異性為91%;胃癌與胃良性疾病患者敏感性93%，特異 性91%，胃癌患者與胃癌淋巴結轉移敏感性87%，特異性93%;胃癌患者與胃癌遠端轉移 敏感性8P/。，特異性93%。利用C8及C18疏水基質磁珠的實驗結果與上述WCX陰離子基質磁珠的實驗結果一致。本發明采用上述質譜模型可用于胃癌早期檢測、篩査和復發、轉移的評估。 本發明的特點及效果本發明與其他胃癌的檢測方法比較，具有以下優點第一、本發明采用胃癌患者與正常人具有差異的多個特征蛋白組合起來進行對胃癌血清的檢測，提供的質譜模型是胃癌早期檢測和篩査的新方法和新途徑，并為進一步發現新 的胃癌生物標志提供了基礎；第二、與以往的血清學檢測方法比較具有較高的敏感性和特異性，是一種在蛋白組學 水平上的檢測，對胃癌的早期檢測提供了新標準；第三、本發明由于磁珠表面的結合面積遠遠大于蛋白芯片，從而磁珠的靈敏性比蛋白 芯片更高而具有了更高的靈敏度，從而優化了質譜模型；第四、本發明首創采用了定量性質譜調控，CV 〈 5 10%，使磁珠的臨界峰值均值M 比蛋白芯片更可靠及精確第五、本發明首創采用了用質譜的標準化質控血清(漿)，將標準化質控血清(漿) 中用于質譜內標定性的2746 土 1 Da、 5909 土 1 Da、 6634 土 1 Da標準峰(分子量)質控標準，使分子量誤差< 0.01%，從而獲得的精確的蛋白質譜圖譜；第六、本發明質譜模型的構建方法設計精確及合理可行，為降低我國胃癌的病死率、提高胃癌的臨床治愈提供了一種新的篩查和復發、轉移的評估方法；第七、利用本發明用雙盲法分析了 180份血清標本，其鑒別胃癌患者與正常人的敏感性為96%，特異性為91%;胃癌與胃良性疾病患者敏感性93%，特異性91%，胃癌患者與胃 癌淋巴結轉移敏感性87%，特異性93%;胃癌患者與胃癌遠端轉移敏感性81%，特異性93%。因此本發明可實現對胃癌進行早期預警、早期發現。說明書附1 胃癌及正常人血清多肽質譜圖譜圖2 胃癌及正常人血清蛋白質譜圖譜圖3 胃癌患者與正常人鑒別的質譜模型圖4 胃癌患者與胃良性疾病鑒別的質譜模型圖5 胃癌患者與胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移鑒別的質譜模型圖中m/z表示特異蛋白的質荷比，M代表該特異蛋白的臨界峰值均值具體實施方式
本發明將結合具體實施例作進一步說明，這些實例僅用于說明目的，而不用于限制本 發明范圍。實施例l正常與胃癌患者的區分及質譜的試劑盒制備 (1)實驗方法66例胃腺癌患者(其中I期14例、1I期20例、ni期14例、IV期16例，年齡43 79歲， 中位年齡52歲)和24例胃良性疾病患者(年齡42 78歲，中位年齡51歲)的術前血清。90 名對照血清來自健康志愿者(年齡40 69歲，中位年齡49歲)，來源于肝功能、腎功能等 檢査均正常的體檢人群。受檢者空腹采集靜脈血l mL，采集后立即于4。C冰箱靜置2小時， 4°C 4000 r/min離心10分鐘分離血清，將血清于4。C 12000 r/min再次離心5分鐘，去除所 有殘留細胞碎片和不溶物，在冰上將血清分裝為100叱/管，共5管，保存于-8(TC冰箱。避免反復凍融。 磁珠操作步驟血清樣品處理從-80。C冰箱中取出血清，于4"C， 10 OOO卬m離心5min。取IO叱血 清樣品，加20叱U9處理液(9mol/L尿素，2%CHAPS， 1%DTT, 50mmol/L Tris-CL， pH9. 0), 充分混勻，冰浴振蕩30min后取出，加入360叱結合緩沖液(100mmol/L NaAc， pH4. 0)， 立即混勻。磁珠上樣及洗脫將處理好的樣品IOO叱加至已裝好WCX磁珠(弱陰離子表面，羧酸 基團，捕獲正電荷基團蛋白)的PCR管中，置磁性處理器上孵育30 min，除去液體。加 IOO叱磁珠結合緩沖液(50誦ol/L NaAc， pH 4. 0 4. 3)至已裝好WCX磁珠的PCR管， 置磁性處理器上孵育2分鐘，除去液體，重復上述操作2次。加10 HL Elution Buffer 2 niin，洗脫標本至上清液。取5叱上清液移至另一個PCR管中，加入5叱SPA飽和溶液 充分混勻，取l ^混合溶液加樣到Au或Steel片上，晾干后上機測量。數據收集將處理好的Au或Steel片置入MALDI-TOF-MS進行蛋白質譜分析。在讀取數據前，用 加有all-in-one標準蛋白質的芯片校正質譜儀，使分子量誤差〈0.1%。本研究中閱讀儀 的主要參數設定為，最高檢測分子量為50 kDa,優化分子量范圍1000 15000 Da，最佳 聚集中心8000Da，數據采集參數范圍20 80，收集總數為130次。軟件中設定讀片程序， 以讀取數據。定量性控制及質譜激光能量調控每次測試前，用質譜的標準化質控血清 (漿)，將標準化質控血清(漿)中用于定量的標準峰6634.0 Da強度調至50%質譜信號 強度的最大值。用2746 土 1 Da、 5909 土 1 Da、 6634 土 1 Da標準峰為質譜內標定性(分 子量)質控標準，使分子量誤差〈0.01%，從而獲得的精確的蛋白質譜圖譜。 統計學分析應用軟件分析處理所有峰譜，形成蛋白質譜圖譜。所有的圖譜都進行了標準化，統一 到它們自己全部的離子總數(峰面積的總和)。將標準化質控血清中用于定量的標準峰 6634.0 Da強度調至40 5(^信號強度的最大值，并且用最顯著的峰進行了校正，而后又 進行了 "減少基線"，定義蛋白峰(s/n > 5，最小的峰強度〉1.6)。分析所有l 50kDa 之間的蛋白峰，并且仔細檢査了每個相應的峰，計算出峰的平均值M，標準誤差(SD)和 變異系數(CV%)。用Mann-Whitney 〃檢驗比較配對樣本的蛋白峰，計算P值。胃癌檢測多肽蛋白篩選用Mann-Whitney檢驗比較配對樣本的蛋白峰，CV 〈 5 10%;初步分析篩選出尸〈0. 00001的胃癌患者與正常人群有10個差異多肽蛋白，不同峰的分子量、臨界峰值均值 M及特征蛋白的表達變化見表一表一 胃癌患者特征蛋白的表達變化 蛋白分子量(m/z)胃癌患者蛋白臨界峰值均值特征蛋白的表達變化M±SD1465 10. 21 ±6. 295089 8. 29 ±6. 275916 7. 31 ±5. 938892 11.56±8.3311471 13.23±12.2211680 21.64±17. 128936 10. 71 ±8. 3117250 3. 71 ±3. 056443 2.76±2.818696 2.87±1.45表一中向上箭頭"t "為在胃癌患者血清中高表達的上調特征蛋白；向下箭頭"I " 為在胃癌患者血清中低表達的下調特征蛋白；
圖1、 2為胃癌及正常人血清中3個差異蛋白峰(8892、 11471和11680 m/z)的原始 質譜圖譜；上l張圖譜(C緒CER)為胃癌，下l張圖譜(NORMAL)為正常健康人。將上述IO個差異蛋白作為胃癌質譜檢驗模型的特征蛋白； 實施例2臨床試用及雙盲測試由于多個特征蛋白組合起來才可將胃癌與正常人等完全分開，故選取上述10個特征 蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，建立了胃癌患者與正常人、胃良性疾病、胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移患 者兩兩鑒別的血清特征蛋白檢測質譜模型(圖3-5)，所說的特異蛋白質質荷比m/z和臨 界峰值均值M分別為m/z=1465， M》10.21; m/z=5089， M>8.29; m/z=11471， M>13.23; m/z=6443， M《2. 76; ra/z=1465， M》16. 77; m/z=8936， M>10. 71; m/z=11680， M^21.64; m/z=8892， M》11.56;其中胃癌患者與正常人鑒別的質譜模型A由m/z=1465， M》10.21; m/z二5089， M^8.29繪制而成，胃癌患者與胃良性疾病鑒別的質譜模型B由m/z=11471， M^13.23; m/z=6443， M《2. 76繪制而成，胃癌患者與胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移鑒 別的質譜模型C由m/z=1465， M》16. 77; m/z=8936， M》10. 71; m/z=11680， M》21.64; m/z=8892， M》11. 56繪制而成；分子量(m/z)誤差〈0. 01%，臨界峰值均值M的CV < 5 10%。利用該質譜模型，只要將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界峰值均 值M與本發明質譜模型逐一進行對比分析，就可用于胃癌檢驗。利用該質譜模型A-C (圖3-5)，將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界 峰值均值M與本發明的質譜模型逐一進行對比分析，經臨床試用及雙盲測試，其鑒別胃癌 患者與正常人的敏感性為96%，特異性為91%;胃癌與胃良性疾病患者敏感性93%，特異 性91%，胃癌患者與胃癌淋巴結轉移敏感性87%，特異性93%;胃癌患者與胃癌遠端轉移 敏感性81%，特異性93%。利用C8及C18疏水基質磁珠的實驗結果與上述WCX陰離子基質磁珠的實驗結果一致。在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為 參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本 發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
權利要求
1.一種檢測胃癌血清特征蛋白的質譜模型，其特征在于從血清中篩選出7個上調蛋白和3個下調蛋白作為特征蛋白；選取上述10個特征蛋白中的任意兩個或兩個以上的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，建立了胃癌患者與正常人、胃良性疾病、胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移患者兩兩鑒別的血清特征蛋白檢測質譜模型；其中胃癌患者與正常人鑒別的質譜模型A由m/z＝1465，M≥10.21；m/z＝5089，M≥8.29繪制而成，胃癌患者與胃良性疾病鑒別的質譜模型B由m/z＝11471，M≥13.23；m/z＝6443，M≤2.76繪制而成，胃癌患者與胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移鑒別的質譜模型C由m/z＝1465，M≥16.77；m/z＝8936，M≥10.71；m/z＝11680，M≥21.64；m/z＝8892，M≥11.56繪制而成。
2、 一種檢測胃癌血清蛋白質譜模型的制備方法，包括以下步驟1) 4C條件下2小時內收集經病理明確診斷的胃癌患者血清及經體檢確定為正常的健 康者的血清作為兩組血清標本，進行一80'C低溫冷凍備用；2) 采用WCX磁珠對所述胃癌患者及正常人的兩組血清標本的蛋白進行吸附；3) 用激光解吸/電離飛行時間質譜儀，用氮激光儀(337 nm)和80 cm或120 cm飛 行管分析陣列，或用電噴霧電離已洗脫的血清蛋白后用液相色譜質譜聯用儀(LC-MS)對 結合在弱陰離子表面的WCX磁珠或C8及C18疏水基質磁珠上的兩組血清蛋白進行讀取， 由此獲得兩組蛋白質譜圖譜；4) 在每次實驗數據收集前，用標準蛋白及質譜的標準化質控0型血清校正儀器，使 蛋白質分子量誤差〈0.01W和臨界峰值均值M的CV 〈 5 10%，并精確地、定量地收集胃 癌患者和正常人優化的血清質譜圖譜數據；5) 對所得數據進行統計學處理，根據胃癌患者和正常人血清之間蛋白峰的差異，檢 測出2組血清蛋白質譜圖譜之間有10個穩定的差異蛋白及其臨界峰值，7個上調蛋白和3 個下調蛋白作為特征蛋白；將所述IO個差異蛋白作為胃癌蛋白質譜模型的特征蛋白；6) 選取所述IO個特征蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以各蛋白質峰的質荷比m/z 值及以該蛋白的臨界峰值均值M構成用于檢測胃癌血清特征蛋白質譜模型；其中所述的特 異蛋白質質荷比m/z和臨界峰值均值M分別為m/z-1465， M^10.21; m/z=5089， M》8.29; m/z=11471， M》13. 23; m/z=6443， M《2. 76; m/z=1465， M>16. 77; m/z=8936， M》10. 71;m/z=11680， M》21.64; m/z=8892， M》11.56。
3、選取如權利要求1所述的血清10個蛋白中任意兩個或兩個以上的特征蛋白，利用 該質譜模型，將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界峰值均值M與本發明的 質譜模型逐一進行對比分析，就可應用于胃癌的早期檢測、篩査和復發、轉移的評估。
全文摘要
本發明涉及一種檢測胃癌特征蛋白的優化質譜模型及其制備方法，屬于質譜檢測技術領域。本發明從血清中篩選出7個上調蛋白和3個下調蛋白作為特征蛋白，選取所述10個蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，建立了胃癌患者與正常人、胃癌良性疾病、胃癌淋巴結轉移及胃癌遠端轉移患者兩兩鑒別的血清特征蛋白質譜模型；本發明為進一步發現新的胃癌生物標志提供了基礎。本發明對于胃癌的檢測優于目前所采用的任何單一檢測方法，為胃癌的早期發現、早期治療提供了一種非侵入性技術，從而為降低胃癌的病死率、提高胃癌的治愈率，并進一步為高危人群篩查胃癌提供了一種新方法。
文檔編號G01N33/574GK101329348SQ200710111218
公開日2008年12月24日 申請日期2007年6月18日 優先權日2007年6月18日
發明者葉再元, 洋 許 申請人:洋 許
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