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專利名稱：免疫層析檢測(cè)裝置及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種免疫層析檢測(cè)裝置及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
免疫層析(Immunochromatogr即hy， IC)是上世紀(jì)八十年代初發(fā)展起來(lái)的一種快 速免疫分析技術(shù)。原理是借助毛細(xì)作用，樣品在條狀纖維膜上泳動(dòng)，使其中的待測(cè)物質(zhì)與膜 上預(yù)置的相應(yīng)配體結(jié)合，通過(guò)顯色反應(yīng)(或熒光或直接使用著色標(biāo)記物)在短時(shí)間(20min) 內(nèi)得到直觀的結(jié)果。免疫層析因使用標(biāo)記物不同而名稱各異，如酶免疫層析、乳膠微粒免疫 層析、膠體金免疫層析、膠體硒免疫層析、膠體鐵免疫層析等等。在當(dāng)前應(yīng)用最廣且技術(shù)最 為成熟的免疫層析技術(shù)是膠體金免疫層析。僅在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上，就能輕易找到上百種的膠體 金免疫層析試紙條，它們?cè)谠缭袡z測(cè)、傳染疾病檢測(cè)、毒品檢測(cè)、食品衛(wèi)生檢測(cè)(如獸藥殘 留等)以及基因檢測(cè)等方面發(fā)揮著重要的作用。然而，膠體金免疫層析層析檢測(cè)技術(shù)的最 大局限性在于靈敏度和準(zhǔn)確性都難以達(dá)到ELASA檢測(cè)的水平，另外，膠體金容易產(chǎn)生凝聚， 且形成的標(biāo)記物不穩(wěn)定，對(duì)于小分子標(biāo)記差，標(biāo)記特異性難把握，這一技術(shù)瓶頸極大地限制 了免疫層析技術(shù)的進(jìn)一步的發(fā)展和應(yīng)用。 在免疫層析檢測(cè)中，待測(cè)物與其反應(yīng)性物質(zhì)(抗體、核酸或受體等具有特異結(jié)合 能力的物質(zhì))的反應(yīng)不是平衡反應(yīng)，樣本中的待測(cè)物都要通過(guò)由反應(yīng)性物質(zhì)組成的檢測(cè)帶 區(qū)域而得到富集，使得膜層析反應(yīng)的效率較高。但常用的膠體金指示物的靈敏度偏低，造成 了目前免疫層析技術(shù)靈敏度偏低，這也是膠體金免疫層析技術(shù)遲遲不替代ELISA的最重要 原因之一。因此，人們提高膜層析技術(shù)靈敏度的努力從來(lái)沒(méi)有停止過(guò)，而標(biāo)記物的推陳出新 則是提高膜層析靈敏度的最重要途徑，曾經(jīng)使用的標(biāo)記物有膠體金、膠體硒、膠體鐵、乳膠 顆粒以及近年來(lái)還使用了脂質(zhì)體，其目的都是希望把層析檢測(cè)的靈敏度提高到一個(gè)新的水 平。最近，有研究者用順磁粒子標(biāo)記、量子點(diǎn)標(biāo)記等技術(shù)，或是把免疫反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)化為電子 信號(hào)模式來(lái)提高靈敏度也都取得了不錯(cuò)的效果。但是這些新技術(shù)對(duì)于設(shè)備和技術(shù)的要求頗 高，距離實(shí)際應(yīng)用還有很長(zhǎng)的路要走。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中免疫檢測(cè)設(shè)備靈敏度偏低、準(zhǔn)確
性不好、設(shè)備及其技術(shù)要求較高的問(wèn)題，提供一種高靈敏度、高特異性的免疫層析裝置。 本發(fā)明進(jìn)一步要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中靈敏度偏低、準(zhǔn)確性不好、
設(shè)備及其技術(shù)要求較高的問(wèn)題，提供一種高靈敏、快速可靠的免疫層析檢測(cè)方法。 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種免疫層析檢測(cè)裝置，包括膜基
體，在膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記
物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測(cè)帶、吸水墊，所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性
物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物，所述檢測(cè)帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上
的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
3J方法中，所述聚合物骨架還可以為葡聚糖、多聚賴氨酸、聚乙烯或聚
l方法中，反應(yīng)性物質(zhì)、指示性物質(zhì)通過(guò)化學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方法
J方法中，所述反應(yīng)性聚合物為聚合物骨架上偶聯(lián)至少一個(gè)反應(yīng)性物 所述聚合物骨架為帶有-CHO、 _NH2、 -OH、 -C00H中至少一個(gè)官能團(tuán)的聚合物。
所述聚合物骨架為葡聚糖、多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。 免疫層析檢測(cè)方法為樣品在纖維或凝膠制成的膜上泳動(dòng)，樣品中的待測(cè)物首先 通過(guò)標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng)，然后在毛細(xì)作用下泳動(dòng)到檢測(cè)帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng)， 顯色或通過(guò)指示物質(zhì)被檢出；所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上 形成的多功能聚合物，所述檢測(cè)帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性 物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。 免疫層析檢測(cè)方法中，所述聚合物骨架為帶有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個(gè)
官能團(tuán)的聚合物。
免疫層析檢》
苯乙稀o 免疫層析檢；
偶聯(lián)到聚合物骨架上。
免疫層析檢《質(zhì)。 免疫層析檢測(cè)方法中，所述多功能聚合物為聚合物骨架上偶聯(lián)至少一個(gè)反應(yīng)性物 質(zhì)和至少一個(gè)指示性物質(zhì)。 本發(fā)明以聚合物為骨架，通過(guò)化學(xué)修飾或生物交聯(lián)，把相同功能或不同功能物質(zhì) 偶聯(lián)到聚合物骨架的特定部位上，賦予其多重生物活性。這些連接到聚合物骨架上的物質(zhì) 按照功能可分成兩種一是反應(yīng)性物質(zhì)，二是指示性物質(zhì)。反應(yīng)性物質(zhì)是指執(zhí)行特異反應(yīng)功 能的物質(zhì)如抗原、抗體、酶、配體、受體、核酸等。指示性物質(zhì)是指肉眼可見(jiàn)或能被儀器檢測(cè) 到的信號(hào)物質(zhì)如色素、熒光物質(zhì)、酶量子點(diǎn)等。在膜層析檢測(cè)中，把僅帶有反應(yīng)性物質(zhì)的聚 合物稱為反應(yīng)性聚合物，包被或通過(guò)化學(xué)交聯(lián)到纖維素膜檢測(cè)帶位置；二是把既攜帶了反 應(yīng)性物質(zhì)又有指示性物質(zhì)的多功能聚合物作為標(biāo)記物，加入到膜層析裝置的標(biāo)記物墊上。 這樣的多功能聚合物應(yīng)用在膜層析檢測(cè)時(shí)，樣本中的待測(cè)物質(zhì)經(jīng)過(guò)標(biāo)記物墊時(shí)就與相應(yīng)的 多功能聚合物反應(yīng)生成復(fù)合物，到達(dá)預(yù)先包被有與這種待測(cè)物反應(yīng)的檢測(cè)帶時(shí)，這個(gè)復(fù)合 物就與檢測(cè)帶反應(yīng)而被聚集，其聚集程度可通過(guò)酶促顯色、熒光檢測(cè)或顏色判斷來(lái)反映結(jié) 果。由于聚合物骨架對(duì)膜為惰性物質(zhì)，同時(shí)采用降低非特異吸附的特殊處理過(guò)程，其余未反 應(yīng)的多功能聚合物不會(huì)吸附在膜上，繼續(xù)泳動(dòng)到吸水材料中。 由于將反應(yīng)性物質(zhì)或指示性物質(zhì)共價(jià)偶聯(lián)到聚合物骨架上能改變反應(yīng)性物質(zhì)或 指示性物質(zhì)的表面性質(zhì)和溶解性，對(duì)于溶解性不佳的物質(zhì)參與各種水溶性液相反應(yīng)具有極 大的意義。而在檢驗(yàn)分析方面，作為通用試劑起到放大免疫反應(yīng)的作用。具體原理是把 抗原或抗體等反應(yīng)性物質(zhì)與色素、熒光物質(zhì)、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)等指示性物質(zhì)通過(guò)化 學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方式偶聯(lián)到聚合物骨架上制備成復(fù)合物，這種復(fù)合物既有多重反應(yīng)基 團(tuán)，又可以按不同需要添加上大量的指示性物質(zhì)，因此能增加了免疫層析反應(yīng)的靈敏度和 特異性，提高反應(yīng)的準(zhǔn)確性。同時(shí)又保留了膜層析技術(shù)的快速、便利、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)勢(shì)，形成一種 全新的集高靈敏度、高特異性、快速可靠于一體的免疫層析檢測(cè)新技術(shù)。 本發(fā)明以多功能聚合物替代膠體金作為標(biāo)記物，取得了非常理想的結(jié)果，在不降 低特異性的情況下，靈敏度得到大幅度提高。多功能聚合物不但能避免由于膠體金穩(wěn)定性
4差、難以標(biāo)記小分子和標(biāo)記特異性差的缺點(diǎn)，而且還能提高蛋白質(zhì)(多肽)的穩(wěn)定性，使得 檢測(cè)試劑的有效期更長(zhǎng)，檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確和可靠。很好地解決了現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)中存在的 快速檢測(cè)與高靈敏度之間的矛盾，而且，通過(guò)多重標(biāo)記，能同時(shí)進(jìn)行多重項(xiàng)目的檢測(cè)。符合 現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展方向，具有突出的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。


下面將結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，附圖中
圖1是本發(fā)明實(shí)施例1多功能聚合物的制備工藝流程圖。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例2免疫檢測(cè)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例l，免疫層析檢測(cè)方法為樣品在纖維制成的膜上泳動(dòng)，樣品中的待測(cè)物先 與膜上的標(biāo)記物反應(yīng)，在毛細(xì)作用下泳動(dòng)到檢測(cè)帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng)，顯色；所述標(biāo)記物為 反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物，所述檢測(cè)帶包被或化 學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
—、多功能聚合物的制備 如圖1所示是本發(fā)明實(shí)施例的多功能聚合物的制備工藝流程圖，以抗體為反應(yīng)性 物質(zhì)，以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)為指示性物質(zhì)舉例說(shuō)明。 1、 HRP-葡聚糖的制備首先在中性條件下，使用過(guò)碘酸鈉法將作為聚合物骨架的 葡聚糖活化。稱取10mg葡聚糖，溶于0.01mol/L pH7. 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)中，加入 0. 15mol/L的過(guò)碘酸鈉溶液0. 5ml，25t:反應(yīng)60min。脫鹽柱除去未反應(yīng)的過(guò)碘酸鈉后，再加 入10mg的聯(lián)氨(_NH2-NH2_) ， 25"避光反應(yīng)30min。對(duì)0. Olmol/L的磷酸鹽緩沖液充分透析， 形成氨基化葡聚糖；同樣采用過(guò)碘酸鈉法活化HRP，稱取10mg HRP溶于1.0ml新鮮配制的 0. lmol/L的NaHC03溶液中，加入0. 15mol/L的過(guò)碘酸鈉溶液0. 5ml，25t:避光反應(yīng)30min， 脫鹽柱除去未反應(yīng)的過(guò)碘酸鈉后，形成醛基化的HRP ;將收集到的有顏色液體全部加入到 上述氨基化的葡聚糖中，25。C避光反應(yīng)120min，加入4. Omg/ml的硼氫化鈉0. 4ml， 25。C避光 反應(yīng)60min，對(duì)0. Olmol/L的磷酸鹽緩沖液充分透析，就形成HRP-葡聚糖。
由于葡聚糖分子量較大，活化的位點(diǎn)多，使之帶上大量的氨基，并且由于葡聚糖分 子為長(zhǎng)鏈狀，因此每個(gè)骨架分子能偶聯(lián)上10個(gè)以上的辣根過(guò)氧化物酶(HRP) ， HRP-葡聚糖 還可以偶聯(lián)熒光物質(zhì)或染料分子，可偶聯(lián)IOO個(gè)以上的熒光物質(zhì)或染料分子。偶聯(lián)完成后 使用乙醇胺對(duì)活性基團(tuán)進(jìn)行封閉。 2、抗體使用蛋白酶消化及還原取10mg抗體，用70mmol/L的醋酸鹽緩沖液調(diào)整 pH4. 2左右，加入1. Omg的胃蛋白酶，37。C水浴反應(yīng)16小時(shí)，用1. Omol/L的Tris緩沖液調(diào) 整pH8. 0左右，上預(yù)先使用0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液平衡的Superdex 75分子篩柱，收集 第一洗脫峰，濃縮到5mg/ml，即得到抗體片段F(ab' )2 ;然后按照每毫升上述F(ab' )2加入 0. lmol/L的二巰基蘇糖醇(DTT)O. Olml的比例混合F(ab' ) 2和DTT， 37。C水浴反應(yīng)90min， 脫鹽柱脫鹽后就形成含有巰基的抗體片段(Fab'-SH)。此過(guò)程還可使用交聯(lián)劑法活化抗體 片段，形成F(ab' )2-SH。 3、 HRP-葡聚糖使用交聯(lián)劑活化把步驟1中制備的HRP-葡聚糖濃縮成約為5mg/
5ml的濃度，每毫升加入配制好的濃度為10mg/ml的異雙功能交聯(lián)劑GMBS (N_ y-Maleimidob utyryloxy-oxysuccinimide ester) 0. lml，25。C避光反應(yīng)120min，脫鹽柱脫鹽后，收集第一 峰即為帶有馬來(lái)酰亞胺活性基團(tuán)的HRP-葡聚糖。 4、把步驟2的產(chǎn)物Fab' _SH和步驟3的產(chǎn)物帶有馬來(lái)酰亞胺活性基團(tuán)的HRP_葡
聚糖按照質(zhì)量比l : 1混合，25t:避光反應(yīng)120min，加入甘氨酸50mg25t:避光反應(yīng)60min
以封閉活性基團(tuán)。最終完成反應(yīng)性物質(zhì)與聚合物的連接，得到的多功能聚合物。 這樣制備的多功能聚合物外圍帶有反應(yīng)性物質(zhì)，內(nèi)側(cè)帶有指示性物質(zhì)，有利于多
功能聚合物參與各種生物學(xué)反應(yīng)。對(duì)于含有-m^的聚合物骨架可直接使用雙功能或三功
能交聯(lián)劑與指示性物質(zhì)和反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)，形成多功能聚合物。 二、反應(yīng)性聚合物的制備 以抗體為反應(yīng)性物質(zhì)，多聚賴氨酸為聚合物骨架，采用交聯(lián)劑法制備反應(yīng)性聚合 物。 1、抗體的還原把抗體置于0. lmol/L pH7. 2的PBS中，調(diào)整濃度為10mg/ml，加入 終濃度10mmol/L的EDTA ;每毫升抗體加入6mg的P -巰基乙胺，攪拌溶解，37。C保溫90min。 過(guò)S印hadex G-25或類似的脫鹽柱，測(cè)定在280nm的吸收峰來(lái)確定抗體的位置，收集的抗體 即是帶有-SH的抗體片段。 2、多聚賴氨酸的活化把多聚賴氨酸配制成10mg/ml的濃度，在每毫升這樣的多 聚賴氨酸中加入配制好的濃度為10mg/ml的異雙功能交聯(lián)劑GMBS(N-y-Maleimidobutyry loxy-oxysuccinimide ester) 0. lml，25。C避光反應(yīng)120min，脫鹽柱脫鹽后，收集第一峰即 為帶有馬來(lái)酰亞胺活性基團(tuán)的多聚賴氨酸。 3、反應(yīng)性聚合物的生成把步驟1產(chǎn)生的帶有-SH的抗體片段與步驟2的產(chǎn)物活 化的多聚賴氨酸按照質(zhì)量比4 : 1的比例混合，25t:避光反應(yīng)120min，過(guò)Superdex 200分 子篩除去未結(jié)合的抗體，收集第一洗脫峰即為反應(yīng)性聚合物。
名詞說(shuō)明 過(guò)碘酸鈉法是一種化學(xué)修飾方法，把-OH氧化為-CHO，再在堿性條件下與-NH2 反應(yīng)并還原生成酰胺鍵的連接方法，是傳統(tǒng)的糖類與蛋白質(zhì)連接技術(shù)，在此不再贅述。
交聯(lián)劑法是一種化學(xué)修飾方法，將交聯(lián)劑作為橋鏈把不同物質(zhì)相連接并生成長(zhǎng) 度不一的伸展臂。為現(xiàn)有技術(shù)，在此不再贅述。 生物交聯(lián)主要是指通過(guò)基因工程等手段在細(xì)菌或細(xì)胞內(nèi)把兩類物質(zhì)連接在一起 的方法。生物交聯(lián)為現(xiàn)有技術(shù)，在此不再贅述。 化學(xué)修飾或生物交聯(lián)方法還包括EDC法，EDC法是利用碳二亞胺(EDC)或其衍生 物活化羧酸，使能與-NH2反應(yīng)，為現(xiàn)有技術(shù)，在此不再贅述。 包被把具有反應(yīng)性的蛋白質(zhì)或核酸點(diǎn)樣于檢測(cè)帶位置，干燥后，使用白蛋白或是 酪蛋白溶液封閉未結(jié)合位點(diǎn)，這個(gè)過(guò)程稱之為包被。包被的原理一般是物理吸附過(guò)程，也可 使用化學(xué)交聯(lián)方法。 本發(fā)明免疫膜層析方法可以從兩個(gè)層面來(lái)提高靈敏度，首先聚合物骨架上偶聯(lián) 多個(gè)參與反應(yīng)的反應(yīng)性物質(zhì)，增加了反應(yīng)性物質(zhì)的相對(duì)濃度，而膜層析能提高反應(yīng)性物質(zhì) 接觸的機(jī)會(huì)，使得反應(yīng)靈敏度增加，另外，每個(gè)聚合物骨架能帶有10個(gè)以上的指示性物質(zhì) (酶、熒光物質(zhì)或是更多的染料分子)，提高了檢測(cè)的靈敏度。膜層析中的膜可保證多功能
6聚合物能在其中正常泳動(dòng)，而聚合物骨架(如葡聚糖) 一般是層析惰性物質(zhì)，不會(huì)吸附到膜
上，保證了反應(yīng)的特異性。用反應(yīng)性聚合物進(jìn)行包被增加了包被量，進(jìn)一步增加了靈敏度。
聚合物骨架上可以偶聯(lián)上多種反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)，膜上可以包被多重反應(yīng)帶，執(zhí)行
多種反應(yīng)，并在膜上不同位置進(jìn)行定位顯示，故可同時(shí)檢測(cè)多種待測(cè)物。 實(shí)施例2，免疫層析裝置下面以丙型肝炎并HCV感染檢測(cè)試劑盒為例。 如圖2所示，丙型肝炎并HCV感染檢測(cè)試劑盒包括膜基體，膜基體由下部的聚酯膜
IO和上部的層析膜11組成，從膜基體的層析膜11 一端依次設(shè)置有樣品墊1、承載由反應(yīng)性
物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊2、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測(cè)帶3、
吸水墊4。 標(biāo)記物為使用HCV抗原片段或是HCV核心抗體作為反應(yīng)性物質(zhì)，以辣根過(guò)氧化物 酶作為指示性物質(zhì)，偶聯(lián)在聚合物骨架 一葡聚糖上形成的多功能聚合物，所述的檢測(cè)帶為 多條，分別包被有不同片段的HCV抗原或HCV核心抗體。 那么根據(jù)檢測(cè)帶顯示的結(jié)果就可以得出樣本中含有抗體所針對(duì)的片段類型或是 否含有核心抗原。通過(guò)對(duì)多功能聚合物免疫層析法同步檢測(cè)HCV抗原抗體試劑盒技術(shù)指標(biāo) 的檢測(cè)，并與ELISA和膠體金試劑作比較，結(jié)果見(jiàn)下表1 : 表1 :多功能聚合物免疫層析法同步檢測(cè)HCV抗原抗體與ELISA和膠體金的比較
ELISA檢測(cè)法膠體金檢測(cè)法本發(fā)明
靈敏度抗原檢測(cè)10pg100pg10pg
抗體檢測(cè)2.0ncu2.0ncu2.0ncu
特異性抗原檢測(cè)100%100%100%
抗體檢測(cè)100%100%100%
臨床符合 率(120份)抗原檢測(cè)110/12095/120119/120
抗體檢測(cè)102/12098/120120/120
抗原抗體辰步分別檢測(cè)否否倉(cāng)巨
抗體分片斷檢測(cè)否能能
檢測(cè)時(shí)間60~120min15min15min
操作繁瑣簡(jiǎn)便簡(jiǎn)便 表1中，本發(fā)明同步檢測(cè)HCV抗原抗體試劑盒的抗原檢測(cè)靈敏度為10pg，達(dá)到 ELISA的水平，遠(yuǎn)高于膠體金的檢測(cè)水平，抗體檢測(cè)靈敏度由于要求不高，三種試劑盒都為 2. Oncu ;特異性方面，本發(fā)明同步檢測(cè)HCV抗原抗體試劑盒也都達(dá)到100% ;對(duì)于臨床標(biāo) 本的檢測(cè)，與進(jìn)口試劑盒(抗體檢測(cè)使用美國(guó)Chiron公司的RIBA試劑盒，抗原檢測(cè)為美 國(guó)0rtho公司的核心抗原檢測(cè)試劑盒)比較，此法的符合率分別高達(dá)99. 2%和100% ;高 于ELISA試劑盒(抗原檢測(cè)為91. 7%，抗體檢測(cè)為85% )和膠體金試劑盒(抗原檢測(cè)為
779. 2%，抗體檢測(cè)為81. 7%，)。同時(shí)，ELISA試劑盒在一個(gè)測(cè)試中只能進(jìn)行單一檢測(cè)抗原 或抗體，即使同時(shí)檢測(cè)也不能分片斷檢測(cè)，而膠體金雖然能進(jìn)行分片斷檢測(cè)，但不能同步檢 測(cè)。另外在檢測(cè)時(shí)間和操作簡(jiǎn)便性方面，本發(fā)明同步檢測(cè)HCV抗原抗體試劑盒也具有明顯 的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。 此外，本發(fā)明還能進(jìn)行不同病毒感染的聯(lián)合快速檢測(cè)，如乙型肝炎病毒(HBV)、丙 型肝炎病毒(HCV)、愛(ài)滋病毒(HIV)、梅毒等輸血檢測(cè)項(xiàng)目的聯(lián)合快速檢測(cè)，只需要分別把 HBV表面抗體、HCV核心抗原、HIV抗原、梅毒抗原分別偶聯(lián)在不同的聚合物骨架上，并且在 層析膜上不同區(qū)域內(nèi)包被上與標(biāo)記物抗體(原)配對(duì)的HBV表面抗體、HCV核心抗原、HIV 抗原、梅毒抗原等形成不同的檢測(cè)帶，當(dāng)樣本中含有待檢物質(zhì)時(shí)就會(huì)在相應(yīng)的檢測(cè)帶檢測(cè) 出來(lái)。
權(quán)利要求
一種免疫層析檢測(cè)裝置，包括膜基體，在膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測(cè)帶、吸水墊，其特征在于，所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物，所述檢測(cè)帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫層析檢測(cè)裝置，其特征在于，所述聚合物骨架為帶 有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個(gè)官能團(tuán)的聚合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析檢測(cè)裝置，其特征在于，所述聚合物骨架為葡聚糖、 多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。
4. 免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，樣品在纖維或凝膠制成的膜上泳動(dòng)，樣品中的待測(cè) 物首先通過(guò)標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng)，然后在毛細(xì)作用下泳動(dòng)到檢測(cè)帶與反應(yīng)性物質(zhì) 反應(yīng)，顯色或通過(guò)指示物質(zhì)被檢出；所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物 骨架上形成的多功能聚合物，所述檢測(cè)帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上反應(yīng)性物質(zhì)或是有 反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，所述聚合物骨架為帶 有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個(gè)官能團(tuán)的聚合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，所述聚合物骨架為葡聚糖、 多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，反應(yīng)性物質(zhì)、指示性物 質(zhì)通過(guò)化學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方法偶聯(lián)到聚合物骨架上。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，所述反應(yīng)性聚合物為聚合 物骨架上偶聯(lián)至少一個(gè)反應(yīng)性物質(zhì)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫層析檢測(cè)方法，其特征在于，所述多功能聚合物為聚合 物骨架上偶聯(lián)至少一個(gè)反應(yīng)性物質(zhì)和至少一個(gè)指示性物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種免疫層析檢測(cè)裝置及其檢測(cè)方法，裝置包括膜基體，膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測(cè)帶、吸水墊，標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物，檢測(cè)帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。檢測(cè)方法樣品在膜上泳動(dòng)，待測(cè)物先通過(guò)標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng)，然后在毛細(xì)作用下泳動(dòng)到檢測(cè)帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng)，顯色或通過(guò)指示物質(zhì)被檢出；本發(fā)明提供一種高靈敏度、高特異性的免疫層析裝置及一種高靈敏、快速可靠的免疫層析檢測(cè)方法。
文檔編號(hào)G01N33/533GK101769919SQ200910104908
公開(kāi)日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2009年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月6日
發(fā)明者買制剛, 盧海蓉, 姜麗華, 易俊波, 李凌云, 林楓, 王曉紅, 陳少娟, 雷明軍, 黃德新 申請(qǐng)人:深圳大學(xué)