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專利名稱：同型半胱氨酸診斷試劑盒及同型半胱氨酸濃度測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種同型半胱氨酸診斷試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定同型半胱氨酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
測定血漿中同型半胱氨酸的方法有很多種，包括高效液相色譜法(HPLC)、氨基酸分析儀測定法、離子色譜法、酶聯(lián)免疫分析法(EIA)、毛細管氣相色譜-質(zhì)譜，熒光偏振免疫分析(FPIA)、電化學(xué)法及酶法等等。
1.高效液相色譜法(HPLC)是經(jīng)典的參考方法，但其有操作比較復(fù)雜，試驗耗時比較長，試驗數(shù)據(jù)變異比較大的缺點，在臨床應(yīng)用方面逐漸被酶聯(lián)免疫分析法、熒光偏振分析法和酶法所取代。高效液相色譜法是先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成還原形式，然后與熒光劑進行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物，將衍生后的樣品進行色譜分析。因色譜固定相對不同物質(zhì)的吸附力不同，因此流動相將其洗脫下來的次序也不同，根據(jù)這一原理將樣品中的不同物質(zhì)分開，以熒光檢測器檢測洗脫下同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強度，將其與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進行比較和計算，就可以測定血總同型半胱氨酸的水平。
2.酶聯(lián)免疫分析法(EIA)是臨床上測定同型半胱氨酸水平的常用方法，其特點是操作比較方便、快捷，重復(fù)性好，方法穩(wěn)定可靠。缺點是大部分操作還是手工操作，比較耗時等。酶聯(lián)免疫分析法其基本分析原理先使用酶將血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成S-腺苷-L-同型半胱氨酸，然后加入酶標(biāo)的抗S-腺苷-L-同型半胱氨酸的單克隆或多克隆抗體，采用競爭結(jié)合的原理，將不同水平的標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)抗體競爭結(jié)合，然后以顯色試劑和終止試劑分別進行顯色和終止，制作出同型半胱氨酸濃度與發(fā)色強度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品也按相同步驟處理，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。
3.離子色譜法主要用于實驗研究，臨床上較少使用。其基本分析原理是色譜分析的一種，主要是其固定相采用離子交換物質(zhì)，根據(jù)其對不同離子的吸附力不同可將同型半胱氨酸與其它物質(zhì)分開進行測定。
4.毛細電泳法主要用于實驗研究，有在臨床使用的報道。其特點與高效液相色譜方法相似，如其有操作比較復(fù)雜、試驗耗時較長和試驗數(shù)據(jù)變異比較大的缺點。基本分析原理先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成還原形式，然后與熒光試劑進行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物，將衍生后的樣品進行毛細電泳分析。將樣品放置于10千伏左右的高壓電場中，因為各種物質(zhì)所帶電荷不同，其等電點也不相同，因此其在電場中的遷移速度也就不同，根據(jù)這一原理可將同型半胱氨酸與樣品中的其它物質(zhì)分開，再以熒光檢測器檢測同型半胱氨酸-熒光物質(zhì)復(fù)合物的熒光強度，將其與標(biāo)準(zhǔn)品/內(nèi)標(biāo)的比值進行比較和計算，就可以測定總同型半胱氨酸的水平。
5.熒光偏振法是臨床上測定同型半胱氨酸水平的比較好的方法，該方法完全自動化儀器分析，具有快速、準(zhǔn)確、方便的優(yōu)點。其基本分析原理樣品中游離同型半胱氨酸和抗單克隆抗體相結(jié)合的同型半胱氨酸的熒光偏振強度不同，將樣品、標(biāo)準(zhǔn)品與標(biāo)抗體競爭結(jié)合，采用競爭結(jié)合的原理制作出同型半胱氨酸濃度與熒光偏振強度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。
6.酶法是因應(yīng)市場需求而新開發(fā)出來的測試方法，目前國內(nèi)有多項專利申請CN98807531.8利用同型半胱氨酸酶來測量樣品中同型半胱氨酸含量；CN200410016789.6利用同型半胱氨酸轉(zhuǎn)甲基酶(E.C.2.1.1.10)及腺苷同型半胱氨酸酶(E.C.3.3.1.1)的循環(huán)擴增作用，再加上腺苷脫氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶等，或腺苷脫氨酶、谷氨酸脫氫酶等顯色反應(yīng)測定同型半胱氨酸含量；CN200510053210.8利用L-蛋氨酸γ-裂解酶作用于同型半胱氨酸使之產(chǎn)生硫化氫后再與瑩光化合物DMPD2HCl作用產(chǎn)生熒光，該方法使用全自動熒光分析儀測試，具有快速、準(zhǔn)確、方便的優(yōu)點。其基本分析原理用基因重組酶將同型半胱氨酸分解，所形成之硫化氫產(chǎn)物再與熒光顯色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成可測量之熒光化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提出一種利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶聯(lián)法(Couple Reaction)技術(shù)，計量通過酶聯(lián)反應(yīng)生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亞胺色原(Quioneimine dye)，所導(dǎo)致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定同型半胱氨酸濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的同型半胱氨酸診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行同型半胱氨酸濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明同型半胱氨酸濃度測定方法原理如下同型半胱氨酸+二甲基锍基醋酸鹽噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶S-甲基硫代乙醇酸+蛋氨酸蛋氨酸+氧+水氨基酸氧化酶含氧酸+氨+過氧化氫過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水這種方法應(yīng)用噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(偶)聯(lián)合氨基酸氧化酶、過氧化物酶酶促反應(yīng)終點比色法。噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶酶解同型半胱氨酸反應(yīng)產(chǎn)生蛋氨酸，蛋氨酸再通過(偶)聯(lián)合氨基酸氧化酶、過氧化物酶的作用，最終將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400-700nm(根據(jù)還原型色原體組合的不同而定)波長處，測定染料，吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亞胺色原(Quioneimine dye)，含量高低的光吸收大小，通過測量400-700nm(根據(jù)還原型色原體組合的不同而定)處吸光度上升的程度/速度，得出同型半胱氨酸濃度大小測定結(jié)果。
實驗表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，如下成分關(guān)系的本發(fā)明同型半胱氨酸診斷試劑盒較為理想
緩沖液 100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L二甲基锍基醋酸鹽 12mmol/L噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶8000U/L氨基酸氧化酶 12000U/L過氧化物酶 30000U/L還原型色原體組合A 6mmol/L抗干擾劑 30mmol/L所述還原型色原體組合(Chromogen)可以是下列28個組合中的任一個組合3-甲基-2-苯噻唑酮腙石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N，N-雙乙基-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，4-雙氯石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3，5-雙氯石碳酸磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽3-甲基-2-苯噻唑酮腙仨溴羥基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙雙甲基苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)3-甲基-2-苯噻唑酮腙4-羥基-3-甲氧基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3-甲基-乙基-羥基苯胺4-氨基抗砒石碳酸4-氨基抗砒N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺4-氨基抗砒N，N-雙乙基-m-甲苯胺4-氨基抗砒2，4-雙氯石碳酸4-氨基抗砒2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸4-氨基抗砒3，5-雙氯石碳酸磺酸4-氨基抗砒3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸4-氨基抗砒N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽4-氨基抗砒仨溴羥基苯甲酸4-氨基抗砒雙甲基苯胺4-氨基抗砒N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺4-氨基抗砒2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)4-氨基抗砒4-羥基-3-甲氧基苯甲酸4-氨基抗砒3-甲基-乙基-羥基苯胺本發(fā)明的同型半胱氨酸含量診斷試劑盒可以是單劑，包括緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽、噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、氨基酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合、抗干擾劑。
試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑，更有利于消除內(nèi)外源氨基酸污染試劑1緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合、抗干擾劑。
試劑2緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽、噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶。
二甲基锍基醋酸鹽、噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、氨基酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑，不但有利于消除內(nèi)外源氨基酸污染，還有利于試劑的穩(wěn)定試劑1緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶。
試劑2緩沖液、穩(wěn)定劑、過氧化物酶、還原型色原體組合、抗干擾劑。
試劑3緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽、噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶。
二甲基锍基醋酸鹽、噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、氨基酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例子對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例一本實施例的同型半胱氨酸診斷試劑為單試劑，包括三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液 100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L二甲基锍基醋酸鹽 12mmol/L噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶6000U/L
氨基酸氧化酶10000U/L過氧化物酶 30000U/L4-氨基抗砒 2mmol/L石碳酸 10mmol/L試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈水，復(fù)溶后使用。
在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時間10分鐘，測試主波長505nm，測試副波長600nm，被測同型半胱氨酸樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，檢測方法為終點法，延遲時間大約0分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測主波長505nm吸光度上升的程度，從而測算出同型半胱氨酸的濃度大小。
實施例二本實施例的同型半胱氨酸診斷試劑為雙試劑，包括試劑1三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L氨基酸氧化酶 15000U/L過氧化物酶 30000U/L2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸 0.2mmol/L試劑2三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液100mmol/L
緩沖液 100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L二甲基锍基醋酸鹽 16mmol/L噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶 10000U/L4-氨基抗砒 0.6mmol/L試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體雙試劑，可以直接使用。
在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時間10分鐘，測試主波長546nm，測試副波長600nm，被測同型半胱氨酸樣品與試劑的體積比例為1/20，反應(yīng)方向為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，檢測方法為終點法，延遲時間大約0分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測主波長546nm吸光度上升的程度，從而測算出同型半胱氨酸的濃度大小。
實施例三同型半胱氨酸診斷試劑為三試劑，包括試劑1三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L氨基酸氧化酶 14000U/L3-甲基-2-苯噻唑酮腙 0.6mmol/L試劑2三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L過氧化物酶 40000U/L
雙甲基苯胺 2mmol/L試劑3三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液100mmol/L穩(wěn)定劑 50mmol/L二甲基锍基醋酸鹽 8mmol/L噻亭-同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶 8000U/L試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體三試劑，可以直接使用。
在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時間10分鐘，測試主波長578nm，測試副波長660nm，被測同型半胱氨酸樣品與試劑的體積比例為1/30，反應(yīng)方向為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，檢測方法為終點法，延遲時間大約0分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測主波長578nm吸光度上升的程度，從而測算出同型半胱氨酸的濃度大小。
申請人經(jīng)過實驗驗證，采用以上發(fā)明內(nèi)容中記載的其他各種還原型色原體組合均能達到本發(fā)明的目的，鑒于測定步驟等情況與以上實施例類同，不另一一例舉。
總之，實驗證明，采用本發(fā)明的測定方法完全可以通過可見光分析儀器得出所需的測定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)外源物質(zhì)量污染。
權(quán)利要求
1.一種同型半胱氨酸濃度測定方法，其方法原理如下同型半胱氨酸+二甲基锍基醋酸鹽噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶S-甲基硫代乙醇酸+蛋氨酸蛋氨酸+氧+水氨基酸氧化酶含氧酸+氨+過氧化氫過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水S-甲基硫代乙醇酸(S-methylthioglycolate)含氧酸(oxo-acid)將最終反應(yīng)物置于可見光分析儀下，檢測400-700nm處直接反映吲嗒胺色原或醌亞胺色原含量高低的光吸收程度，得出同型半胱氨酸濃度大小測定結(jié)果。
2.一種同型半胱氨酸診斷試劑盒，主要成分包括緩沖液 20-500mmol/L穩(wěn)定劑 1-50mmol/L二甲基锍基醋酸鹽1-20mmol/L噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶200-500000U/L氨基酸氧化酶200-500000U/L過氧化物酶 500-500000 U/L還原型色原體組合0.1-20mmol/L抗干擾劑1-50mmol/L其特征在于試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述同型半胱氨酸診斷試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽(Dimethylsulfonioacetate)、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(thetin homocysteineS-methyltransferase EC 2.1.1.3)、氨基酸氧化酶(Amino Acid OxidaseEC 1.4.3.2、EC 1.4.3.3)、過氧化物酶(EC 1.11.1.7)、還原型色原體組合及抗干擾劑組成單劑試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述同型半胱氨酸診斷試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽(Dimethylsulfonioacetate)、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(thetin-homocysteineS-methyltransferase EC 2.1.1.3)、氨基酸氧化酶(Amino Acid OxidaseEC 1.4.3.2、EC 1.4.3.3)、過氧化物酶(EC 1.11.1.7)、還原型色原體組合及抗干擾劑組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合及抗干擾劑組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶組成。二甲基锍基醋酸鹽、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、氨基酸氧化酶、過氧化物酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述同型半胱氨酸診斷試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽(Dimethylsulfonioacetate)、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(thetin-homocysteineS-methyltransferase EC 2.1.1.3)、氨基酸氧化酶(Amino Acid OxidaseEC 1.4.3.2、EC 1.4.3.3)、過氧化物酶(EC 1.11.1.7)、還原型色原體組合及抗干擾劑組成多劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、過氧化物酶(EC1.11.1.7)、還原型色原體組合及抗干擾劑組成；試劑3，由緩沖液、穩(wěn)定劑、二甲基锍基醋酸鹽、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶組成。二甲基锍基醋酸鹽、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶、氨基酸氧化酶及抗干擾劑在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述同型半胱氨酸診斷試劑盒，其特征在于還包括穩(wěn)定劑1-4000mmol/L或0.1％-100％體積比。所述穩(wěn)定劑為硫酸銨(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(PropyleneGlycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐劑中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述同型半胱氨酸診斷試劑盒，其特征在于所述還原型色原體組合可以是下列28個組合中的任一個組合3-甲基-2-苯噻唑酮腙石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N，N-雙乙基-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，4-雙氯石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3，5-雙氯石碳酸磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽3-甲基-2-苯噻唑酮腙仨溴羥基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙雙甲基苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)3-甲基-2-苯噻唑酮腙4-羥基-3-甲氧基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3-甲基-乙基-羥基苯胺4-氨基抗砒石碳酸4-氨基抗砒N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺4-氨基抗砒N，N-雙乙基-m-甲苯胺4-氨基抗砒2，4-雙氯石碳酸4-氨基抗砒2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸4-氨基抗砒3，5-雙氯石碳酸磺酸4-氨基抗砒3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸4-氨基抗砒N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽4-氨基抗砒仨溴羥基苯甲酸4-氨基抗砒雙甲基苯胺4-氨基抗砒N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺4-氨基抗砒2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)4-氨基抗砒4-羥基-3-甲氧基苯甲酸4-氨基抗砒3-甲基-乙基-羥基苯胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種同型半胱氨酸診斷試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定同型半胱氨酸濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。本發(fā)明的試劑盒主要成分包括緩沖液、二甲基锍基醋酸鹽(dimethylsulfonioacetate)、噻亭—同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(thetin－h(huán)omocysteine S－methyltransferase EC2.1.1.3)、氨基酸氧化酶(Amino Acid Oxidase EC 1.4.3.2、EC 1.4.3.3)、過氧化物酶(EC 1.11.1.7)、還原型色原體組合、穩(wěn)定劑及抗干擾劑，這些成分可以配成單劑試劑盒、雙劑試劑盒或三劑試劑盒；通過一系列的酶促反應(yīng)，最終將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400－700nm波長處，測定染料含量的高低，進而直接反映出同型半胱氨酸濃度的大小。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明不僅便于推廣應(yīng)用，而且由于所生成的染料均有較高的摩爾消光系數(shù)，因此靈敏度高、精確度好。
文檔編號G01N33/50GK101089607SQ200610085378
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月12日
發(fā)明者王爾中 申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司