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專利名稱：同型半胱氨酸免疫膠體金檢測(cè)試紙條及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)血液中HCY水平的試紙條及其制備方法， 屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域。背果技術(shù)同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是人體內(nèi)蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，同時(shí)參與了體內(nèi)轉(zhuǎn)硫 化作用途徑。Hcy通過B12在5-甲基四氫葉酸存在下經(jīng)葉酸循環(huán)重新甲基化為蛋氨酸，隨后 產(chǎn)生的5,10-二甲基四氫葉酸被甲基四氨葉酸還原酶(MTHFR)還原成5-甲基四氫葉酸。Hcy也 能被甘氨酸三甲內(nèi)鹽重甲基化為蛋氨酸。重甲基化在肝臟及腎臟中完成，蛋氨酸循環(huán)中，食 物中蛋氨酸轉(zhuǎn)化為S-腺苷甲硫氨酸(SAM)， SAM以作為甲基轉(zhuǎn)移酶甲基組供體的底物，在甲 基轉(zhuǎn)移酶作用下產(chǎn)生唯一產(chǎn)物S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)， SAH經(jīng)SAH水解酶水解為Hcy 及腺苷。如因各種原因引起血Hcy濃度升高，可發(fā)生Hcy尿癥或高Hcy血癥，并對(duì)動(dòng)脈血管造成 傷害。研究認(rèn)為Hcy是一新的血管系統(tǒng)疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，與心血管疾病、腦梗塞、外周 血管性疾病有關(guān)，也與葉酸或維生素B12、 B6的缺乏相關(guān)。六十年代末，McCully從病理上 發(fā)現(xiàn)高胱氨酸尿癥和胱硫醚尿癥患者早期即可發(fā)生全身動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成，七十年代 初他又通過動(dòng)物模型證實(shí)同型半胱氨酸血中蓄積可導(dǎo)致類似血管損害，八+年代人們提出高 同型半胱氨黢血癥是動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，尤其是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化 和心肌梗塞的危險(xiǎn)指標(biāo)，它的濃度升高程度與疾病的危險(xiǎn)性成正比，被譽(yù)為"心臟新殺手"。 目前不少研究表明高HCY是腦血管疾病危險(xiǎn)因素指標(biāo)，是缺血性腦血管病、腦梗死的獨(dú)立危 險(xiǎn)因子，高HCY和腦卒中疾病發(fā)生密切相關(guān)。HCY檢測(cè)目前主要采用的技術(shù)方法有高效液相(HPLC)方法、熒光偏振免疫檢測(cè) (FPLA)方法、酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)和化學(xué)發(fā)光法等。高效液相(HPLC)方法操作比 較復(fù)雜，試驗(yàn)耗時(shí)比較長(zhǎng)，且試驗(yàn)數(shù)據(jù)變異比較大。熒光偏振免疫檢測(cè)(FPLA)方法檢測(cè)費(fèi) 時(shí)，須配備專用全自動(dòng)熒光分析儀器，設(shè)備昂貴，不宜普及。酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)大部 分操作為手工操作，比較耗時(shí)，定量檢測(cè)需配備儀器，必須有專門的實(shí)驗(yàn)室。化學(xué)發(fā)光法， 檢測(cè)時(shí)間在2h以上，且價(jià)格昂貴。以上方法均不適于在基層檢驗(yàn)場(chǎng)所應(yīng)用。免疫膠體金層析 技術(shù)操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏和特異性好，用于同型半胱氨酸的快速檢測(cè)，有益于同型半胱氨 酸基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢測(cè)的普及，此項(xiàng)技術(shù)雖然是一種較為成熟的技術(shù)，但對(duì)不同的抗原抗體統(tǒng)的應(yīng)用有差異，包括原料來源，試劑配制，生產(chǎn)工藝等都不同，需進(jìn)行新的設(shè)計(jì)和試驗(yàn)。 目前國(guó)內(nèi)外均未查到有用于檢測(cè)HCY的免疫膠體金層析快速診斷試紙條，包括文獻(xiàn)報(bào)道和 發(fā)明專利。 發(fā)明內(nèi)容為克服現(xiàn)有HCY檢測(cè)技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種快速檢測(cè)HCY的試紙條。本發(fā)明根 據(jù)膠體金免疫層析技術(shù)特點(diǎn)和SAH抗原抗體系統(tǒng)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)新的原材料，試劑和工藝流程， 應(yīng)用本發(fā)明提供的試紙條檢測(cè)HCY水平，具有簡(jiǎn)單，快速，靈敏和特異性好等特點(diǎn)，15分 鐘以內(nèi)出結(jié)果，并且價(jià)格低，適用于基層檢測(cè)和臨床初篩。本發(fā)明所述試紙條是由底板(1)上依次接合吸水墊(2)、特定包被的硝酸纖維膜(3)、 涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體的玻璃纖維膠體金結(jié)合墊(6)、樣品墊(7)而組成的條形物；所述 玻璃纖維膠體金結(jié)合墊涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體為S腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體。檢測(cè)樣 品經(jīng)過樣品墊和結(jié)合墊再經(jīng)展析作用在NC膜上出現(xiàn)捕獲線和質(zhì)控線，用肉眼判斷結(jié)果。在 NC膜上僅僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線，結(jié)果為陽性，在NC膜上同時(shí)出現(xiàn)捕獲線和質(zhì)控線，結(jié)果為陰 性，不出現(xiàn)線條表示試紙條或測(cè)試卡失效。15分鐘內(nèi)出結(jié)果。本發(fā)明所述試紙條吸水墊為一種濾紙，包括吸水紙和濾油紙，切成要求大小直接使用。 貼在底板的末端，起吸水作用。本發(fā)明所述試紙條上特定包被的NC膜是一種專門用于膠體金試紙條的材料，由一層濾 膜和膠膜組成，成巻筒裝，NC膜上噴2條線，分別為捕獲線和質(zhì)控線，捕獲線噴涂的是S 腺苷同型半胱氨酸-牛血清白蛋白抗原，質(zhì)控線噴涂的是兔抗小鼠二抗；NC膜貼在底板的中 間，兩端分別與結(jié)合墊和吸水墊連接。本發(fā)明所述試紙條上結(jié)合墊為玻璃纖維紙，用含聚乙烯醇的硼酸緩沖液浸泡處理后，37 'C干燥過夜，噴涂上膠體金標(biāo)記的SAH單克隆抗體，再冷凍干燥，SAH單克隆抗體是針對(duì) SAH抗原表位，結(jié)合墊上與樣品墊銜接，下與NC膜銜接。本發(fā)明所述試紙條樣品墊為玻璃纖維紙，用含聚乙煤醇的硼酸緩沖液浸泡處理，緩沖液 PH為7.2，浸泡處理后，37'C干燥過夜，在試劑條中起過濾樣品的作用，位于結(jié)合墊上，貼 在底板上。本發(fā)明還提供上述試紙條在制備HCY診斷試紙條中的應(yīng)用，診斷試紙條還包括標(biāo)識(shí)條， 此標(biāo)識(shí)條為兩個(gè)帶有標(biāo)識(shí)的不干膠紙，分別粘貼在試紙條的兩端，帶有箭頭端是貼在樣品墊 和結(jié)合墊上，由此端浸入待測(cè)樣品，靠另一端的吸水墊的吸水作用，使樣品經(jīng)過NC膜。本發(fā)明還提供上述試紙條在制備HCY測(cè)試卡中的應(yīng)用，測(cè)試卡還包括塑料卡，此塑料 卡是一個(gè)用塑料特制的卡，由上下2片組成，上下片可嵌合在一起，下片主要有一個(gè)放試紙條的槽和與上片結(jié)合的卡齒，上片主要包括一個(gè)檢測(cè)孔、 一個(gè)樣品孔以及與下片結(jié)合的卡齒， 檢測(cè)孔旁邊分別印有T和C字樣，T表示捕獲線的位置，C表示質(zhì)控線的位置，檢測(cè)孔是觀 察結(jié)果的窗口，樣品孔是滴加樣品的位置。此塑料卡起保護(hù)試紙條的作用，并且更美觀，減 少污染和保護(hù)操作者的安全。本發(fā)明所述試紙條的制備方法，包括如下步驟1) SAH-BSA抗原制備將BSA、 SAH和偶聯(lián)劑于反應(yīng)液中室溫反應(yīng)，凝膠層析分離偶聯(lián)物，透析，濃縮，制成免疫抗原和包被抗原。2) SAH單抗制備以合成的SAH-BSA偶聯(lián)物免疫Balb/c小白鼠，經(jīng)多次基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫后，取小鼠 脾細(xì)胞與Sp2/0骨髄瘤細(xì)胞，利用PEG細(xì)胞融合技術(shù)制備SAHmAb，腹水?dāng)U增，分離純化。3) 膠體金的制備a量取一定量的洗液于潔凈的燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次酸洗液，煮沸5分鐘； b量取一定量的超純水于該燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次超純水，煮沸5分鐘； c棄去超純水，稱取適量三蒸水于該燒瓶中，加熱至沸騰，加入適量1%氯金酸，加熱 至沸騰；d攪拌下加入6-10毫升2%檸檬酸三鈉，沸騰5-10分鐘。4) 膠體金探針標(biāo)記將SAH單克隆抗體用0.005mol/L NaCl透析過夜，離心除去蛋白 沉淀。取膠體金100毫升，調(diào)節(jié)膠體金溶液PH值9.0，攪拌加入1毫升稀釋的SAH單克隆 抗體，再緩慢加入l毫升l(mBSA充分混勻，攪拌15分鐘，4°C 13000g/tnin離心40分鐘； 棄上清，加入工作液100毫升溶解；儲(chǔ)存條件4"保存。5) 制備檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條先將玻璃纖維膜放入質(zhì)量百分比濃度為1%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分比濃度為1%的 TX-100的碘酸鹽緩沖液中封閉30min， 37'C烘干。再將玻璃纖維膜浸泡于標(biāo)記SAH單克隆 抗體的膠體金探針中，真空干燥。將制備好的試劑條板上NC膜用噴膜機(jī)分別噴上捕獲抗原 (SAH-BSA偶聯(lián)抗原)和質(zhì)控抗體(兔抗Balb/c球蛋白抗體)。噴完后37'C干燥過夜。將吸 水墊、已包被的硝酸纖維膜(NC膜)、玻璃纖維膠體金結(jié)合墊、樣品墊、標(biāo)識(shí)條依次粘于底 板上，裁成細(xì)條，即成一種檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條。上述膠體金制備過程中，優(yōu)選三蒸水200毫升，氯金酸10毫升，檸樣酸三鈉7.5毫升。 上述膠體金探針標(biāo)記過程中，優(yōu)選加入10y。BSA后，再加入1毫升10%PEG20000充分 混勻，離心棄上清，加入工作液溶解。本發(fā)明的有益效果應(yīng)用本發(fā)明提供的試紙條檢測(cè)人體內(nèi)同型半胱氨酸水平，成本低廉， 操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏，且特異性好，不需要特殊檢測(cè)儀器設(shè)備，因此可廣泛應(yīng)用于各級(jí)醫(yī) 療檢驗(yàn)場(chǎng)所，尤其是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)，包括鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院等均可開展。本發(fā)明有益于高同型半胱 氨酸血癥的篩查的普及，進(jìn)而對(duì)于心腦血管事件發(fā)生的預(yù)防有極為重要的意義。


圖l為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖1:底板；2:吸水墊；3:特定包被的硝酸纖維膜；4:捕獲線；5:質(zhì)控線；6:結(jié)合墊；7: 樣品墊。圖2為本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果示意圖a:陰性；b:陽性；C:無效；4:捕獲線；5:質(zhì)控線。 圖3為本發(fā)明的試紙條外觀示意圖a:樣本墊；b:結(jié)合墊；C:捕獲線；d:質(zhì)控線；e:試紙條名稱圖4為本發(fā)明的測(cè)試卡外觀示意圖a:樣本孔；b:測(cè)試孔；T:捕獲線；C:質(zhì)控線。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容所作出的本 領(lǐng)域等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 實(shí)施例l:同型半胱氨酸(HCY)膠體金免疫試紙條制備方法，它包括如下步驟1、 SAH-BSA抗原制備-取適量BSA和SAH分別溶于15mlPBS錐形瓶中，各自磁力攪拌器攪拌10分鐘，將SAH 溶液加入BSA溶液中，邊加邊攪拌，再加入25%戊二醛，反應(yīng)5小時(shí)，凝膠層析分離偶聯(lián)物， 于PBS內(nèi)透析24h，濃縮。2、 SAH單抗制備以SAH-BSA偶聯(lián)物免疫Balb/c小鼠，經(jīng)多次基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫后，取小鼠脾細(xì)胞，將 脾細(xì)胞與Sp2/ 0骨髓瘤細(xì)胞，利用PEG細(xì)胞融合技術(shù)制備SAH mAb。將雜交瘇細(xì)胞注入小鼠雎腔，制備旗水，用層析法純化單克隆抗體。3、 膠體金的制備量取一定量的洗液于潔凈的250ml三角燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次酸洗液，煮沸5 分鐘；量取一定量的超純水于該燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次超純水，煮沸5分鐘；棄去 超純水，稱取200ml超純水于該燒瓶中，加熱至沸騰，加入r/。氯金酸10ml，邊煮邊攪拌， 加熱至沸騰；攪拌下加入2%檸樣酸三鈉10ml,沸水下快速攢拌，直到氯金酸溶液的顏色饅慢穩(wěn)定，呈紅色后，繼續(xù)沸騰7分鐘，制成小顆粒膠體金。4、 膠體金探針標(biāo)記將SAH單克隆抗體用0.005mol/LNaCl透析過夜，離心除去蛋白沉淀。取膠體金100毫 升，調(diào)節(jié)膠體金溶液PH值9.0，攪拌加入1毫升稀釋的SAH單克隆抗體，再加入1毫升10%BSA 充分混勻，緩慢加入，攪拌15分鐘，離心，條件4。C 13000g/min， 40分鐘；棄上清，加入 工作液100毫升溶解；儲(chǔ)存條件4'C保存。5、 制備檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條先將玻璃纖維膜放入質(zhì)量百分比濃度為1%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分比濃度為1%的TX-100的磷酸鹽緩沖液中封閉30min， 37'C烘干，再將玻璃纖維膜浸泡于標(biāo)記SAH單克隆抗體的膠體金探針中，真空干燥，將制備好的試劑條板上NC膜用噴膜機(jī)分別噴上捕獲抗原(SAH-BSA偶聯(lián)抗原)和質(zhì)控抗體(兔抗Balb/c球蛋白抗體)。噴完后37'C干燥過夜。將吸水墊、已包被的硝酸纖維膜、玻璃纖維膠體金結(jié)合墊、樣品墊依次粘于底板上，裁成細(xì)條，即成一種檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條。 實(shí)施例2:同型半胱氨酸(HCY)膠體金免疫試紙條制備方法，它包括如下步驟 SAH-BSA抗原及SAH單抗為實(shí)施例1制備。1、 膠體金的制備量取一定量的洗液于潔凈的250ml三角燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次酸洗液，煮沸5 分鐘；量取一定量的超純水于該燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次超純水，煮沸5分鐘；棄去 超純水，稱取200ml超純水于該燒瓶中，加熱至沸騰，加入r/。氯金酸10ml，邊煮邊攪拌， 加熱至沸騰；攪拌下加入2%檸様酸三鈉7.5ml，沸水下快速攪拌，直到氯金酸溶液的顏色慢 慢穩(wěn)定，呈紅色后，繼續(xù)沸騰9分鐘，制成中等大小的膠體金顆粒。2、 膠體金探針標(biāo)記將SAH單克隆抗體用0.005mol/LNaCl透析過夜，離心除去蛋白沉淀。取膠體金100毫 升，調(diào)節(jié)膠體金溶液PH值9.0，攪拌加入1毫升稀釋的SAH單克隆抗體，再加入1毫升10%BSA 充分混勻，再加入1毫升1(^PEG20000充分混勻，緩慢加入，攪拌15分鐘，離心，條件4X: 13000g/min， 40分鐘；棄上清，加入工作液100毫升溶解；儲(chǔ)存條件4'C保存。3、 制備檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條先將玻璃纖維膜放入質(zhì)量百分比濃度為1%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分比濃度為0.5%的 TX-100的磷酸鹽緩沖液中封閉30min， 37'C烘干，再將玻璃纖維膜浸泡于標(biāo)記SAH單克隆抗體的膠體金探針中，真空干燥，將制備好的試劑條板上NC膜用噴膜機(jī)分別噴上捕獲抗原(SAH-BSA偶聯(lián)抗原)和質(zhì)控抗體(兔抗Balb/c球蛋白抗體)。噴完后37'C干燥過夜。將吸 水墊、已包被的硝酸纖維膜、玻璃纖維膠體金結(jié)合墊、樣品墊依次粘于底板上，裁成細(xì)條，即成一種檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條。 實(shí)施例3:同型半胱氨酸(HCY)膠體金免疫試紙條制備方法，它包括如下歩驟 SAH-BSA抗原及SAH單抗為實(shí)施例1制備。1、 膠體金的制備量取一定量的洗液于潔凈的250ml三角燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次酸洗液，煮沸5 分鐘；暈取一定量的超純水于該燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次超純水，煮沸5分鐘；棄去 超純水，稱取200ml超純水于該燒瓶中，加熱至沸騰，加入P/。氯金酸10ml，邊煮邊攪拌， 加熱至沸騰；攪拌下加入2%檸檬酸三鈉6.6ml，沸水下快速攪拌，直到氯金酸溶液的顏色慢 慢穩(wěn)定，呈紅色后，繼續(xù)沸騰9分鐘，制成較大的膠體金顆粒。2、 膠體金探針標(biāo)記將SAH單克隆抗體用0.005mol/LNaCl透析過夜，離心除去蛋白沉淀。取膠體金100毫 升，調(diào)節(jié)膠體金溶液PH值9.0，攪拌加入1毫升稀釋的SAH單克隆抗體，再加入1毫升10%BSA 充分混勻，再加入1毫升10%Casein充分混勻，緩慢加入，攪拌15分鐘，離心，條件4°C 13000g/min， 40分鐘；棄上清，加入工作液100毫升溶解；儲(chǔ)存條件4'C保存。3、 制備檢測(cè)同型半胱氨黢的膠體金免疫試紙條先將玻璃纖維膜放入質(zhì)量百分比濃度為1%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分比濃度為0.5%的 TX-100的磷酸鹽緩沖液中封閉30min， 37'C烘干，再將玻璃纖維膜浸泡于標(biāo)記SAH單克隆 抗體的膠體金探針中，真空干燥，將制備好的試劑條板上NC膜用噴膜機(jī)分別噴上捕獲抗原 (SAH-BSA偶聯(lián)抗原)和質(zhì)控抗體(兔抗Balb/c球蛋白抗體)。噴完后37'C干燥過夜。將吸 水墊、已包被的硝酸纖維膜、玻璃纖維膠體金結(jié)合墊、樣品墊依次粘于底板上，裁成細(xì)條， 即成一種檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條。 實(shí)施例4:同型半胱氨酸(HCY)的膠體金免疫診斷試紙條制備方法，它包括如下步驟 將兩個(gè)帶有標(biāo)識(shí)的不干膠紙(標(biāo)識(shí)條)分別粘貼在實(shí)施例2中所制備試紙條的兩端，帶有箭頭端是貼在樣品墊和結(jié)合墊上，由此端浸入待測(cè)樣品，靠另一端的吸水墊的吸水作用，使樣品經(jīng)過NC膜。即成一種檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫診斷試紙條，見圖3。實(shí)施例5:同型半胱氨酸(HCY)的膠體金免疫診斷測(cè)試卡制備方法，它包括如下步驟將實(shí)施例2中所制備試紙條放入塑料卡下片試紙條槽中，與上片嵌合，即成一種檢測(cè)同 型半胱氨酸的膠體金免疫診斷測(cè)試卡，見圖4。此塑料卡是一個(gè)用塑料特制的卡，由上下2 片組成，上下片可嵌合在一起，下片主要有一個(gè)放試紙條的槽和與上片結(jié)合的卡齒，上片主 要包括一個(gè)檢測(cè)孔(見圖4b)、 一個(gè)樣品孔(見圖4a)以及與下片結(jié)合的卡齒，檢測(cè)孔旁邊 分別印有T和C字樣，T表示捕獲線的位置，C表示質(zhì)控線的位置，檢測(cè)孔是觀察結(jié)果的窗 口，樣品孔是滴加樣品的位置。實(shí)施例6:HCY免疫膠體金診斷層析試紙條使用方法如圖l， 2所示，將試紙條樣品墊7插入待測(cè)液中，浸潤(rùn)后取出，水平放置，約10 15分鐘后，在NC膜3上僅僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線5，見圖2b，結(jié)果為陽性；在NC膜3上同時(shí)出現(xiàn)捕獲線4和質(zhì)控線5，見圖2a,結(jié)果為陰性；不出現(xiàn)線條見圖2c表示試紙條失效。試紙條檢測(cè)靈敏度為1 ii mo1/1。 實(shí)施例7:HCY免疫膠體金診斷層析測(cè)試卡使用方法如圖4所示，將樣本加入樣本孔a，加樣量 75微升 80微升，水平放置，約10 15分鐘后，僅在測(cè)試孔b的質(zhì)控線C處出現(xiàn)一條線， 結(jié)果為陽性；在測(cè)試孔b的捕獲線T和質(zhì)控線C處分別出現(xiàn)一條線，結(jié)果為陰性；不出現(xiàn)線 條表示測(cè)試卡失效。測(cè)試卡檢測(cè)靈敏度為1ixmo1/1。
權(quán)利要求
1. 一種檢測(cè)同型半胱氨酸(HCY)的免疫膠體金層析試紙條，其特征在于所述試紙條是由底板(1)上的依次接合吸水墊(2)、特定包被的硝酸纖維膜(NC膜)(3)、NC膜上有捕獲線(4)和質(zhì)控線(5)，涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體的玻璃纖維膠體金結(jié)合墊(6)、樣品墊(7)而組成的條形物；所述玻璃纖維膠體金結(jié)合墊(6)涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體為S腺苷同型半胱氨酸(SAH)單克隆抗體。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于所述吸水墊(2)為一種濾紙，包括吸水紙和 濾油紙；吸水墊貼在底板的末端。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于所述特定包被的NC膜(3)由一層濾膜和膠 膜組成，NC膜上噴涂S腺苷同型半胱氨酸-牛血清白蛋白(SAH-BSA)抗原和兔抗小鼠 二抗；NC膜貼在底板的中間，兩端分別與結(jié)合墊和吸水墊連接。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于所述結(jié)合墊(6)為玻璃纖維紙，用含聚乙烯 醇的硼酸緩沖液浸泡處理后，37'C干燥過夜，噴涂上膠體金標(biāo)記的SAH單克隆抗體，再 冷凍干燥，SAH單克隆抗體是針對(duì)SAH抗原表位，結(jié)合墊上與樣品墊銜接，下與NC膜 銜接。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于所述樣品墊(7)為玻璃纖維紙，用含聚乙烯醇的硼酸緩沖液浸泡，緩沖液PH為7.2，浸泡處理后，37X:干燥過夜；樣品墊位于結(jié)合墊上。
6、 一種權(quán)利要求1所述的試紙條在制備HCY診斷試紙條中的應(yīng)用，其特征在于診斷試紙 條還包括標(biāo)識(shí)條，此標(biāo)識(shí)條為兩個(gè)帶有標(biāo)識(shí)的不干膠紙，分別粘貼在試紙條的兩端，帶有 箭頭端是貼在樣品墊和結(jié)合墊上，由此端浸入待測(cè)樣品，靠另一端的吸水墊的吸水作用， 使樣品經(jīng)過NC膜。
7、 一種權(quán)利要求1所述的試紙條在制備HCY測(cè)試卡中的應(yīng)用，其特征在于測(cè)試卡還包括 塑料卡，此塑料卡是一個(gè)用塑料特制的卡，由上下2片組成，上下片可嵌合在一起，下片 主要有一個(gè)放試紙條的槽和與上片結(jié)合的卡齒，上片主要包括一個(gè)檢測(cè)孔、 一個(gè)樣品孔以 及與下片結(jié)合的卡齒，檢測(cè)孔旁邊分別印有T和C字樣，T表示捕獲線的位置，C表示質(zhì) 控線的位置，檢測(cè)孔是觀察結(jié)果的窗口，樣品孔是滴加樣品的位置。
8、 一種檢測(cè)HCY的免疫膠體金層析試紙條的制備方法，包括如下步驟1) SAH-BSA抗原制備將BSA、 SAH和偶聯(lián)劑于反應(yīng)液中室溫反應(yīng)，凝膠層析分離偶聯(lián)物，透析，濃縮，制 成免疫抗原和包被抗原；2) SAH單抗制備以合成的SAH-BSA偶聯(lián)物免疫Balb/c小白鼠，經(jīng)多次基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫后，取小鼠 脾細(xì)胞與Sp2/0骨髄瘤細(xì)胞，利用PEG細(xì)胞融合技術(shù)制備SAHmAb，腹水?dāng)U增，分離純 化；3) 膠體金的制備a量取一定量的洗液于潔凈的燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次酸洗液，煮沸5分鐘；8b量取一定量的超純水于該燒瓶中，煮沸5分鐘，再換一次超純水，煮沸5分鐘； c棄去超純水，稱取適量三蒸水于該燒瓶中，加熱至沸騰，加入適量1%氯金酸，加熱至 沸騰；d攪拌下加入6 10毫升2%檸檬酸三鈉，沸騰5-10分鐘4) 膠體金探針標(biāo)記將SAH單克隆抗體用NaCl透析過夜，離心除去蛋白沉淀；取膠體金100毫升，調(diào)節(jié)膠體金溶液PH值9.0，攪拌加入1毫升稀釋的SAH單克隆抗體， 再緩慢加入1毫升1(^BSA充分混勻，攪拌，離心棄上清，加入工作液溶解；5) 制備檢測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條先將玻璃纖維膜放入質(zhì)量百分比濃度為1%的牛血清白蛋白、質(zhì)量百分比濃度為1%的TX-100的磷酸鹽緩沖液中封閉30min， 37'C烘干，再將玻璃纖維膜浸泡于標(biāo)記SAH單克隆抗體的膠體金探針中，真空干燥， 將制備好的試劑條板上NC膜用噴膜機(jī)分別噴上捕獲抗原(SAH-BSA偶聯(lián)抗原)和 質(zhì)控抗體(兔抗Balb/c球蛋白抗體)，噴完后37'C干燥過夜；將吸水墊、已包被的硝 酸纖維膜、玻璃纖維膠體金結(jié)合蟄、樣品墊依次粘于底板上，裁成細(xì)條，即成一種檢 測(cè)同型半胱氨酸的膠體金免疫試紙條。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述制備方法，其特征在于3)步中所述三蒸水為200毫升，所述氯金 酸為10蹇升，所述檸樣酸三鈉為7.5毫升。
10、 根據(jù)權(quán)利要求8所述制備方法，其特征在于4)步中所述加入10MBSA后，再加入 l毫升10y。PEG20000充分混勻，離心棄上清，加入工作液溶解。
全文摘要
本發(fā)明提供一種同型半胱氨酸免疫膠體金檢測(cè)試紙條及其制備方法。該試紙條是由底板(1)上的依次接合吸水墊(2)、特定包被的硝酸纖維膜(NC膜)(3)、NC膜上有捕獲線(4)和質(zhì)控線(5)，涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體的玻璃纖維膠體金結(jié)合墊(6)、樣品墊(7)而組成的條形物；所述玻璃纖維膠體金結(jié)合墊(6)涂覆膠體金標(biāo)記特異抗體為S腺苷同型半胱氨酸(SAH)單克隆抗體。應(yīng)用本發(fā)明所提供的試紙條檢測(cè)人血清中同型半胱氨酸水平，具有操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏和特異性好等特點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N33/577GK101246177SQ20071006389
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2007年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日
發(fā)明者多 于, 瑕 吳, 張彥明, 徐希平, 燕 王, 玉 王 申請(qǐng)人:北京華安佛醫(yī)藥研究中心有限公司;安徽省生物醫(yī)學(xué)研究所