專利名稱：一種黃芪藥材的質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥材的質量檢測方法，特別涉及黃芪藥材及其提取物的指紋圖譜質量檢測方法。
背景技術：
中藥指紋圖譜是指一種中藥材或中成藥所共有的，具有特征性的一類成分的色譜或光譜的圖譜。指紋圖譜技術是評價中藥質量的關鍵手段，有利于中藥現代化。日本、美國、德國、法國等國先后已開始使用指紋圖譜對天然藥物進行質量控制，能有效的控制藥物的質量，保證藥物的安全有效，目前已為國際所共識。今天，我國的一些制藥企業在國家的倡導下，已對一些中藥產品進行了指紋圖譜研究。然而，現在對于黃芪藥材及其提取物指紋圖譜的研究較少。黃芪原藥材及其提取物也需建立指紋圖譜質量檢測方法。
發明內容
本發明目的在于提供一種黃芪藥材及其提取物黃芪皂苷的質量檢測方法。
本發明目的是通過如下技術方案實現的。
本發明黃芪藥材的指紋圖譜質量檢測方法，該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.1～0.5∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇50～200ml，回流2～8小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2～5次，每次10～40ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取1～4次，每次5～30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.387±0.039，2號峰0.802±0.080，3號峰0.852±0.085，4號峰0.875±0.088，5號峰0.909±0.091，S峰1.000±0.000，6號峰1.030±0.010。
本發明黃芪藥材的指紋圖譜質量檢測方法，優選如下檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水＝0.23∶1為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇120ml，回流6小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次15ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的優選相對保留時間分別為1號峰0.387，2號峰0.802，3號峰0.852，4號峰0.875，5號峰0.909，S峰1.000，6號峰1.030；1號峰0.425，2號峰0.723，3號峰0.936，4號峰0.788，5號峰0.999，S峰1.000，6號峰1.021或1號峰0.349，2號峰0.881，3號峰0.768，4號峰0.962，5號峰0.909±0.819，S峰1.000，6號峰1.039。
黃芪藥材中的提取物黃芪皂苷的指紋圖譜的質量檢測方法，該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水比例為0.1～0.5∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.797±0.080，2號峰0.847±0.085，3號峰0.870±0.087，4號峰0.905±0.090，S峰1.000±0.000，5號峰1.029±0.010。
黃芪皂苷的指紋圖譜質量檢測方法，優選如下檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水的比例為0.23∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的優選相對保留時間分別為1號峰0.797，2號峰0.847，3號峰0.870，4號峰0.905，S峰1.000，5號峰1.029；1號峰0.876，2號峰0.931，3號峰0.956，4號峰0.994，S峰1.000，5號峰1.038或1號峰0.718，2號峰0.763，3號峰0.784，4號峰0.816，S峰1.000，5號峰1.020。
本發明使用指紋圖譜技術有效的控制了黃芪藥材及其黃芪皂苷的質量；本發明使用指紋圖譜技術從黃芪藥材開始對原料進行有效的控制，保證了在一定的制備工藝情況下，所得黃芪皂苷質量穩定，從而能進一步有效的控制黃芪皂苷注射液、注射用黃芪皂苷等制劑的質量；本發明提供的指紋圖譜技術，可作為評價中藥質量的關鍵手段，有利于中藥現代化。
下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。
實驗例1 黃芪藥材指紋圖譜共有峰的確定1.指紋圖譜根據10批供試品HPLC圖譜所給出的相關參數，黃芪藥材按前述制備方法進行測定所得的主要色譜峰均在60分鐘內出現；2小時的供試品溶液色譜圖表明60分鐘以后未出現色譜峰。比較各批樣品的色譜圖發現有7個峰是各批共有的，由此建立標準指紋圖譜。
2.共有指紋峰的標定根據10批供試品指紋圖譜有關數據的計算結果，共有峰平均相對保留時間(峰號)依次為0.387(1)、0.802(2)、0.852(3)、0.875(4)、0.909(5)、1.000(S)、1.030(6)，以此作為共有指紋峰標定的依據，允許相對偏差為±10％。
3.共有指紋峰相對保留時間10批供試品指紋圖譜中共有指紋峰的相對保留時間表1。
表1 黃芪藥材共有指紋峰相對保留時間(n＝10)
10批藥材共有峰的相對保留時間的RSD均小于2％，顯示各批樣品的一致性較好。
4.非共有峰面積除去不經柱保留的峰，計算了10批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結果見表2。
表2 黃芪樣品的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝10)
各批藥材非共有峰總面積占總面積的比例均小于10％，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》的規定。
5、黃芪藥材指紋圖譜相似性評價取黃芪藥材十批，按上述方法進行檢測，得出十批樣品的指紋圖譜，采用中國藥典委員會推薦的計算機輔助相似度評價軟件(中南大學中藥現代化研究中心編制)計算，相似度見表3。
表3
實驗例2 黃芪皂苷指紋圖譜共有峰的確定1、指紋圖譜根據3批供試品HPLC圖譜所給出的相關參數，黃芪皂苷按前述制備方法進行測定所得的主要色譜峰均在60分鐘內出現；2小時的供試品溶液色譜圖表明60分鐘以后未出現色譜峰。比較各批樣品的色譜峰發現其中6個峰是各批共有的，由此建立標準指紋圖譜。
2、共有指紋峰的標定根據3批供試品指紋圖譜有關數據的計算結果，各共有峰平均相對保留時間(峰號)依次為0.797(1)、0.847(2)、0.870(3)、0.905(4)、1.000(S)、1.029(5)，以此作為共有指紋峰標定的依據，允許相對偏差為±10％。
3、共有指紋峰相對保留時間3批供試品指紋圖譜中共有指紋峰相對保留時間表4。
表4 黃芪皂苷共有指紋峰相對保留時間(n＝3)
由以上結果可以看出，共有峰相對保留時間的相對標準偏差小于1％，一致性非常好。
4、非共有峰面積除去不經柱保留的峰，計算了3批樣品的非共有峰總面積占總峰面積的比例，結果見表5。
表5 黃芪皂苷樣品的非共有峰總面積占總峰面積的百分比(n＝3)
各批中間體非共有峰總面積占總峰面積的比例均小于5％，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》的規定。
5、黃芪皂苷指紋圖譜相似性評價取黃芪皂苷三批，按上述方法進行檢測，得出三批樣品的指紋圖譜，采用中國藥典委員會推薦的計算機輔助相似度評價軟件(中南大學中藥現代化研究中心編制)計算，相似度見表6。
表6
實驗例3 黃芪供試品溶液穩定性試驗取本發明黃芪供試品溶液為測定對象，分別在制備當日、第二天、第四天依照前述色譜條件測定(4℃保存)，記錄各共有色譜峰保留時間和峰面積，以參照物黃芪甲苷的保留時間為參照，換算出各共有峰的相對保留時間的比值，結果表1～2。結果顯示各共有峰相對保留時間的相對標準偏差小于2％，十分穩定；參照峰峰面積百分比的相對標準偏差小于2％。以上結果表明供試品溶液在4天內穩定。見表7和8。
表7 穩定性試驗相對保留時間
表8 穩定性試驗參照峰占總峰面積百分比
實驗例4 黃芪指紋圖譜重現性試驗取本發明黃芪供試品5份，依照實驗例3的方法制備測定，記錄各共有色譜峰保留時間和積分峰面積，以參照物黃芪甲苷的保留時間為參照，換算出各共有峰的相對保留時間的比值，統計結果見下表9和10。
表9 重現性相對保留時間(n＝5)
表10 精密度試驗參照峰占總峰面積百分比
實驗結果顯示，各共有峰相對保留時間的相對標準偏差均小于2％；參照峰的峰面積百分比的相對標準偏差為1.9％，結果顯示方法的重現性良好。
實驗例5 黃芪皂苷供試品溶液穩定性試驗取本發明黃芪皂苷供試品溶液為測定對象，分別在制備當日、第二天、第三天依照前述色譜條件測定(4℃保存)，記錄各共有色譜峰保留時間和峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時間為參照，換算出各共有峰的相對保留時間的比值，結果見表5～6。結果顯示各共有峰相對保留時間的相對標準偏差小于1％，十分穩定；參照峰的峰面積百分比的相對標準偏差為1.3％，結果表明供試品溶液在三天內基本保持穩定。
表11 穩定性試驗相對保留時間
表12 穩定性試驗參照峰占總峰面積百分比
實驗例6 黃芪皂苷指紋圖譜重現性試驗取黃芪皂苷供試品5份，依照實驗例5所述方法制備測定，記錄各共有色譜峰保留時間和積分峰面積。以參照物黃芪甲苷的保留時間為參照，換算出各共有峰的相對保留時間，統計結果見表13和14。
表13 重現性試驗相對保留時間(n＝5)
表14 精密度試驗參照峰占總峰面積百分比
實驗結果顯示，各共有峰相對保留時間的相對標準偏差均小于1％；參照峰的峰面積百分比的相對標準偏差為1.3％，結果顯示方法的重現性良好。
圖1為黃芪皂苷標準指紋圖譜；圖2為黃芪藥材標準指紋圖譜。
下述實施例均能實現上述實驗例所述的效果。
實施例1黃芪藥材的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM。
參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，過二號篩，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇120ml，回流6小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次15ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜。
實施例2黃芪藥材的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為22％，繼后15分鐘，乙腈濃度從22％至33％，33％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.9ml/min；柱溫25℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度120℃，氣體流速2.60SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流3小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次35ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取3次，每次25ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為10μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.425，2號峰0.723，3號峰0.936，4號峰0.788，5號峰0.999，S峰1.000，6號峰1.021。
實施例3黃芪藥材的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水＝0.23∶1為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇120ml，回流6小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次15ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.387，2號峰0.802，3號峰0.852，4號峰0.875，5號峰0.909，S峰1.000，6號峰1.030。
實施例4黃芪藥材的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(0.12∶1)為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為12％，繼后15分鐘，乙腈濃度從12％至39％，39％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.6ml/min；柱溫30℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度110℃，氣體流速3.10SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇190ml，回流5小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取4次，每次6ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為48μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.349，2號峰0.881，3號峰0.768，4號峰0.962，5號峰0.909±0.819，S峰1.000，6號峰1.039實施例5黃芪皂苷的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM。
參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜。
實施例6黃芪皂苷的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水為流動相，梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為25％，繼后15分鐘，乙腈濃度從25％至32％，32％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度115℃，氣體流速3.00SLPM。
參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為10μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.876，2號峰0.931，3號峰0.956，4號峰0.994，S峰1.000，5號峰1.038。
實施例7黃芪皂苷的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水＝0.23∶1為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.797，2號峰0.847，3號峰0.870，4號峰0.905，S峰1.000，5號峰1.029。
實施例8黃芪皂苷的質量檢測方法色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(0.15∶1)為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為15％，繼后15分鐘，乙腈濃度從15％至49％，49％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.6ml/min；柱溫25℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度120℃，氣體流速2.60SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為40μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.718，2號峰0.763，3號峰0.784，4號峰0.816，S峰1.000，5號峰1.020。
權利要求
1.一種黃芪藥材指紋的圖譜質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水比例為0.1～0.5∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.5～1.0ml/min；柱溫20～40℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇50～200ml，回流2～8小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2～5次，每次10～40ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取1～4次，每次5～30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.387±0.039，2號峰0.802±0.080，3號峰0.852±0.085，4號峰0.875±0.088，5號峰0.909±0.091，S峰1.000±0.000，6號峰1.030±0.010。
2.如權利要求1所述的黃芪藥材的指紋圖譜質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.23∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪藥材適量，粉碎，取1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇120ml，回流6小時，放冷，濾過，濾液回收甲醇至干，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次15ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪藥材的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪藥材指紋圖譜共有7個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，7個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.387，2號峰0.802，3號峰0.852，4號峰0.875，5號峰0.909，S峰1.000，6號峰1.030。
3.黃芪藥材中的提取物黃芪皂苷的指紋圖譜質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.1～0.5∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為10～30％，繼后15分鐘，乙腈濃度從10～30％至30～40％，30～40％乙腈濃度維持至60分鐘；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度95～125℃，氣體流速2.5～3.2SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為5～50μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.797±0.080，2號峰0.847±0.085，3號峰0.870±0.087，4號峰0.905±0.090，S峰1.000±0.000，5號峰1.029±0.010。
4.如權利要求3所述的黃芪皂苷的指紋圖譜質量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水的比例為0.23∶1作為流動相，進行梯度洗脫0至20分鐘，乙腈濃度為23％，繼后15分鐘，乙腈濃度從23％至35％，35％乙腈濃度維持至60分鐘；流速0.7ml/min；柱溫35℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度105℃，氣體流速2.95SLPM；參照品溶液的制備，精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作為參照品溶液；供試品溶液的制備，取黃芪皂苷20mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液進行檢測，進樣量為20μl，記錄60分鐘的色譜圖，得黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜相似度應大于0.90；黃芪皂苷指紋圖譜共有6個共有指紋峰，參照峰S為黃芪甲苷色譜峰，6個共有指紋峰的相對保留時間分別為1號峰0.797，2號峰0.847，3號峰0.870，4號峰0.905，S峰1.000，5號峰1.029。
全文摘要
本發明公開一種黃芪藥材及其提取物的指紋圖譜質量檢測方法。該方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈－水為流動相，進行梯度洗脫；取黃芪甲苷加甲醇溶解，作為參照品溶液；取黃芪藥材粉碎，以甲醇為提取溶劑，回流提取，回收甲醇至干，殘渣用水溶解，在以水飽和的正丁醇為提取溶劑，以氨試液除雜，待水飽和的正丁醇提取物揮干后，在殘留物中加入甲醇溶解，取甲醇溶解作為黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液或取黃芪皂苷，加甲醇溶解，作為黃芪皂苷指紋圖譜檢測供試液；供試液指紋圖譜檢測，用高效液相色譜對黃芪藥材指紋圖譜檢測供試液進行檢測，得黃芪藥材及其黃芪皂苷的指紋圖譜；供試品指紋圖譜應與標準指紋圖譜有良好的相似性，相似度＞0.90。
文檔編號G01N30/00GK1857380SQ20061006528
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月22日 優先權日2006年3月22日
發明者程志鵬, 梁隆, 胡思玉, 張德奎, 余啟波 申請人:四川科倫藥業股份有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
