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專利名稱：一種目視檢測尿液中無機磷的方法及其試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種無機磷的檢測方法，具體屬于一種臨床上目視檢測尿液中無機磷的方法及其試劑盒。
背景技術：
無機磷參與各種重要的生物礦化過程，諸如骨骼的形成以及腎結石的起源等病理過程。因此，生物液體中無機磷的檢測是很重要的。我們知道尿液在臨床事件中有很重要的診斷價值，所以檢測人體尿液中無機磷是很有必要的。尿液中無機磷過多或過少會引起結石病、前列腺疾病、甲狀旁腺機能減退或亢進、晚期慢性腎炎、多發性骨髓瘤、佝僂病或軟骨病等，如果不及時治愈，甚至引起更大的其它疾病。因此維持尿液中一定濃度的無機磷很關鍵。由此看來定期的監測尿液中的無機磷是必不可少的。我們可以通過定期監測尿液中的無機磷的含量，了解生物體的代謝狀況及有關病變狀態。目前，大型醫院基本普及用各種類型的半自動、全自動臨床生化分析儀，并使用無機磷試劑盒(鉬試劑)通過直接紫外法去測定尿液中無機磷的含量。我們也發明了使用鄰苯二酚紫-HEPES-Yb3+這個體系，并通過紫外可見儀去檢測尿液中無機磷的方法(專利申請號200410012448.1)。需要指出，以上臨床檢驗包括我們發明的方法都是基于試劑盒與紫外可見光譜儀配套使用，無法實現試劑盒的目視使用。小型醫院及診所由于缺乏大型設備，而無法把測定病人尿液中無機磷作為臨床上的一個常規檢驗。因此，以上的臨床檢驗法缺乏方便和普及性。

發明內容
本發明的目的在于克服試劑盒和大型儀器配套測定尿液中的無機磷的昂貴和不方便，使得小型醫院和小診所無法實現對尿液中無機磷的測定的現實，發明一種在任何醫院及家庭中可以隨時目視檢測尿液中無機磷的方法，這種方法廉價、簡單、快速、而且裝置可以隨身攜帶，可以普及使用。
本發明提供一種目視檢測尿液中無機磷的方法，該方法基于鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH為6.5-7.5的HEPES緩沖溶液中直接滴加一定體積的尿液，然后與標準色階對照，得出尿液中的無機磷含量的范圍，此方法適合于大、中、小型醫院，診所及家庭中使用。
標準色階的制定在含有50μM的鄰苯二酚紫、100μM的YbCl3、pH＝7.0且濃度為10mM的HEPES緩沖溶液中，從左起第二個比色管到第六個比色管中分別加入HPO42-溶液，使得HPO42-的濃度分別為20、40、60、80、100μM，得到標準的色階圖(見圖1)，即從左到右的顏色依次為，蘭色、淡蘭、蘭綠、黃綠、淡黃、深黃，代表相應的尿樣濃度范圍為＜5mM、5～12mM、12～20mM，20～30mM、30～42mM、42～50mM。具體檢測步驟如下(1)、稱取HEPES，用蒸餾水溶解，再用NaOH溶液調pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標記為R1；稱取鄰苯二酚紫，用蒸餾水溶解，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標記為R2；稱取YbCl3，用蒸餾水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，標記為R3；(2)、按照R1、R2、R3體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時溶液為藍色；(3)、取體積為R3體積1/25的尿樣，用進樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與標準色階進行對照，得出尿樣中無機磷濃度范圍。
所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
按照上述方法可進一步制成目視檢測尿液中無機磷的試劑盒。該試劑盒的組成包括試劑R1濃度為10mM，pH＝7.0的HEPES緩沖溶液；試劑R2濃度為2mM的鄰苯二酚紫溶液；試劑R3濃度為2mM的YbCl3溶液；一張標準的色階圖紙；還有包裝。
試劑盒的使用方法1.按照R1、R2、R3試劑體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時溶液為藍色；2.取體積為R3試劑體積1/25的尿樣，用進樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與色階圖紙進行對照，得出尿樣中無機磷濃度范圍。
本發明具有如下優點1、我們的檢測對象是未稀釋的尿樣，省去預處理程序，在臨床上帶來很大的方便；2、相對鉬試劑測定的取樣體積20μl，反應時間是2min，我們的取樣體積更少(4μl)，反應時間更短(20-30s)；3、我們的測定是通過肉眼比色確定其濃度范圍，能脫離大型一起單獨使用，檢測過程簡單、效果明顯；4、我們的裝置和試劑廉價、簡單、便于攜帶，適合與任何大、小型醫院，診所及家庭中使用，有很廣泛的普及性和社會價值性。


圖1是本發明標準色階圖。
圖2至圖10是相應實施例1至實施例9的檢測尿液中無機磷濃度的顏色圖。
具體實施例方式
實施例1稱取HEPES(C8H18N2O4S，FW＝238.30)0.238g，用蒸餾水95ml溶解，再用0.1M的NaOH調pH7.0，最后定容為100ml，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標記為R1；稱取鄰苯二酚紫(C19H14O7S，FW＝386.30)0.0386g，用蒸餾水溶解并定容為25ml，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標記為R2；稱取YbCl3(FW＝279.5)，用蒸餾水溶解并定容為25ml，得到2mM的Yb3+溶液，標記為R3。把2ml的R1溶液加到干凈的比色管中，用微量進樣器吸取R250μl和R3100μl，加到此比色管中，此時溶液藍色。在上述的比色管中，取成人尿樣4μl，用微量進樣器加到此比色管中，搖振后，顏色為蘭綠色，與標準的色階對照，發現此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間。結果見圖2。
按實施例1測10個健康成人尿樣，得尿液中無機磷含量范圍為12-30mM。與醫學上統計的尿中無機磷的正常排出濃度(12～42mM)穩合。
實施例2配制pH6.5的HEPES(10mM)緩沖溶液，其余同實施例1，得尿液中無機磷含量范圍為12-20mM。結果見圖3。
實施例3取一周歲健康小孩尿液，其余同實施例1，但得到的顏色為淡黃色，與標準色階對照，發現小孩尿樣中無機磷的含量范圍為42-50mM。結果見圖4。從上述實施例中，我們看出小孩尿液中的無機磷含量偏高，這是因為小孩與大人相比而言，由于小孩處于成骨旺盛期，堿性磷酸酶活性較高以及代謝速度相當快等原因所造成。
實施例4用Yb(ClO4)3的溶液，取另一成人的尿液，其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間。結果見圖5。
實施例5用ErCl3的溶液，其余其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間，結果見圖6。
實施例6用Nd(ClO4)3的溶液，其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間，結果見圖7。
實施例7用Sm(ClO4)3的溶液，其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間，結果見圖8。
實施例8用GdCl3的溶液，其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間，結果見圖9。
實施例9用HoCl3的溶液，其余同實施例1，此尿樣無機磷濃度在12-20mM之間，結果見圖10。
權利要求
1.一種目視檢測尿液中無機磷的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟(1)、稱取HEPES，用蒸餾水溶解，再用NaOH溶液調pH6.5-7.5，最后定容，得到10mM的HEPES緩沖溶液，標記為R1；稱取鄰苯二酚紫，用蒸餾水溶解，得到2mM的鄰苯二酚紫溶液，標記為R2；稱取YbCl3，用蒸餾水溶解，得到2mM的Yb3+溶液，標記為R3；(2)、按照R1、R2、R3體積比為40∶1∶2，加入比色管中，此時溶液為藍色；(3)、取體積為R3體積1/25的尿樣，用進樣器加到上述比色管中，搖振20-30s后，與色階進行對照，得出尿樣中無機磷濃度范圍。
2.按權利要求1所述的一種檢測尿液中無機磷的方法，其特征在于所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
3.按權利要求1或2所述的一種檢測尿液中磷酸根的方法，其特征在于所述的Yb3+用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
4.一種目視檢測尿液中無機磷方法的試劑盒，該試劑盒包括濃度為10mM，pH＝7.0的HEPES緩沖溶液；濃度為2mM的鄰苯二酚紫溶液；濃度為2mM的YbCl3溶液和標準色階圖。
全文摘要
本發明提供一種目視檢測尿液中無機磷的方法及其試劑盒，該方法使用鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH為6.5－7.5的HEPES緩沖溶液中直接滴加一定體積的尿液，然后與色階對照，得出尿液中的無機磷含量的范圍，此方法適合于大、中、小型醫院，診所及家庭中使用。
文檔編號G01N33/84GK1687787SQ20051001244
公開日2005年10月26日 申請日期2005年4月8日 優先權日2005年4月8日
發明者陰彩霞, 楊頻, 霍方俊 申請人:山西大學