一種飼料中疊氮化物的快速檢測方法及檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種飼料中疊氮化物的快速檢測方法和檢測試劑盒，包括以下內容：加疊氮化物標準品到空白基質飼料中，加入蒸餾水，振蕩靜置后取上清液過膜，濾液加入比色管，調節pH值到酸性，加入顯色試劑顯色，然后根據所得的顯色照片制成系列不同疊氮根濃度的標準比色卡。本發明的檢測試劑盒由塑料樣品勺、塑料滴管、比色管、量筒、試管架、0.45μm水系濾膜、注射器、pH試紙、標準比色卡、鹽酸溶液、三氯化鐵顯色試劑、亞硝酸標準溶液、洗瓶組成。對試樣開展測試，觀察顯示的顏色深淺和標準比色卡比對進行定性和半定量檢測。若顏色為淡黃色，則試樣沒有摻加疊氮化物；若顏色為橙色或血紅色，需要做驗證試驗，若驗證實驗未變色，則該飼料有摻加疊氮化物。采用本發明的方法和試劑盒顯色反應快、測定條件相對寬松、靈敏度高、成本低，特別適合于現場測試。
【專利說明】一種飼料中疊氮化物的快速檢測方法及檢測試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種疊氮化物檢測試劑盒及其快速檢測方法的應用，尤其是對飼料中人為添加疊氮化物的定性和半定量的快速檢測。
【背景技術】
[0002]近年來，為了提高粗蛋白的含量，謀取暴利，某些不法商販所采取的方法從加入尿素、毛和皮革制品，到加入含高含量氮的化工產品，如脲醛樹脂、三聚氰胺，甚至有摻加高毒的疊氮化物(如疊氮化鈉、疊氮化鈣)，給飼料企業和飼料安全帶來了嚴重危害，以至于嚴重影響到食品安全和危害到人民的身體健康。
[0003]為了監測飼料質量安全，黑龍江省畜牧獸醫局(黑牧飼[2011]43號)甚至發文加強飼料中疊氮化鈉、疊氮化鈣的檢測。然而現有的國家標準、行業標準和地方標準中并沒有飼料中疊氮化物的檢測方法。為了打擊非法添加非蛋白氮，凈化飼料市場，加強政府監管，很必要研究一個方便可行的快速現場檢測方法。
[0004]疊氮化鈉，分子式為NaN3,分子量64.01,含氮量64.6%,相對分子質量65.01,無色晶性粉末，易溶于水，劇毒，半數致死量(大鼠，經口)45mg / kg ;對眼和皮膚有刺激性，如吸入、口服或經皮膚吸收，可引起中毒死亡。疊氮化I丐，分子式Ca(N3)2，分子量124.12，含氮量67.7%，白色粉末，有毒，容易爆炸，易溶于水。飼料中添加疊氮化物(如疊氮化鈉、疊氮化鈣等)可顯著增加飼料含氮量。
[0005]疊氮根在酸性條件下可以和三價鐵發生絡合反應，呈現鮮明的血紅色。上個世紀五十年代，F.Feigl就描述了三價鐵法檢測疊氮根的方法(Feigl F.Spot tests, InorganicApplication[M].1954,4th ed.New York:Elsevier)。目前，檢測疊氮化物的方法主要有分光光度法、極譜法、離子選擇性電極法和離子色譜法。
[0006]硫氰酸根也能與三價鐵發生血紅色絡合反應，在用三價鐵法檢測疊氮根時，需要排除硫氰酸根存在的干擾。為了避免它們的干擾，需要做進一步的驗證實驗。根據硫氰酸根在酸性條件下可與亞硝酸根發生顯色反應，呈紅色；而疊氮根與亞硝酸根不發生反應，可向樣品中加入酸和亞硝酸溶液觀察是否顯色以驗證，排除干擾。
【發明內容】
[0007]本發明制備了檢測疊氮化物的比色卡及快速檢測試劑盒，提供了一種對飼料中疊氮化物定性和半定量的檢測方法。為此本發明采用的技術方案是:
[0008]1、飼料中疊氮化物檢測標準比色卡的制作方法:
[0009](I)分別精確稱取Ig陰性飼料作為空白基質于比色管中，依次加入準確稱量的系列疊氮化物標準品，分別加50mL蒸餾水，配制成疊氮化物的標準工作溶液系列，振蕩靜置，取上清液經0.45 μ m水系濾膜過濾,收集濾液。
[0010](2)取濾液7-8mL加入5mol / L鹽酸溶液調節溶液pH值為4。加入lmol / L三氯化鐵顯色試劑ImL,用濾液定容至IOmL,混勻后,室溫下顯色lOmin。[0011](3)將顯色的標準溶液采集照片，將梯度變化的一組彩色照片制成標準比色卡。根據顏色的深淺來定性和半定量。
[0012]驗證實驗方法:
[0013]取上述(I)中濾液7-8mL，加入5mol / L鹽酸溶液和亞硝酸標準溶液各lmL，混勻后觀察是否顯色。
[0014]2、步驟(I)中所配制的空白基質加標含量梯度范圍優選在0.0g / kg?20.0g /kg 之間，如 0.0g / kg、0.2g / kg、1.0g / kg、2.0g / kg、5.0g / kg、10.0g / kg、20.0g /
kg o
[0015]疊氮化物快速測定試劑盒，其組成包括:
[0016](I)塑料樣品勺，裝滿一平勺飼料質量約Ig ；
[0017](2) 3mL塑料滴管，帶有刻度；
[0018](3) 25mL, IOOmL 比色管；
[0019]⑷5OmL 量筒；
[0020](5)試管架，孔的直徑適合25mL和IOOmL比色管；
[0021 ] (6) 25mm0.45 μ m 水系濾膜；
[0022](7) 5mL 注射器；
[0023](8)精密 pH 試紙(0.5-5.0)；
[0024](9)標準比色卡，標準比色卡為淡黃色至血紅色呈梯度變化的系列色卡，每條下面對應相應疊氮根的含量；
[0025](10)5mol / L 鹽酸溶液；
[0026](Il)Imol / L三氯化鐵顯色試劑；
[0027](12) 1000 μ g / mL亞硝酸標準溶液；
[0028](13)洗瓶(500mL)；
[0029]飼料中疊氮化物快速檢測試劑盒的應用，其特征在于:
[0030](I)取一勺試樣于IOOmL比色管中，加入50mL蒸餾水，振蕩靜置，取上清液經
0.45 μ m水系濾膜過濾,收集濾液；
[0031](2)取濾液7-8mL，加入5mol / L鹽酸溶液用精密pH試紙調節pH為4 ;
[0032](3)加入lmol / L三氯化鐵顯色試劑ImL,用濾液定容到IOmL,混勻后,室溫下顯色IOmin,觀察顏色；
[0033](4)將所得顏色與標準比色卡對照。
[0034]結果判定:
[0035]樣品溶液若顯淡黃色，貝Ij疊氮根< 0.2g / kg;
[0036]溶液若變為橙色或紅色，需做以下驗證:取濾液7_8mL，加入5mol / L鹽酸溶液和1000 μ g/mL亞硝酸標準溶液各lmL，如果未顯色，則為摻加有疊氮化物。在該方法條件下，含疊氮根量在0.2g / kg-20.0g / kg，相當于增加飼料0.02%-2%含氮量下未發現明顯干擾。
[0037]本發明的創新點表現在:
[0038]I)本專利建立了制備飼料中疊氮化物檢測標準比色卡的方法。
[0039]2)試劑盒法快速定性和半定量檢測飼料中疊氮化物的方法，方法簡單、快速、靈敏度高、結果鮮明。
[0040]3)利用該標準比色卡和試劑盒，便于目測定性和現場快速測定。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0041]圖1飼料中疊氮根含量標準比色卡【具體實施方式】
[0042]下面對本發明做進一步詳細說明。
[0043]實施例1:
[0044]標準比色卡的制備
[0045]分析步驟:分別稱量陰性復合飼料Ig(精確至0.0lg)于7支IOOmL比色管中，再分別稱取疊氮化鈉 0mg、0.31mg、l.55mg、3.10mg、7.74mg、15.48mg、30.95mg 加入到 IOOmL 比色管中，分別加入50mL蒸餾水，振蕩靜置后取上清液經0.45 μ m水系濾膜過濾，收集濾液；取濾液7-8mL到25mL比色管中，加入5mol / L鹽酸調節pH值到4 ;加入lmol / L三氯化鐵顯色試劑ImL,用濾液定容至IOmL,混勻后,室溫下顯色IOmin,分別對應飼料中疊氮根含量為 0.0g / kg、0.2g / kg、1.0g / kg、2.0g / kg、5.0g / kg、10.0g / kg、20.0g/kg。給顯色的溶液照相，采集顏色制作成標準比色卡，見圖1。
[0046]實施例2:疊氮根快速測定試劑盒
[0047]試劑盒包括:塑料樣品勺，2個，裝滿一平勺飼料質量約lg。3mL帶刻度塑料滴管，100個；25mL比色管，30個；IOOmL比色管，30個；50mL量筒，I個;試管架，I個，20個孔，孔的直徑適合IOOmL比色管；0.45 μ m水系濾膜，100個；5mL注射器，100個；精密pH試紙(0.5-5.0)，2盒；標準比色卡，I個，為淡黃色至血紅色呈梯度變化的系列色卡，共7條，每條下面對應的疊氮根的含量；反應液:5mol / L鹽酸溶液(500mL，玻璃瓶)，lmol / L三氯化鐵溶液(500mL，玻璃瓶)，1000 μ g / mL亞硝酸標準溶液(20mL，塑料瓶)；500mL洗瓶，I個。
[0048]實施例3:
[0049]分析步驟:取某品牌奶牛精飼料補充料一勺于IOOmL容量瓶中，加入50mL蒸懼水，振蕩靜置后取上清液經0.45 μ m水系濾膜過濾，收集濾液；取濾液7-8mL至25mL比色管，用5mol / L鹽酸溶液調整pH值為4,加入lmol / L三氯化鐵顯色試劑ImL,濾液定容至IOmL,混勻后，室溫下顯色IOmin,顯淺橙紅色。另取7_8mL濾液,加入5mol / L鹽酸溶液和IOOOyg / mL亞硝酸標準試劑各lmL，沒有顏色產生，說明樣品中沒有硫氰酸根干擾，定性該試樣中含有疊氮根。三氯化鐵顯色的試樣顏色與標準比色卡對照，與2.0g / kg的比色卡顏色接近，該樣品中疊氮根估計在2.0g / kg左右，則相當于樣品中含有疊氮化鈉為3.1g/kg，含有疊氮化鈣為3.0g / kg。
[0050]上述實施例僅供說明本發明之用，而并非是對本發明專利的限制；應當指出的是，對于本領域的普通技術人員，在不脫離本發明構思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本發明的保護范圍；因此，凡跟本發明權利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應屬于本發明權利要求的覆蓋范圍。
【權利要求】
1.飼料中疊氮化物檢測標準比色卡的制作方法，其特征在于: (1)稱取一定量疊氮化物標準品，分別加入到Ig不含疊氮化物空白基質飼料中；加入50mL蒸餾水，振蕩靜置后上清液經濾膜過濾，收集濾液； (2)取濾液7-8mL加入鹽酸溶液調節溶液pH值為4; (3)加入ImL三氯化鐵顯色試劑,用濾液定容至IOmL,混勻后,室溫下顯色IOmin； (4)把含不同濃度疊氮化物的一系列標準工作溶液顯色后照相，制成彩色照片，采集顏色制成標準比色卡； (5)該卡最低檢出濃度為0.2g / kg ο
2.飼料中疊氮化物快速檢測試劑盒，其特征在于，其組成包括塑料樣品勺、塑料滴管、比色管、量筒、試管架、0.45 μ m水系濾膜、注射器、pH試紙、標準比色卡、鹽酸溶液、三氯化鐵顯色試劑、亞硝酸標準溶液、洗瓶，標準比色卡為顏色由淡黃色至血紅色呈梯度變化的系列色卡。
3.飼料中疊氮化物快速檢測試劑盒的應用，其特征在于，取一平勺試樣于比色管中，加入50mL蒸餾水，振蕩靜置，上清液經濾膜過濾，取濾液7-8mL用鹽酸溶液調節pH值為4 ;力口入ImL三氯化鐵顯色試劑，用濾液定容至10mL，混勻后，室溫下顯色IOmin ;將溶液所顯示的顏色與標準比色卡對照；結果判定:試液的顏色如為淡黃色，則試樣中沒有摻加疊氮化物；如顯示橙色或血紅色，需做進一步的驗證試驗；驗證試驗步驟為:另取7-8mL濾液，加入鹽酸溶液和亞硝酸標準溶液各lmL，如果未顯色，則試樣中有摻加疊氮化物，根據比色卡由試液顯示顏色的深淺來估計疊氮化物的含量。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的疊氮化物標準品為疊氮化鈉或疊氮化鈣，純度大于等于99%。
5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于標準比色卡的顏色為由淺至深分為7個檔次，顏色由淺至深分別對應的疊氮根濃度為0.0g / kg至20.0g / kg,如0.0g / kg、0.2g / kg, 1.0g / kg, 2.0g / kg, 5.0g / kg, 10.0g / kg, 20.0g / kg。
6.根據權利要求1或2或3所述，其特征在于，所述三氯化鐵顯色試劑濃度為Imol/L0
7.根據權利要求1或2或3所述，其特征在于，所述鹽酸溶液濃度為5mol/ L。
8.根據權利要求3所述，其特征在于，所述亞硝酸標準溶液濃度為IOOOyg/ mL。
【文檔編號】G01N21/78GK103776824SQ201310480061
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2013年10月15日 優先權日:2013年10月15日
【發明者】宋薇 申請人:譜尼測試科技股份有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
