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專利名稱：應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒涉及一種封閉技術和用此技術制備的免疫診斷用試劑盒及其檢測方法，是在免疫膠體金技術基礎上建立起來的快速診斷試劑盒，因其操作方便、簡單、使用時安全、無污染、診斷快速準確，廣泛用于免疫診斷。
背景技術：
免疫層析試條是結合了免疫法和色譜層析技術，使用尤為簡便、廣泛。一個檢測板或一根試條的有效組分為上端吸水紙1，包埋有抗體(或抗原)以及二抗(或抗體)的硝酸纖維素膜5，噴有膠金-抗原(抗體)膠體金墊3、樣品吸收墊4。如附圖，免疫層析試條檢測原理圖所示，其是將待檢樣品滴加于樣品吸收墊4后，樣品層析移動至膠體金墊3處，樣品中含有的目的抗原(抗體)與交聯在膠體金上的抗體(抗原)結合形成抗原-抗體復合物。此復合物，經層析移動至檢測區T處被包埋在此的另一抗體(抗原)捕獲固定，形成一條紫紅色條T帶7。其余的膠體金-蛋白移動至對照區C處，與此處的二抗(或抗體)反應生成另一條紫紅色C帶6。通常在制作檢測條(板)時，當檢測條(板)進行樣品檢測時(尤其對血樣品的檢測)，為避免非特異性吸附，需要預先對包埋有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜5進行封閉。封閉的過程為將包埋有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜5浸入封閉劑中，封閉處理30分鐘，取出干燥后，組裝制作檢測條(板)。現有封閉技術在金標檢測試劑盒上運用的缺點通常在制作檢測條(板)時，當檢測條(板)進行樣品檢測時(尤其對血樣品的檢測)，為避免非特異性吸附，需要預先對包埋有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜進行封閉。采用這種方式的生產時間周期長，對硝酸纖維素膜的封閉可能會帶來靈敏度的影響，這種對硝酸纖維素膜的封閉無法進行卷到卷的大工藝生產。

發明內容
本發明的目的在于提供一種流動封閉方法，并利用流動封閉技術制備免疫診斷用試劑盒。
本發明的目的通過下述技術方案實現一種流動封閉方法，是指不對包埋有蛋白的硝酸纖維素膜進行封閉或直接將封閉劑加入待測樣品中，而對下端吸水紙進行封閉，使封閉這樣完成待檢樣品加到檢測板樣品孔中或檢測條插入樣品槽中后，樣品在層析移動時，帶動樣品墊或膠體金墊中的封閉劑，同時層析移動至硝酸纖維素膜上，使封閉在流動中完成。
一種應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒，是將封閉劑直接與待檢樣品混合，或固定于樣品吸收墊或膠體金墊，代替在組裝試劑盒前對硝酸纖維素膜的封閉過程，使封閉這樣完成待檢樣品加到檢測板樣品孔中或檢測條插入樣品槽中后，樣品在層析移動時，帶動封閉劑，同時層析移動至硝酸纖維素膜上，使封閉在流動中完成。
在上述技術方案基礎上，使用流動封閉方法在生產金標快速診斷試劑盒過程中，可以先將抗原、抗體或二抗噴到硝酸纖維素膜上干燥后，不需進行封閉而直接貼到PVC底板上；也可以預先將硝酸纖維素膜貼到PVC底板后再噴上抗原、抗體或二抗。
所述進行流動封閉的封閉劑，包括有脫脂奶粉，牛血清白蛋白(BSA)，吐溫-20，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等。使用本流動封閉方法于金標快速診斷試劑上，可通過調節封閉劑的種類及劑量，使其流動封閉效果符合以常規封閉所需的要求。
本發明的優越性在于使用本發明流動封閉方法使試劑盒制備工藝簡化，省時省力省成本；可避免在對硝酸纖維素膜的封閉洗滌處理時對它造成機械損傷；避免了因為封閉噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜而可能造成的試劑盒靈敏度下降；使用本發明可進行“卷到卷”的大規模生產，而勿須裁剪硝酸纖維素膜下來封閉，可適用各種封閉劑。使用本流動封閉方法于金標快速診斷試劑上，其檢測板(條)的檢出率、靈敏度等符合臨床檢測要求。


附圖，免疫層析試條檢測原理圖。
其中，1-吸收墊2-PVC底板3-膠體金墊
4-樣品吸收墊5-醋酸纖維素膜6-C帶7-T帶具體實施方式
實施例1，本發明制備方法，將封閉劑加入待測樣品，第一步，按照制作金標檢測試劑盒的常規方法標金、包被，但免去封閉一步；第二步，將底板2、上端吸水紙1、噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜5、膠體金墊3、下端樣品吸收墊4等各成份裁剪，組裝，包裝；第三步，配備封閉劑溶液或干粉，備用；第四步，使用時，將封閉劑加入待檢血清中，按常規方法檢測、判斷結果。
實施例2，本發明制備方法，將封閉劑固定于下端吸水紙4，第一步，按照制作金標檢測試劑盒的常規方法標金、包被；第二步，樣品吸收墊4(或膠體金墊3)的封閉處理將樣品吸收墊4(或膠體金墊3)浸沒在封閉劑中封閉處理30分鐘，取出37℃干燥待用；第三步，將底板2、上端吸水紙1、噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜5、膠體金墊3、下端樣品吸收墊各成份裁剪，組裝，包裝。
權利要求
1，一種試劑盒流動封閉方法，是指不對包埋有蛋白的硝酸纖維素膜進行封閉，而對下端吸水紙進行封閉或直接將封閉劑加入待測樣品中，其特征在于封閉是這樣完成的將待檢樣品加到檢測板樣品孔中或檢測條插入樣品槽中后，樣品在層析移動時，帶動樣品墊或膠體金墊中的封閉劑，同時層析移動至硝酸纖維素膜上，使封閉在流動中完成。
2，一種應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒，其特征在于，將封閉劑直接與待檢樣品混合，或固定于樣品吸收墊或膠體金墊，使封閉這樣完成待檢樣品加到檢測板樣品孔中或檢測條插入樣品槽中后，樣品在層析移動時，帶動封閉劑，同時層析移動至硝酸纖維素膜上，使封閉在流動中完成。
3，根據權利要求2所述的應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒，其特征在于，在生產金標快速診斷試劑盒過程中，先將抗原、抗體或二抗噴到硝酸纖維素膜上干燥后，不需進行封閉而直接貼到PVC底板上。
4，根據權利要求2所述的應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒，其特征在于，在生產金標快速診斷試劑盒過程中，預先將硝酸纖維素膜貼到PVC底板后再噴上抗原、抗體或二抗。
5，根據權利要求2所述的應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒，其特征在于，所述封閉劑包括有脫脂奶粉，牛血清白蛋白(BSA)，吐溫-20，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
6，應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒的制備方法，其特征在于第一步，將封閉劑加入待測樣品，按照制作金標檢測試劑盒的常規方法標金、包被，但免去封閉一步；第二步，將各成份底板、上端吸水紙、噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜、膠體金墊、下端樣品吸收墊裁剪，組裝，包裝；第三步，配備封閉劑溶液或干粉，備用；第四步，使用時，將封閉劑加入待檢血清中，按常規方法檢測、判斷結果。
7，應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒的制備方法，其特征在于第一步，將封閉劑固定于下端吸水紙按照制作金標檢測試劑盒的常規方法標金、包被；第二步，將樣品吸收墊(或膠體金墊)的封閉處理將樣品吸收墊(或膠體金墊)浸沒在封閉劑中封閉處理30分鐘，取出37℃干燥，待用；第三步，將底板、上端吸水紙、噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜、膠體金墊、下端樣品吸收墊裁剪，組裝，包裝。
全文摘要
本發明應用流動封閉技術的免疫金標檢測試劑盒涉及一種封閉技術和用此技術制備的免疫診斷用試劑盒及其檢測方法,廣泛用于免疫診斷。試劑盒流動封閉方法是這樣完成的:將待檢樣品加到檢測板樣品孔中或檢測條插入樣品槽中后,樣品在層析移動時,帶動樣品墊或膠體金墊中的封閉劑,同時層析移動至硝酸纖維素膜上,使封閉在流動中完成。本發明的優越性在于:使用本發明流動封閉方法使試劑盒制備工藝簡化,省時省力省成本;可避免在對硝酸纖維素膜的封閉洗滌處理時對它造成機械損傷;避免了因為封閉噴有抗原(抗體)的硝酸纖維素膜而可能造或的試劑盒靈敏度下降;可進行“卷到卷”的大規模生產,其檢測板(條)的檢出率、靈敏度等符合臨床檢測要求。
文檔編號G01N33/53GK1338632SQ0112693
公開日2002年3月6日 申請日期2001年9月29日 優先權日2001年9月29日
發明者張濤, 李賓, 彭永濟, 周軍, 龔丹, 任一萍 申請人:上海晶泰生物技術有限公司