專利名稱：快速檢測安非他明的膠體金試紙的制作方法
技術領域：
本發明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測安非他明(AMP)的試紙。
背景技術：
安非他明屬苯丙胺類興奮劑毒品，早在1971年就被聯合國反毒署列入違禁毒品名單。極易產生成癮性，此品不僅有強烈興奮作用，還會使人出現幻覺，長期服用則造成行為失控，免疫機能降低，肝腎功能衰竭，服用過量可直接致人死亡。苯丙胺類興奮劑攝入量較大時可引起收縮壓和舒張壓升高，低劑量時由于心輸出量增加而反射性地降低心率，高劑量可出現心動過速和心律失常，呼吸速率及深度增加，出汗等。同時可出現頭痛、心慌、疲倦、血壓增高、發熱、反射性心率減緩、瞳孔擴大，睡眠障礙。
部分濫用者還可能出現咬牙、共濟失調、頭痛、惡心、嘔吐等。采用靜脈注射方式的濫用者，為追求最大程度的快感，可每隔2-3小時注射一次，從而出現明顯的中毒癥狀，包括瞳孔擴大、大汗、口渴、厭食、血壓增高、脈搏增快等。由于外周血管收縮使得皮膚冰冷，同時可出現心房和心室的異位節律增多，陣發性心動過速、室性早搏。一些人可出現血糖升高，血液凝集速度加快。還會出現因口干而引起的固體食物吞咽困難。骨骼肌張力增加，肌腱反射亢進，出現不自主的磨牙動作，并可見手部靜止時的細微震顫或手足舞蹈樣動作。還可出現尿潴留和便秘。重者可導致驚厥、昏迷，心律失常甚至死亡。屬于國家毒品行列。
對安非他明(AMP)的檢測方法如氣相色譜(GC)，氣相色譜/質譜(GC/MS)，高效液相色譜(HPLC)等已有報道。高效毛細管電泳是近年來發展起來的分析方法，它具有分離能力強、分離效率高、分析時間短，所需的樣品及溶劑量小等特點。國外已有利用膠束毛細管電動色譜法等，但是所需的時間較長，因此需要一種快速、方便的檢測方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結合反應和免疫層析技術，利用特定的顯色反應在試紙上準確的顯示測試的結果，具有靈敏度高，特異性強，重復性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復雜的設備。
發明內容
本發明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測安非他明(AMP)的試紙。
為了達到所述目的，本發明是通過以下技術方案實現的在安非他明(AMP)檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條安非他明(AMP)合成免疫原試驗線和一條抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗安非他明(AMP)單抗金標墊相互交疊連接，在抗安非他明(AMP)單抗金標墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把安非他明(AMP)檢測試紙的樣品層放入被檢測尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，當移動至抗安非他明(AMP)單抗金標墊時，樣品中的安非他明(AMP)與抗安非他明(AMP)金標探針發生特異反應，當移動至固定有安非他明(AMP)合成免疫原試驗線時，由于抗安非他明(AMP)單抗金標墊中的抗體會與樣品中安非他明(AMP)結合而失去其與安非他明(AMP)合成免疫原結合位點，因此其膠體金不能滯留于試驗線上；相反，如果樣品中沒有與抗安非他明(AMP)單抗金標墊中的抗體結合的安非他明(AMP)，抗安非他明(AMP)單抗金標探針就會與試驗線上的安非他明(AMP)合成免疫原發生特異結合，使膠體金滯留于試驗線上，這就是免疫競爭法原理。所以試驗線的顏色深淺與樣品中安非他明(AMP)含量高低成反比。設定界限值為1000ng/ml，出現兩條紅線代表尿樣中安非他明(AMP)低于1000ng/ml，為陰性；出現一條紅線表示尿樣中安非他明(AMP)超過界限值1000ng/ml，為陽性。
當移動至抗鼠多克隆抗體控制線時，無論樣品中安非他明(AMP)含量多少，金標探針都會與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產生則代表操作有誤(檢測時，樣品液面超過MAX線)或試紙已經過期。
在用試紙檢測尿液后，將其試驗線與檢測色標進行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進而確定所測尿液中安非他明(AMP)含量是否超標。用含安非他明(AMP)對照品得尿液檢測，設定界限值為1000ng/ml。
由于采用上述技術方案，本發明所提供的檢測安非他明(AMP)的試紙及其檢測方法具有這樣的有益效果，即特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術人員操作，不需要儀器設備，而且結果易讀。
圖一為安非他明(AMP)檢測試紙的主視結構圖。
圖二為安非他明(AMP)檢測試紙的俯視剖視結構圖。
圖三為安非他明(AMP)檢測試紙應用于測試時顯示為陽性結果圖。
圖四為安非他明(AMP)檢測試紙應用于測試時顯示為陰性結果圖。
具體實施方式
1.應用活化脂法，將半抗原安非他明(AMP)結合牛血清白蛋白(BSA)制備安非他明(AMP)合成免疫原。
2.抗安非他明(AMP)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的安非他明(AMP)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗安非他明(AMP)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗安非他明(AMP)單克隆抗體的結合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+去離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗安非他明(AMP)單克隆抗體→抗安非他明(AMP)單抗膠體金。
(3)抗安非他明(AMP)單抗膠體金+吸水紙→金標記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細管原理使膠體金朝向底物處移動。
5.特種制膜機制膜機器特制，利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗線選用安非他明(AMP)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續插在尿液中，5分鐘對觀察結果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結果。
(3)結果判斷僅在控制區出現一條紅色線為陽性；如在檢測區及控制區出現兩條紅色線，則為陰性。控制區未出現紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當，均可產生錯誤結果。
(3)密封保存，在有效期12個月內使用。
權利要求1.一種快速檢測安非他明的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、安非他明單抗金標墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層。
2.根據權利要求1所述的一種快速檢測安非他明的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據權利要求1所述的一種快速檢測安非他明的膠體金試紙，其特征在于試驗線是由安非他明合成免疫原包被制成。
4.根據權利要求1所述的一種快速檢測安非他明的膠體金試紙，其特征在于金標墊是由安非他明單克隆抗體作為膠體金標記。
5.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專利摘要本實用新型涉及一種快速檢測安非他明(AMP)的試紙，屬于膠體金免疫檢測領域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測安非他明(AMP)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有安非他明(AMP)合成免疫原試驗線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結合反應和免疫層析技術，在試紙上出現特定的顯色結果。具有靈敏度高，特異性強，重復性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復雜的設備。
文檔編號G01N33/52GK2914090SQ20062000430
公開日2007年6月20日 申請日期2006年2月22日 優先權日2006年2月22日
發明者萬志靜, 萬志強 申請人:萬華普曼生物工程有限公司
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