專利名稱：：一種檢測蛋殼成份沉積規律的方法
技術領域：
：本發明涉及一種檢測蛋殼成份沉積規律的方法。技術背景蛋殼品質對于禽蛋的運輸、貯藏與加工具有重要的意義，而蛋殼顏色作為蛋殼品質的一個重要方面，長期以來影響了人們對于禽蛋的購買，比如中國人大多喜歡購買褐殼蛋和粉殼蛋，而近年來大力發展的綠殼蛋由于其獨特的蛋殼顏色和潛在的保健價值，倍受消費者推崇，價格也遠遠高于其它顏色的蛋。蛋殼顏色是鳥類外部形態的一個特征性狀，是最直觀的品種特征。野生鳥類的蛋殼顏色具有豐富的多樣性，而家禽由于受到人工選擇，蛋殼顏色較為單一，研究人員發現，無論是野生鳥類還是家禽，其蛋殼色素的主要成分均為原卟啉IX、膽綠素IX以及膽綠素IX的鋅螯合物。雞蛋作為人類優質廉價的動物蛋白的最主要來源，對于人們生活有重要影響，長期以來消費者對于蛋殼顏色的偏好，使得不同蛋殼顏色的雞蛋具有較大差異的市場售價，尤其近幾年綠殼雞蛋備受青睞，售價較高。另外，膽綠素僅和原卟啉IX都是名貴的制藥和生化原料，以往這兩種物質都是從膽汁和血液中提取，成本較高。以前對于蛋殼色素沉積規律的研究一般是采用在產蛋周期的不同階段提取蛋殼腺組織和蛋殼腺液的方法，而采集蛋殼腺組織和蛋殼腺液的方法無法排除手術和其它刺激對實驗動物的影響，因為應激會影響實驗動物很多激素分泌水平的變化，而激素水平可能會對蛋殼色素的沉積產生影響。
發明內容本發明的目的是提供一種檢測蛋殼成份沉積規律的方法。本發明所提供的檢測蛋殼成份沉積規律的方法，是將蛋殼進行由外向內分層溶解，依次檢測各層蛋殼溶解液中的蛋殼各種成分含量和溶解掉的蛋殼重量，通過比較各蛋殼層中各種成份的含量就可以知道各種成份在不同蛋殼層中的分布，因為蛋殼層由外而內的溶解過程與蛋殼層由內而外的沉積過程相互對應，所以這樣便可得到蛋殼形成過程中各種成份的沉積規律。所述方法中，所述分層溶解用的溶解液為體積比為3:2-3:1的甲醇和濃鹽酸的混合液；所述濃鹽酸的質量百分濃度為36-38%;甲醇和濃鹽酸均為分析純。所述方法中，所述分層溶解的方法，是將蛋在所述溶解液中浸沒溶解l一3分鐘,取出，用3升去離子水漂洗，重復以上步驟，依次類推，直到蛋殼完全溶解為止，得到由外向內分層溶解的蛋殼層溶解液。所述浸沒蛋所用的所述溶解液，在可以浸沒蛋的條件下，其體積應盡量小。所述浸沒蛋的時間優選為2分鐘。所述溶解液優選為體積比為2:1的甲醇和濃鹽酸的混合液。所述方法中，所述蛋殼成分為蛋殼色素成分。所述方法中，所述溶解液中蛋殼成分含量用液相色譜或紫外分光光度計檢測。所述方法中，所述蛋殼色素成分為膽綠素IX和/或膽綠素IX的鋅螯合物和/或原卟啉IX。所述方法中，所述溶解液中蛋殼成分含量的檢測方法為將溶解了各個蛋殼層的溶解液避光靜置12小時,之后使用紫外分光光度計在670nm處測定膽綠素IX的含量，在412nm處測定原卟啉IX的含量。上述方法，所述蛋殼為鳥類或家禽蛋殼。實驗證明，以本發明的方法檢測蛋殼中的膽綠素IX和原卟啉僅的沉積規律為例，得出了膽綠素IX和原卟啉IX具有同樣沉積模式，都是先慢后快，在蛋殼形成的最后階段均達到了最快的沉積速度，兩種色素都是在蛋殼表層含量最高，膽綠素IX和原卟啉IX的含量在各個蛋殼層中呈現顯著的正相關，即同時增加同時減少，提示膽綠素IX和原卟啉IX的沉積可能受同樣因素的影響，利用本發明的方法得到的這個結論對進一步研究蛋殼顏色形成的生理學、生態學和遺傳學機制，對于改良地方雞種和外來雞種的蛋殼顏色具有重要意義。本發明的方法對于蛋殼中膽綠素IX和原葉啉IX的回收利用，增加養禽業的附加值也具有潛在的價值。利用本發明的方法也可以研究蛋殼中其他成分的沉積規律，對于研究蛋殼形成的遺傳學和生理學機制都具有重要的意義。本發明的方法利用蛋殼分層溶解與蛋殼沉積是對應的逆過程的原理，測定蛋殼成份在不同蛋殼層中的分布，便可得到蛋殼形成過程中各種成份的沉積規律，既不會對動物造成應激，又可降低檢測成本，且操作方便。圖1為綠殼蛋和褐殼蛋各個蛋殼層中原卟啉IX濃度變化的趨勢圖圖2為綠殼蛋和褐殼蛋各個蛋殼層中膽綠素僅濃度變化的趨勢圖具體實施方式下述實施例中的方法，如無特別說明，均為常規方法。下述實施例中所述的百分含量，如無特別說明，均為質量百分含量。實施例1、雞蛋殼色素沉積規律的檢測1、實驗材料東鄉綠殼蛋雞(一種中國的土著雞種，產綠殼蛋)30只(購自中國農業大學種雞場)，壽光雞(一種中國的土著雞種，產的褐殼蛋)30只(購自中國農業大學種雞場)，實驗動物的詞養管理條件完全一致(一雞一籠，自由飲水與采食)，每只雞取蛋1枚，共60枚。2、雞蛋殼色素沉積規律的檢測將上述得到的雞蛋分別進行下述步驟的操作1)將雞蛋簡單清洗后，在8(TC烘箱中放置3分鐘烘干蛋殼表面水分，微量天平稱重，記為W。2)將定時器設置為2分鐘，將步驟l)處理后的雞蛋放入100毫升的燒杯中，迅速倒入45毫升(溶解液的多少要隨著雞蛋體積的大小而變化，務必保證雞蛋完全浸沒于溶解液中)溶解液(甲醇與濃鹽酸(質量百分濃度為37%)按2:1的比例混合而成)，同時按下定時器。2分鐘時間到，迅速將雞蛋取出，得到溶解液d，將其轉移于50ml離心管中，然后大量去離子水沖洗雞蛋，8(TC烘箱中放置3分鐘烘干蛋殼表面水分，稱重，記為W1，并做好標記。3)將步驟2)得到的溶解后剩余的同一枚雞蛋再放入另一只干凈的100毫升燒杯中，按照步驟2)所述的方法再將該雞蛋用45毫升的溶解液溶解一次得到溶解液C2，8(TC烘箱中放置3分鐘烘干蛋殼表面水分，并測量溶解后剩余雞蛋的重量，記為W2，依此類推，重復步驟2)，得到溶解液C3、測量溶解后剩余雞蛋的重量W3……直到蛋殼溶解完全。4)將上述得到的溶解液分別靜置12小時，取溶解液5ml于10ml離心管中，以3500轉/分鐘的速度離心45分鐘，然后取2毫升上清液于比色杯中，用紫外分光光度計在412nm和670nm處測定上清液的吸收值。按照下述方法計算溶解的蛋殼層(自外向內第l、2、……n層)中膽綠素IX與原卟啉K的濃度第n個蛋殼層中原卟啉IX的濃度(Cpn)=第n次溶解得到的溶解液(Cn)在412nm處的吸收值(An)/第n次溶解掉的蛋殼層重量(AWn);第n個蛋殼層中膽綠素IX的濃度(Cbn)=第n次溶解得到的溶解液(Cn)在670nm處的吸收值(An)/第n次溶解掉的溶解的蛋殼層重量(AWJ;第n個蛋殼層重量(AWn)=上次溶解后稱得的蛋重(Wh)-本次溶解后稱得的蛋重(Wn);上述公式中的n為取值相同的整數，表示自蛋殼由外向內溶解的蛋殼層的計數。以上述計算的蛋殼層中膽綠素IX或原卟啉IX的濃度分別為縱坐標，以自外向內溶解的蛋殼層的計數為橫坐標，作圖表示膽綠素IX或原卟啉IX在各個蛋殼層中濃度的變化趨勢，并將數據使用SAS8.2軟件進行相關性分析。30枚東鄉綠殼蛋雞產的綠殼蛋中膽綠素IX或原卟啉IX在各個蛋殼層中濃度的變化趨勢無差異，30枚壽光雞產的褐殼蛋中膽綠素IX或原卟啉IX在各個蛋殼層中濃度的變化趨勢也無差異，所以這里僅展示了一枚綠殼蛋和一枚褐殼蛋的檢測分析結果。一枚綠殼蛋和一枚褐殼蛋各個蛋殼層中原卟啉IX的濃度檢測結果如圖1所示，從圖l可以看出，綠殼蛋和褐殼蛋中原嚇啉K的濃度均以表層為最高，即綠殼蛋和褐殼蛋中原卟啉IX都是在蛋殼形成的最后階段達到了最大的分泌速率。一枚綠殼蛋和一枚褐殼蛋的中膽綠素IX的濃度檢測結果如圖2所示，從圖2中可以看出，綠殼蛋和褐殼蛋中膽綠素IX的濃度也是在表層最高，也就是說膽綠素IX和原卟啉IX都是在蛋殼形成的最后階段達到了最大的分泌速率，表明蛋殼中的膽綠素IX和原卟啉IX具有相似的分泌模式(圖1和圖2中的蛋殼層號為自外向內層依次編號，圖1和圖2中膽綠素表示此處的膽綠素IX，原卟啉表示此處的原卟啉IX)。綠殼蛋或褐殼蛋中的膽綠素IX和原卟啉IX在各個蛋殼層中含量的相關性分析結果如表1所示，結果表明，綠殼蛋或褐殼蛋中各個蛋殼層中的色素含量與其對應的蛋殼層重量之間都沒有發現顯著相關，而在綠色蛋殼蛋殼層中，膽綠素僅含量與原卟啉IX含量之間發現極顯著的正相關(p<0.01)相關系數為0.97195，在褐色蛋殼蛋殼層中也是這樣，相關系數為0.91878，即無論是綠殼蛋還是褐殼蛋，膽綠素IX和原卟啉IX含量在不同的蛋殼層中均同時增加同時減少，由于蛋殼溶解與蛋殼沉積是對應的逆過程，所以在蛋殼沉積過程中，膽綠素IX和原卟啉IX的沉積速度也是同時增加或減少的，提示蛋殼膽綠素IX與原卟啉IX的沉積可能受同樣的因素調控。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權利要求1、一種檢測鳥類蛋殼成份沉積規律的方法，是將蛋殼進行由外向內分層溶解，依次檢測各層蛋殼溶解液中的蛋殼各種成分含量和溶解掉的蛋殼重量，通過計算各層蛋殼中各種成份的含量來檢測蛋殼中各種成份在不同蛋殼層中的分布，即得到蛋殼形成過程中各種成份的沉積規律。2、根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述分層溶解用的溶解液為體積比為3:2-3:1的甲醇和濃鹽酸的混合液；所述濃鹽酸的質量百分濃度為36-38%。3、根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述分層溶解的方法，是將蛋在所述溶解液中浸沒溶解l-3分鐘，取出，重復用所述溶解液浸沒溶解1-3分鐘，依次類推，直到蛋殼完全溶解為止，得到由外向內分層溶解的蛋殼層溶解液。4、根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述分層溶解用的溶解液為體積比為2:1的甲醇和濃鹽酸的混合液。5、根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述蛋殼成份為蛋殼色素成份。6、根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述溶解液中蛋殼成份含量用液相色譜或紫外分光光度計檢測。7、根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述蛋殼色素成分為膽綠素IX和/或膽綠素IX的鋅螯合物和/或原卟啉IX。8、根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述溶解液中蛋殼成分含量的檢測方法為將溶解了各個蛋殼層的溶解液避光靜置12小時，之后使用紫外分光光度計在670nm處測定膽綠素IX的含量，在412nm處測定原卟啉IX的含量。9、根據權利要求1-8中任意一項所述的方法，其特征在于所述蛋殼為鳥類或家禽的蛋殼。全文摘要本發明公開了一種檢測鳥類蛋殼成份沉積規律的方法。該方法，是將蛋殼進行由外向內分層溶解，依次檢測各層蛋殼溶解液中的蛋殼各種成份含量和溶解掉的蛋殼重量，通過計算各個蛋殼層中各種成份的含量來檢測蛋殼中各種成份在不同蛋殼層中的分布規律，即得到蛋殼形成過程中各種成份的沉積規律。本發明的方法是利用蛋殼分層溶解與蛋殼沉積是對應的逆過程的原理，測定蛋殼成份在不同蛋殼層中的分布，得到蛋殼形成過程中各種成份的沉積規律，既不會對動物造成應激，又可降低檢測成本，且操作方便。文檔編號G01N30/00GK101122591SQ200710120349公開日2008年2月13日申請日期2007年8月16日優先權日2007年8月16日發明者吳常信,王曉通,連林生,鄧學梅申請人:中國農業大學
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