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專利名稱：同時檢測谷物中黃曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法的制作方法
技術領域：
本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法。
背景技術：
真菌毒素是指在產毒絲狀真菌的生長代謝過程中，分泌產生的對人畜健康有害的次生代謝產物。由于這類真菌毒素分布廣，某些毒素還具有致畸、致癌和致突變等作用，近年被世界衛生組織列為食源性疾病的三大根源之一。由于產毒真菌在適宜條件下，極易在產前產后侵染農產品，導致真菌毒素的污染，進而威脅人類和畜禽的健康，也帶來了巨大的經濟損失。目前，世界各國雖對真菌毒素建立較為完善的防控措施，但在現有生產力水平下，要完全杜絕真菌毒素進入人類的食物鏈是無法實現的。通常條件下，黃曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1,AFB1X赭曲霉毒素A (Ochratoxin A,0ΤΑ)、玉米赤霉烯酮(Zearalen0ne，ZEN)等真菌毒素均易出現在霉變谷物中，而且多種毒素并存的現象也有報道，其毒素的加和毒性更是極具威脅。發生多種毒素并存的現象主要是由兩方面原因導致的，其一，現代食品工業的高度集成化，增加了不同原料間交叉污染的可能，也極大增加了多種毒素并存的幾率，其二，某些產毒真菌，特別是產毒曲霉，在特定的條件下可以分泌多種真菌毒素。但是不管是單一毒素還是多種毒素，都將嚴重威脅到人和動物的健康。下表為以上所述四種真菌毒素的基本信息。
權利要求
1.同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于該方法包括以下步驟 (1)谷物樣品中待測毒素提取液的制備 (1-1)準確稱取5 g磨碎的谷物樣品，精確至O. Ol g，置于50 mL具蓋離心管A中，力口Λ 15 mL通用型提取液,劇烈振蕩I min,然后于搖床上以60 r/min振搖20 min,接著加入20 mL乙腈,60 r/min振搖10 min后,加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉作為復合鹽析試齊U，迅速并劇烈振蕩I min，以3500 r/min離心10 min，取出上層溶液至100 mL磨口燒瓶B中，待用； (1-2)往離心管A中再加入15 mL乙腈,經過劇烈振蕩I min后，以3500 r/min離心10 min，取出上層溶液，并與步驟(1-1)中取出的提取液合并于燒瓶B中，于40°C下減壓濃縮近干； (2)提取液凈化 往燒瓶B中加入4 mL正己烷和I mL酸性乙腈作為凈化試劑充分蕩洗，收集蕩洗液，以3500 r/min離心后,棄去上層正己燒層，收集下層溶液于2. O mL離心管C中，并用O. 5 mL酸性乙腈重復洗滌燒瓶B 2次，收集蕩洗液至離心管C中定容至2 mL，以15000 r/min離心I min,取上清液過O. 22 μ m濾膜，得到待測樣品溶液，供液相色譜分析； (3)測定 (3-1)標準工作液和待測樣品溶液在設定的液相色譜條件下進樣，即將標準工作液和待測樣品溶液注入高效液相色譜儀分離，并采用熒光檢測器檢測，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，待測樣品溶液中真菌毒素的響應值應該在熒光檢測器的線性范圍內； (3-2)在上述液相色譜條件下，若待測樣品溶液中出現的真菌毒素色譜峰保留時間與標準工作液一致，則判斷待測樣品中存在相應的被測物，允許偏差小于±2. 5%。
2.根據權利要求I所述的同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于步驟(1-1)中所述通用型提取液為12 mL冰乙酸以蒸懼水定容至100 mL制成。
3.根據權利要求I所述的同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于步驟(2)中所述酸性乙腈為乙酸和乙腈按照體積比1:9混合制成。
4.根據權利要求I所述的同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于步驟(3)中所述液相色譜條件為
5.根據權利要求I所述的同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于步驟(3)中所述熒光檢測器為四通道熒光檢測器，設定的四種真菌毒素的四通道熒光檢測器的參數為激載波長(Es)發射波Ι￡(Ειη} _. . *__(uni)__(nm) H■毒素 S,360440.......................................................... Hi 霉素 ~330SIIO'° 1+曲霤毒繼A333"477 ，￡ 米參霉274440—
6.根據權利要求I所述的同時檢測谷物中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的液相色譜-熒光法，其特征在于步驟(3)中所述熒光檢測器為單通道熒光檢測器，設定的四種真菌毒素的單通道熒光檢測器的程序時間波長參數為毒.桌—雜 ~miEHFEm ~SiiiS^(Em)~'minfnni)謂)一口石一-_^_—一一:4「一一. ~ tjgit...........................................Γ(κ —'.........................................................330........................... 1.............................................500............................. .. .. °—■—MA17-19333477~ ~ IE 米赤霉録·19-25274440
全文摘要
本發明屬于食品安全檢測技術領域，提供一種高效液相色譜法同時檢測谷物中的黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和桔霉素的方法。該方法通過通用型提取液提取，以高效液相色譜-熒光檢測器法檢測和外標法定量。本發明的檢出限分別為黃曲霉毒素B11.08μg/kg、赭曲霉毒素A3μg/kg、玉米赤霉烯酮35.85μg/kg和桔霉素6.52μg/kg。該發明方法簡便快捷，環境污染小，檢測成本低，適用于谷物中四種真菌毒素的同時定量檢測。
文檔編號G01N30/06GK102636581SQ20111044161
公開日2012年8月15日 申請日期2011年12月26日 優先權日2011年12月26日
發明者周有祥, 李書謙, 王小紅, 胡定金, 董麗娜, 路磊, 陳建彪, 陳福生 申請人:周有祥, 湖北省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所, 陳福生