專利名稱：胚胎著床的估計日期及相關(guān)日期的確定的制作方法
胚胎著床的估計日期及相關(guān)日期的確定本申請要求2004年4月20日提交的美國臨時專利申請No. 60/563,592的權(quán)利和利益，也要求2004年3月5日提交的歐洲專利申 請Ser. No. EP04251289.7的優(yōu)先權(quán)。發(fā)明領(lǐng)域本公開涉及用于哺乳動物受試者的出生的胚胎著床日期的確定。 本公開也涉及預(yù)產(chǎn)期(EDD)和可能的受精(conception)日期的確定。發(fā)明背景預(yù)產(chǎn)期(EDD)是通常情況下可以預(yù)期的大約的出生日期。在實 踐中，對人類來說，只有5%的出生實際發(fā)生在預(yù)產(chǎn)期，但是大約有90% 發(fā)生在預(yù)產(chǎn)期前后IO天的時期內(nèi)。因為有許多因素、包括臨床的和非 臨床的因素依賴于預(yù)產(chǎn)期(例如安排與產(chǎn)科醫(yī)師的會面、決定引產(chǎn)等)， 預(yù)產(chǎn)期是非常重要的。目前，常規(guī)使用兩種方法來確定預(yù)產(chǎn)期。最簡單的是"LMP"(或 "最后月經(jīng)期")方法。這需要知道婦女的最后一次月經(jīng)期的日期。在LMP方法中，預(yù)產(chǎn)期可以通過將最后一次月經(jīng)期的流血的第一天和 (a)加上7天并減去3個日歷月(并進(jìn)一年)、或(b)加上280天(10個28天的太陰月)來確定。兩種計算的結(jié)果基本上是相同的，盡管因為日歷月有不同的天數(shù)從而使得準(zhǔn)確的結(jié)果可能有一天或兩天的差別。確定預(yù)產(chǎn)期的LMP方法具有技術(shù)上簡單的優(yōu)點。但是，它可能不 總是可靠的(例如，當(dāng)婦女不能準(zhǔn)確回憶起她的最近一次經(jīng)期的日期， 或她的周期高度不規(guī)則時)。在LMP方法可能不適合的情況下作為替
代方法、或用來證實LMP方法確定的預(yù)產(chǎn)期時，可以進(jìn)行超聲掃描。 胎兒的大小可以用來確定預(yù)產(chǎn)期。但是，如果掃描在懷孕第13周之后 進(jìn)行，通過超聲檢査確定的預(yù)產(chǎn)期的準(zhǔn)確性就極大地降低了。此外， 通過超聲檢查確定預(yù)產(chǎn)期需要熟練的醫(yī)師并使用昂貴和笨重的設(shè)備。 提供可以簡單進(jìn)行的準(zhǔn)確的確定預(yù)產(chǎn)期的方法將是有優(yōu)勢的。根據(jù)本發(fā)明人的了解，迄今尚未提出可以在測量激素的基礎(chǔ)上確 定預(yù)產(chǎn)期。發(fā)明簡述在實施方案中，確定胚胎著床的估計日期的方法可以包括對來自 懷孕人類女性受試者的體液樣品進(jìn)行化驗，以便獲得表明了樣品中人類絨毛膜促性腺激素(hCG)的濃度的數(shù)據(jù)，并且從hCG的濃度數(shù)據(jù) 計算出著床的估計日期。在實施方案中，確定胚胎著床的估計日期的裝置可以包括對hCG 濃度數(shù)據(jù)作出反應(yīng)的數(shù)據(jù)處理器以計算估計的著床日期。體液樣品可以是其中存在具有代表性水平的hCG的任何體液(例 如血液、血漿、血清)。優(yōu)選的體液是尿液。對于本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè) 技術(shù)人員來說，測定尿液中hCG濃度的方法是眾所周知的。附圖簡述現(xiàn)在，將伴隨著說明性的實施例并參考隨附的圖對主題內(nèi)容進(jìn)行 進(jìn)一步描述，其中
圖1和2是顯示了尿液中hCG濃度(單位為mlU/ml)對時間(著 床后的天數(shù))的圖；以及圖3顯示了適合用于執(zhí)行本發(fā)明公開的方法的電子測試結(jié)果讀取 裝置的透視圖。
發(fā)明詳述本公開的方法可以包括體液樣品中hCG濃度的測定。hCG濃度可 以以相對的方式測定(例如與參考值或閾值相比)，但是更優(yōu)選的是以絕對的方式測定hCG的濃度(例如通過測量每毫升體液樣品中hCG 的mIU數(shù))?，F(xiàn)有的分析體液樣品中hCG的方法包括免疫學(xué)技術(shù)(即，使用與 hCG特異性結(jié)合的免疫球蛋白、特別是單克隆抗體)，這樣的技術(shù)可 以方便地與本文公開的裝置和方法一起使用。特別優(yōu)選的是使用可以 由婦女自己在家中進(jìn)行的、或者可以由全科醫(yī)生簡單地進(jìn)行、而不需 求助于實驗室設(shè)備或分析的測試技術(shù)。從這一點來說，橫流分析裝置 是特別有用的，既便宜又使用簡單。現(xiàn)有許多橫流分析裝置適合于測量尿液中的hCG，因為它們構(gòu)成 了大多數(shù)家用懷孕測試試劑盒的基礎(chǔ)。這樣的裝置的例子在EP 0291194中有公開。但是，總的來說，這些裝置還不是非常理想地適合于使用在本公 開的方法中，因為它們僅僅提供了定性的測試結(jié)果(即"懷孕"或"未 懷孕")，而定量的結(jié)果是優(yōu)選的。盡管從幾十年前就已經(jīng)知道hCG 的濃度在懷孕早期急劇地增加(因此可以作為懷孕的可靠的診斷指 標(biāo))，但是從未提出過hCG的濃度可以用來計算受精的估計日期和/ 或預(yù)產(chǎn)期。典型的家用懷孕測試試劑盒包括了使用浸棒(dipstick)橫流裝置， 其上浸滲有標(biāo)記的hCG特異性免疫試劑，導(dǎo)致它在存在含有hCG的樣 品的情況下可以在測試結(jié)果區(qū)發(fā)生積累。標(biāo)記物一般是直接標(biāo)記物， 例如有色的珠子或膠體金。用戶目視檢査裝置是必需的，用戶必需根 據(jù)測試區(qū)域中積累的標(biāo)記物的量來解釋測試結(jié)果。 一種類型的hCG分析裝置提供有相應(yīng)的讀數(shù)器(可以從Unipath Limited, Bedford, UK購買到的CLEARBLUE EASY⑧數(shù)字懷孕測試裝 置)，其中含有可以檢測和測量積累的標(biāo)記物的量的光學(xué)測量系統(tǒng)。 分析讀數(shù)裝置可以含有顯示測試結(jié)果的液晶顯示(LCD)窗。這樣的 分析裝置/測試結(jié)果讀數(shù)器組合經(jīng)過適當(dāng)?shù)木幊?，可以用于本公開的方 法。本公開的方法可以從在單獨的一天獲得的體液的單一樣品的hCG 濃度的測定值計算出預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受精日期。但是，如果需要的 話，可以測定在兩天或更多天時從受試者獲得的樣品中的hCG濃度。 測定在兩天或三天獲得的樣品中的hCG濃度，在某種程度上能夠增加 預(yù)測的準(zhǔn)確性，而測定在四天獲得的樣品中的hCG濃度可以在準(zhǔn)確性 方面提供更顯著的進(jìn)步。在其中的體液樣品在多天獲得的實施方案中， 每次樣品可以在每天的大約相同的時間(例如+/-1小時)采得，以減少 樣品成分的變化。例如，在取樣的體液是尿液時，每天對早晨尿液樣 品進(jìn)行hCG測試是有利的，以便減少由于尿液產(chǎn)出量的差別所引起的 變化。如果測試多個樣品(在不同天獲得)，可以在連續(xù)的天中采樣， 此外，也可以在取樣日之間間隔一天或多天，只要最后的取樣日在總 的測試窗之內(nèi)就行。激素的濃度被用于估計胚胎著床于子宮的日期。預(yù)產(chǎn)期和估計的 受精日期可以從估計的著床日期計算出來。著床日期的估算是通過考 慮了 hCG水平，并結(jié)合憑經(jīng)驗確定的方程式來確定激素濃度開始升高 的曰期。該天被取作估計的著床日期。特別令人吃驚的發(fā)現(xiàn)是一個hCG濃度數(shù)據(jù)點就足以相當(dāng)準(zhǔn)確地確 定著床日期，特別是如果樣品是在懷孕早期取得的話(最多在著床后 大約15天)。兩個樣品點可以提高準(zhǔn)確性(例如減少了測試系統(tǒng)中的校正誤 差)，特別是如果樣品點被至少48小時的間隔隔開時。有利的情況是， 如果僅使用兩個樣品點，樣品在隔開至少5天取得，方便的話隔幵至少6或7天(例如一個樣品在著床后大約15天，而另一個樣品在著床 后大約22天)。通過取至少3個或至少4個樣品可以進(jìn)一步提高準(zhǔn)確性。樣品可 以在連續(xù)的天中取得，但是在至少兩次取樣之間也可以有至少大約48 小時的時間間隔。樣品可以在規(guī)則的或不規(guī)則的時間間隔獲取，但是 每個(或至少絕大部分)應(yīng)該在一天的大約同樣的時間取得。例如， 樣品可以在著床后第IO、 15、 20和25天取得，或可以在著床后第15、 17、 24和26天取得。但是，在頭腦中應(yīng)該保持的是，在確定預(yù)產(chǎn)期和 /或估計的受精日期中，最高的準(zhǔn)確性并不總是必需的，在大多數(shù)情況 下，基于僅僅一個或兩個數(shù)據(jù)點的計算可能就足夠了。正如前面提到的那樣，測定hCG濃度的免疫學(xué)技術(shù)是特別優(yōu)選的。 免疫試劑的性質(zhì)不是通用的，例如，不同hCG特異性的抗體具有不同 的結(jié)合親和性。因此，將本公開的方法規(guī)定為參考任何具體的算法是 不適合的，但是，在本公開的幫助下，本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員將能夠 容易地根據(jù)例如所用的抗體或其它試劑、標(biāo)記物、檢測/測量系統(tǒng)等， 為所需的具體分析測試系統(tǒng)確定適合的算法。懷孕早期，在血清和尿液樣品中hCG的水平呈指數(shù)增加。對大量 懷孕婦女樣本尿液中hCG濃度的研究顯示出，盡管排卵后特定曰的 hCG濃度在個體之間變化很大(這是可以預(yù)期的)，有些令人吃驚的 是， 一旦hCG高于背景，可以發(fā)現(xiàn)不同樣品間hCG的值作為從第一次 高于背景開始的時間的函數(shù)，通常是一致的。因此，hCG濃度可以被 用來反推以提供測試樣品中第一次出現(xiàn)hCG高于背景的估計日期，該 日期接近對應(yīng)于著床日期，這又反過來允許確定預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受 精日期(受精一般發(fā)生在著床前7天，+/-2天；預(yù)產(chǎn)期可以被確定為 著床日期加37周)。
著床后hCG濃度的指數(shù)增加持續(xù)大約另外4或5周，之后hCG 濃度趨于平穩(wěn)，因此在該時間階段之外進(jìn)行的hCG測量不能用于準(zhǔn)確 地測定估計的著床日期。因此， 一次或(優(yōu)選)多次hCG濃度測試可以在婦女的最后一次 經(jīng)期后大約8周內(nèi)、或大約7周內(nèi)、或大約6周內(nèi)進(jìn)行，與確定預(yù)產(chǎn) 期的LMP方法不同，不需要婦女回憶起她的最后一次經(jīng)期的準(zhǔn)確日期。
本公開的方法因為是基于生理學(xué)數(shù)據(jù)，因此可以提供比LMP方法 提供的更準(zhǔn)確的預(yù)產(chǎn)期。與超聲掃描方法不同，本方法可以非常容易 地進(jìn)行，不需要使用昂貴的設(shè)備，不需要高度的技巧和訓(xùn)練，可以由 孕婦本人、其他人或保健專業(yè)人員進(jìn)行，不需要有經(jīng)驗的超聲波檢查醫(yī)師。
本方法可以適合于在廣泛的數(shù)值范圍內(nèi)準(zhǔn)確測量hCG濃度，因為 hCG濃度在短時期內(nèi)升高得很快，從著床時的0mlU/ml到著床后大約 2周時的大約1000rnIU/mI (尿液中)。如果需要，可以使用一種特殊 的測量技術(shù)在著床后短時間內(nèi)進(jìn)行hCG測試，然后可以使用不同的測 量技術(shù)進(jìn)行隨后的hCG測試。但是，優(yōu)選使用適合于在最后一次經(jīng)期 后多達(dá)6到8周的相應(yīng)測試窗期間的任何時間進(jìn)行適于hCG測量的單 一的技術(shù)。可以用于hCG濃度測量的技術(shù)包括HPLC、 Western雜交、 SDS-PAGE、酶或熒光免疫分析，但是，正如前面提到的那樣，優(yōu)選的 測量技術(shù)使用，免疫層析橫流類型的裝置，它既便宜又靈敏，且易于使 用。另一方面，公開了用于確定預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受精日期的裝置。 該裝置一般來說適合并被調(diào)適為用于前面定義的方法。更具體來說， 用于確定孕婦中出現(xiàn)胚胎的預(yù)產(chǎn)期和/或估計的著床日期和/或受精日 期的裝置可以包含數(shù)據(jù)處理器，以按照編程在裝置中的適當(dāng)?shù)乃惴ㄌ幚韍CG濃度數(shù)據(jù)，以便確定估計的著床日期和/或預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受精曰期。hCG濃度數(shù)據(jù)可以通過例如從用戶界面如鍵盤輸入數(shù)據(jù)來提 供給裝置。此外，裝置可以含有測量從婦女獲得的體液樣品中的hCG 濃度的系統(tǒng)，以便提供hCG濃度數(shù)據(jù)，然后可以直接被數(shù)據(jù)處理器處 理，而不需要由用戶輸入數(shù)據(jù)。示例性的系統(tǒng)在例如2003年12月19 日提交的美國專利申請Ser. No. 10/741,416 (US 2005-0037510 Al)， 2003年12月19日提交的美國專利申請Ser. No. 10/742,459 (US 2005-0037511 Al)和2004年4月1日提交的美國專利申請Ser. No. 10/816,216 (US 2005-0036148 Al)中有公開。裝置還可以包含顯示器以顯示測定的預(yù)產(chǎn)期和/或估計的著床曰 期和/或估計的受精日期。顯示器可以包括電子字母數(shù)字顯示器例如液 晶顯示器。裝置可以包含數(shù)據(jù)輸出元件，用于向設(shè)備的某些其它部件 輸出測定的預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受精日期，例如提供有單獨的顯示器的 個人計算機(jī)。在優(yōu)選實施方案中，裝置可以采取試劑盒的形式，包含有電子測 試結(jié)果讀取裝置(類似于可以從Unipath Limited, Bedford, UK購買的 CLEARBLUEEASY⑧數(shù)字懷孕測試裝置)，以與一次性橫流分析測試 棒一起使用。測試棒本身將與婦女的尿液樣品相接觸，然后插入到電 子結(jié)果讀取裝置中，該讀取裝置典型地將使用光學(xué)系統(tǒng)測量在測試棒 測試區(qū)域中積累的標(biāo)記物的量(例如透射率或反射率讀數(shù)以測量相應(yīng) 的從測試區(qū)域透射或反射的光的量，而這個量又反過來依賴于測試區(qū) 域中沉積的標(biāo)記物的量)。讀取裝置可以包含數(shù)據(jù)處理器，它將根據(jù) 測量值確定樣品中hCG的濃度，并根據(jù)裝置中編程的算法處理hCG濃 度數(shù)據(jù)，從而獲得預(yù)產(chǎn)期和/或估計的受精日期(可以方便地通過作為 中間步驟確定估計的著床日期獲得)。有利的是數(shù)據(jù)處理器將含有微處理器。如果裝置以在多天進(jìn)行 hCG測試的方式使用，對于讀取裝置來說，含有某種日歷(優(yōu)選為電
子形式的日歷)和數(shù)據(jù)儲存裝置以儲存先前的hCG測試結(jié)果，將是合 乎需要的。讀取裝置優(yōu)選也將含有整合的電源，例如紐扣式鋰電池或 其它電池，也可能是太陽能裝置例如光伏電池。與測試結(jié)果讀取裝置一起使用的測試棒一般來說可以是常規(guī)的。 但是，正如前面提到的那樣，hCG測試方法優(yōu)選能夠在較寬的不同hCG濃度范圍內(nèi)提供準(zhǔn)確的結(jié)果。常規(guī)的hCG特異性測試棒一般沒有被構(gòu)建成提供這種可能性，因為在懷孕測試中只需要定性的結(jié)果。 這個問題的一種解決方法是提供大量不同的測試棒，稱為例如"低"、"中"和"高"測試棒；"低"測試棒用于在著床后不久進(jìn)行測試，用于hCG濃度范圍為10-100 mlU/ml;"中"測試棒用于hCG 濃度范圍為100-1,000 mlU/ml，"高"測試棒用于接近測試窗的末期， hCG濃度范圍為1 ，000-10,000+ mlU/ml。另一種并且是優(yōu)選的解決方法是提供修改過的單一測試棒，以便 能夠在較寬的hCG濃度值范圍內(nèi)提供準(zhǔn)確的結(jié)果。 一種對常規(guī)測試棒 進(jìn)行修改以擴(kuò)展它能夠提供的準(zhǔn)確定量結(jié)果的范圍的方法，是提供多 個測試區(qū)域，例如"低"、"中"和"高"區(qū)域，分別對應(yīng)于上面指 出的濃度范圍。作為說明，單一的測試棒可以提供有固定化的捕獲試劑，沉積在 三個分離的測試區(qū)域中當(dāng)hCG濃度低時(著床后不久)，基本上所 有的hCG都將被捕獲(直接或間接地)在最上游的"低"測試區(qū)域中。 含有較高濃度hCG的較晚的樣品，將趨于飽和"低"測試區(qū)，因此大 量的hCG將被捕獲在"中"測試區(qū)域中。在測試窗中更晚期、當(dāng)樣品 含有更高濃度的hCG時，"中"測試區(qū)域也將變得飽和，而大量的hCG 將被捕獲在"高"測試區(qū)域中。讀取裝置將被編程以辨別不同的區(qū)域， 例如根據(jù)位置/空間，從而確定h C G濃度的準(zhǔn)確結(jié)果。
盡管上面的描述涉及的是三個測試區(qū)域的使用，但同樣也能夠使 用含有例如兩個或四個hCG濃度測試區(qū)域的測試棒，而事實上，含有 兩個測試區(qū)域的測試棒由于制作和使用更簡單和便宜，可能是更優(yōu)選 的。在某些實施方案中，其它方面也可以包括測量體液樣品中的促黃體生成激素(LH)(優(yōu)選為尿液中的LH)。頻繁地測量LH可以便于 檢測剛好在排卵前發(fā)生的LH的"高漲"。關(guān)于發(fā)生排卵的知識可以使 用戶能夠估計何時可能發(fā)生著床(大約7天之后)，從而估計出何時 開始測試hCG。測試尿液LH濃度的方法對于本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來 說也是眾所周知的，方便的方法也包括使用橫流免疫層析裝置(例如 在EP 0291194中公開的那些)。因此，在一個實施方案中，試劑盒可 以包含一個或多個用于測量體液樣品中的hCG的測試棒； 一個或多個 用于測量體液樣品中的LH的測試棒；裝備有適當(dāng)編程的數(shù)據(jù)處理器和 顯示器的測試結(jié)果讀取裝置；能夠檢測從體液樣品獲得的LH測試結(jié)果 中的LH高漲、并從中計算出開始測試樣品的hCG濃度的hCG測試起 始日期、并通過顯示器向用戶指出hCG測試起始日期的讀取裝置；其 中的讀取裝置也被編程，以確定和顯示從hCG濃度數(shù)據(jù)推演出的預(yù)產(chǎn) 期和/或估計的受精日期。試劑盒可以提供有一種以上類型的測試棒，例如兩種測試棒一 種用于測試LH;第二種用于測試hCG。此外，試劑盒也可以提供有可 用于同時測定LH和hCG濃度的單一類型的測試棒(例如從加到測試 棒上的單一尿液樣品測定)。本公開的方法和裝置可用于多種用途。例如，焦急期待的母親可 以在懷孕早期通過測量hCG和計算預(yù)產(chǎn)期再次確證懷孕的正常進(jìn)行。 這對于經(jīng)歷第一次懷孕或經(jīng)歷過反復(fù)的流產(chǎn)的婦女來說是特別適用 的。在某些情況下，確定估計的受精日期可以幫助鑒定可能的父親。 此外，異常的hCG濃度數(shù)據(jù)可以用于獲得可能的問題(例如宮外孕、 流產(chǎn))或多次受精的早期指示。為了避免不確定，在此明確說明，只要上下文允許，任何被描述 為"優(yōu)選的"、"有利的"、"所希望的"或用類似術(shù)語描述的特點 在本發(fā)明中可以單獨使用，也可以與任何其他特點或這樣描述的特點 組合使用。術(shù)語"包含"、"含有"、"包括"、"具有"以兼容開放的意 義使用，意味著可以包含其它的元素。本文使用的術(shù)語"例如"是非 限制性的，僅僅是為了說明的目的。"包括"和"包括但不限于"可 以互換使用。實施例 實施例1作為對女性生殖周期過程中不同激素濃度變化進(jìn)行的較大的研究 的一部分，從一組女性志愿者收集到樣品。每天收集早晨的尿樣，使 用標(biāo)準(zhǔn)的免疫學(xué)分析技術(shù)對它們進(jìn)行分析，以獲得多種被分析物、包括尿液中hCG、 LH、促卵泡激素(FSH)等的濃度值。隨后對數(shù)據(jù)的 分析顯示出，在那些在研究過程中懷孕的婦女中，正如預(yù)期，尿液的 hCG濃度快速增加。但是，令人吃驚的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)激素濃度對 時間作的圖可以沿時間軸平移并使其幾乎完全重疊。也就是說，不同 個體之間hCG增加的進(jìn)程沒有很大變化，不同個體之間的差別在很大 程度上是由于hCG濃度開始升高的時間不同。這種升高開始發(fā)生的時 間被取作胚胎在子宮著床的估計時間。典型的結(jié)果顯示在圖1中，它 是hCG濃度(單位為mlU/ml)的對數(shù)對時間(著床后的天數(shù))的圖。 可以看到各個數(shù)據(jù)點簇近似于從經(jīng)驗獲得的回歸曲線。圖2顯示了同樣的數(shù)據(jù)，以尿液的hCG濃度(單位為mlU/ml) 的對數(shù)對時間(著床后的天數(shù))作圖，但是從懷孕開始持續(xù)了較長的 時間。該圖顯示出在著床后大約25天后，hCG濃度增加的速度與較早
表現(xiàn)出的指數(shù)增加速度相比明顯降低，到著床后大約35天時達(dá)到平臺， 從而使本公開的方法不再能夠可靠地使用，因為這時將不可能準(zhǔn)確地 確定著床日期以及預(yù)產(chǎn)期或估計的受精日期。實施例2根據(jù)數(shù)據(jù)，本發(fā)明人能夠推導(dǎo)出許多算法，可以用于根據(jù)測量的hCG濃度值估計著床日期。使用圖1中顯示的數(shù)據(jù)可以推導(dǎo)出下面的方程<formula>formula see original document page 16</formula> (方程l) 其中h是樣品中hCG的濃度，以mlU/ml表示，t-t。是測量日期和 著床日期之間的天數(shù)，a是系數(shù)(在本情況中是1.99)。根據(jù)圖2中顯示的使用稍微有些不同的hCG分析技術(shù)獲得的數(shù) 據(jù)，a的值被發(fā)現(xiàn)是2.15。參數(shù)a的值反映出了所用的分析系統(tǒng)的特點， 一般依賴于所用的具體的檢測技術(shù)(例如特定的抗體)和/或被檢測的 hCG的具體形式。因此，選擇的系統(tǒng)應(yīng)該用已知的標(biāo)準(zhǔn)品(例如從根 據(jù)排卵日期準(zhǔn)確知道妊娠階段的懷孕女性獲得的樣品)進(jìn)行校正。對 于本文描述的分析系統(tǒng)來說，參數(shù)a的值可以在大約1.8到大約2.3的 范圍內(nèi)，更具體來說在大約1.91到大約2.23之間，更具體在大約1.99 到大約2.15的范圍內(nèi)。本文報告的測量是從夾心式分析方法、利用識 別hCG的禾P 鏈的抗體、使用來自Perkin Elmer的DELFIA分析系 統(tǒng)獲得的。值1.99是使用Unipath的抗體克隆3299和3478獲得的。 值2.15是使用Perkin Elmer的抗體獲得的。據(jù)此，給定了 hCG濃度的單一測量值，根據(jù)方程計算出從著床起所過去的時間(單位為天) <formula>formula see original document page 16</formula>然后可以通過從取樣或測量樣品的日期中減去t-tQ的天數(shù)計算出 估計的著床日期。從計算的著床日期，通過加上大約37周或大約259天可以確定出 預(yù)產(chǎn)期。受精日期通過從著床日期減去5到9天、優(yōu)選7天(+/-2天) 估計出來。受精日期可以被報告為計算的著床日期前的第7天，誤差 范圍+/-2天?；蛘?，受精日期也可以報告為計算的著床日期前的5到9 天的范圍內(nèi)，或報告為這些日期之一。實施例3在計算著床日期中，導(dǎo)致不確定性的一個原因是參數(shù)"a"的值在 不同的人之間有變化(盡管可能比在本發(fā)明之前預(yù)測的誤差小)。誤 差的另一個原因是尿液中hCG的濃度在任何給定的一天中在平均值附 近隨機(jī)波動。本發(fā)明人研究了是否可以通過使用多次hCG濃度測定(例 如測量兩次，間隔7天)來減小這些誤差的原因。通過使用在不同的兩天獲得的不同的log(hCG)值直接解方程2來 估計參數(shù)a和t。的嘗試沒有成功，因為對值(log(hCG)-1.86)取立方使誤 差放大了。由于log(hCG)的微小波動導(dǎo)致的對a值估算的小量誤差， 可以引起對t。估算的大的誤差。但是，下面的方法似乎能夠令人滿意 地工作。根據(jù)方程1， log(hCG)-時間曲線的斜率是 ^^1 = 0.33"(,-,。)-。'67 (方程3)解方程2求a，并將a的表達(dá)式代入方程3，得到 + , log/ + 1.86 廣卡主口 /i 、 如果兩個值差n天測量，t,是第一次測量的時間，0.51og(h,h2)表示 兩個測量值對數(shù)的平均值，1og(h2/hi)表示兩個測量值對數(shù)的差，那么<formula>formula see original document page 18</formula> (方程5)
或<formula>formula see original document page 18</formula> (方程6)
如果進(jìn)行3次或以上的測量，那么可以對方程2實行標(biāo)準(zhǔn)的回歸 方法(例如最小二乘方，特別是單形或非線性二乘方)，以便在預(yù)計 值范圍的基礎(chǔ)上，不用預(yù)先假定除此約束條件之外的a值，就可以獲得 to值。如果a的估算值落在預(yù)計范圍之外，或給出了無意義的t。值(例 如身體上不可能的時間或受試者已知不會懷孕的時間)，那么算法可 以提示進(jìn)行進(jìn)一步的測量以提高估計的準(zhǔn)確性，或可以警告需要調(diào)查 可能的懷孕的并發(fā)癥。實施例4本文公開的適合于用于本公開的方法的裝置采取試劑盒的形式， 包括了電子的、電池供電的測試結(jié)果讀取裝置，以及多個(典型為3 或4個)用于測量尿液樣品中hCG濃度的測試棒。測試結(jié)果讀取裝置 非常類似于可以從Unipath Limited (Bedford, UK)購買到的 CLEARBLUE EASY⑧數(shù)字讀取裝置，它顯示在圖3中。讀取裝置包含了用合成塑料材料制成的不透明的外殼2。在外殼2 的一端有可以插入測試棒4的孔眼。提供有各種指導(dǎo)和定位幫助器， 以便測試棒4可以相對于讀取裝置放置在準(zhǔn)確的位置上。讀取裝置還 包括彈出按鍵6，激活它將導(dǎo)致測試棒4 (在讀取時)從讀取裝置中 彈出；LCD視窗8，可用于顯示信息和通知。測試棒被提供有可拆卸 的帽10。在不透明的外殼2內(nèi)部、因此在圖3中無法看見，是對測試棒進(jìn) 行光學(xué)測量(例如透射或反射讀數(shù))的光學(xué)系統(tǒng)。在2004年4月1日 提交的美國專利申請Ser. No. 10/816,216 (US 2005-0036148 Al)中描述了一些示例性的光學(xué)系統(tǒng)。光學(xué)測量一般依賴于測試棒上一個或多個 測試區(qū)域中沉積的標(biāo)記物的量，它又反過來依賴于施加到測試棒上的 樣品中存在的被分析物的濃度。讀取裝置還包含了紐扣類型的扁平的鋰電池、微處理器和內(nèi)存裝 置。微處理器被編程以從進(jìn)行的光學(xué)測量計算hCG濃度，此外還用適 當(dāng)?shù)乃惴硗饩幊桃允褂玫玫降膆CG濃度確定著床日期以及最可能的 受精日期和預(yù)產(chǎn)期，這兩部分信息可以在液晶顯示窗口 8中顯示。實施例不應(yīng)以任何方式解釋為限制。所有引用的參考文獻(xiàn)的內(nèi)容 在此明確地引為參考。
權(quán)利要求
1. 確定胚胎著床的估計日期的方法，包括對來自懷孕人類女性受試者的體液樣品進(jìn)行化驗，以便獲得指示 樣品中人類絨毛膜促性腺激素(hCG)的濃度的數(shù)據(jù)；并且從hCG的 濃度數(shù)據(jù)計算出著床的估計日期。
2. 確定懷孕人類女性受試者預(yù)產(chǎn)期的方法，包括 按照權(quán)利要求1確定胚胎著床的估計日期；以及通過在估計的著床日期上加上大約37周計算預(yù)產(chǎn)期。
3. 確定人類胎兒的估計受精日期的方法，包括按照權(quán)利要求1 確定胚胎著床的估計日期；以及通過從估計的著床日期減去7天+/-2 天計算估計的受精日期。
4. 權(quán)利要求1、2或3任何一個中的方法，其中的確定在單次hCG 濃度測量的基礎(chǔ)上作出。
5. 權(quán)利要求1、2或3任何一個中的方法，其中的確定在多次hCG 濃度測量的基礎(chǔ)上作出。
6. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中的hCG濃度數(shù)據(jù)從著床 后多達(dá)15天的時間間隔內(nèi)收集的 一 個或多個樣品獲得。
7. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中的hCG濃度數(shù)據(jù)從女性 受試者最后一次經(jīng)期后多達(dá)8周的時間間隔內(nèi)收集的一個或多個樣品 獲得。
8. 權(quán)利要求7中的方法，其中的一個或多個樣品從女性受試者最 后 一 次經(jīng)期后多達(dá)7周的時間間隔內(nèi)收集。
9. 權(quán)利要求7中的方法，其中的一個或多個樣品從女性受試者最 后 一 次經(jīng)期后多達(dá)6周的時間間隔內(nèi)收集。
10. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中的取樣的體液是尿液。
11. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中的hCG濃度數(shù)據(jù)通過使用體液樣品進(jìn)行橫流免疫分析而獲得。
12. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，進(jìn)一步包括監(jiān)測受試者以檢測排卵或與排卵相關(guān)事件的步驟。
13. 權(quán)利要求12中的方法，其中的監(jiān)測包括測量周期性從受試者 收集的體液樣品、優(yōu)選尿液中的促黃體生成激素(LH)。
14. 前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中估計的著床日期的計算包括使用下式計算著床后已經(jīng)過去的時間t-tQ (單位為天) —一 (log/;+ 1.86)3其中的h是樣品中hCG的濃度，單位為mIU/ml， a是用于獲得hCG濃度數(shù)據(jù)的測試系統(tǒng)特征的范圍內(nèi)的值。
15. 權(quán)利要求14中的方法，其中的測試系統(tǒng)包含識別hCG的和 鏈至少其中之一的抗體。
16. 權(quán)利要求14中的方法，其中的計算步驟還包括從取樣的日期 減去t-t0。
17. 權(quán)利要求14中的方法，進(jìn)一步包括通過從取樣的日期減去t-t。 并加上大約37周來計算預(yù)產(chǎn)期的步驟。
18.權(quán)利要求14中的方法，進(jìn)一步包括通過從取樣的日期減去t-t,并再減去7天+/-2天來計算估計的受精日期的步驟。
19.前面權(quán)利要求任何一個中的方法，其中的hCG濃度數(shù)據(jù)是使 用包含識別hCG的和鏈至少其中之一的抗體的測試系統(tǒng)獲得的。
20.權(quán)利要求l-3任何一個中的方法，其中兩個樣品相隔n天取樣，估計的著床日期to被計算為<formula>formula see original document page 4</formula>其中的、和h2分別是第一次和第二次測量時樣品中的hCG濃度， 單位為mlU/ml， ^是第一次測量的時間，單位為天。
21.權(quán)利要求l-3任何一個中的方法，其中取樣3次或更多次，估計的著床日期t。通過對下面的等式使用標(biāo)準(zhǔn)的最小二乘回歸方法計算 (log力屮1.86)3其中對應(yīng)于每個樣品，t是測量的時間，單位為天，h是樣品中hCG 的濃度，單位為mlU/ml， a是出用于獲得hCG濃度數(shù)據(jù)的測試系統(tǒng)特 征的范圍內(nèi)的值。
22.檢測異常妊娠的方法，包括從懷孕人類女性受試者獲得至少兩個體液樣品；使用測試系統(tǒng)測量每個樣品中hCG的濃度；通過對下面的等式進(jìn)行回歸估算a和/或t。的值 <formula>formula see original document page 4</formula>其中對應(yīng)于每個樣品，t是測量的時間，h是樣品中hCG的濃度， 單位為mlU/ml;以及如果a落在測試系統(tǒng)特征的范圍之外，或者如果t。是無意義的值， 則認(rèn)為妊娠異常。
23. 測定胚胎的估計著床日期的裝置，包含對hCG濃度數(shù)據(jù)作 出反應(yīng)的數(shù)據(jù)處理器，用于計算估計的著床日期。
24. 權(quán)利要求23中的裝置，進(jìn)一步包括用于測量從受試者獲得的 體液樣品中的hCG濃度、以便提供hCG濃度數(shù)據(jù)的測量系統(tǒng)。
25. 權(quán)利要求23或24中的裝置，進(jìn)一步包括顯示器，用于顯示 估計的胚胎著床日期。
26. 權(quán)利要求23、 24或25任何一個中的裝置，進(jìn)一步包括用于 測量從受試者獲得的體液樣品中的LH濃度的系統(tǒng)，以及任選包括用于 提示用戶何時進(jìn)行試驗測量hCG濃度的顯示器。
27. 權(quán)利要求23-26任何一個中的裝置，進(jìn)一步包括一個或多個一 次性的橫流測試檢測棒和電子測試結(jié)果讀取器。
28. 權(quán)利要求23-27任何一個中的裝置，其中的數(shù)據(jù)處理器通過用 下面方程計算從著床后過去的時間t-tQ (單位為天)來計算估計的著床 曰期<formula>formula see original document page 5</formula>其中的h是樣品中hCG的濃度，單位為mlU/ml， a是用于獲得hCG濃度數(shù)據(jù)的測試系統(tǒng)特征的范圍內(nèi)的值。
29. 權(quán)利要求23-28任何一個中的裝置，進(jìn)一步包括用于測量hCG 測試信號的光學(xué)檢測系統(tǒng)。
30. 權(quán)利要求23-29任何一個中的裝置，含有橫流測試裝置。
31. 用于估算胚胎著床日期的設(shè)備，包括用于獲得指示懷孕人 類女性受試者的體液樣品中hCG濃度的數(shù)據(jù)的測量裝置；以及用于從 hCG濃度計算估計的著床日期的裝置。
全文摘要
確定胚胎著床的估計日期的方法，可以包括對來自懷孕人類女性受試者的體液樣品進(jìn)行化驗，以便獲得表明了樣品中人類絨毛膜促性腺激素(hCG)的濃度的數(shù)據(jù)，并且從hCG的濃度數(shù)據(jù)計算出著床的估計日期。
文檔編號G01N33/76GK101147069SQ200580049221
公開日2008年3月19日 申請日期2005年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月24日
發(fā)明者戴維·愛德華·威廉姆斯 申請人:因弗因斯醫(yī)藥瑞士股份有限公司
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