專利名稱：用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法及其試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物工程技術領域，具體地說涉及一種用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法及其試劑盒。
背景技術：
檢測生物(包括人類)組織樣本中特定蛋白質因子的含量，對于醫學、生物學、農業等領域的應用和基礎研究具有非常重要的意義。例如，檢測病原微生物的特異性蛋白質組分是目前診斷傳染病的重要手段；同樣，測定癌癥的早期生物標記性蛋白質因子含量的變化對于疾病的早發現早治療和療效觀察極為重要。根據不同的應用目標，待測分析物可以是一種或幾種蛋白質，也可以是數目不等的一組蛋白質，而近年來基因組學和蛋白質組學研究和應用的飛速發展，更要求能夠同時多重性檢測生物組織樣本中幾百幾千種蛋白質乃至整個蛋白質組。
為滿足這些要求，近年來各種檢測方法應運而生，例如免疫檢測技術、雙向凝膠電泳、質譜分析和肽圖譜分析等等。其中最方便、應用范圍最廣也是目前使用最多的是免疫技術中的酶聯免疫吸附檢測(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，簡稱ELISA)。經典的酶聯免疫檢測采用能夠和同一種抗原的不同抗原決定簇結合的兩種不同但是互相配合的抗體來完成，一種抗體和抗原的結合不干擾另一種抗體和同一抗原分子的結合。這種方法稱為夾心酶聯免疫吸附檢測(Sandwich ELISA)，其技術要點是(1)將捕獲抗體(capture antibody)包被在某一固相表面上(通常是微量板的微孔內部表平面)；(2)加入生物樣本或其它待測樣本，使其中含有的分析物(抗原)與捕獲抗體特異性結合，然后洗除未結合的非特異性物質；(3)加入標有報道分子(酶、生物素、熒光素等熒光基團或其他類型分子)的探測抗體(detection antibody)，使之與被捕獲的分析物特異性結合，然后洗除未結合的探測抗體；(4)加入使報道分子產生信號的相關試劑(例如親和素、酶的底物)，然后測定信號強度，或者直接測定報道分子(例如熒光強度等)。根據信號的強度，參照分析物的已知濃度標準校準曲線，從而確定樣本中分析物的濃度。雖然Sandwich ELISA特異性比較高，靈敏度也比較高，通常可達0.5-2ng/ml。但是該方法的應用有三個重要局限性。第一，如果要建立檢測一種分析物的Sandwich ELISA檢測方法，首先必須擁有針對該分析物的兩種不同抗體(捕獲抗體和探測抗體)，而且要求這兩種抗體對該抗原都擁有高度親合力，同時它們之間必須互相配合，即捕獲抗體和抗原蛋白質的結合不影響探測抗體對同一抗原分子的結合。這些要求在很大程度上限制了Sandwich ELISA的應用，這是因為，一種蛋白質被鑒定提純后，在實際工作中往往要經過很多努力、很長時間才能獲得上述能夠互相配合的一對抗體。而對于那些分子量較小或者只有1-2個抗原決定簇的蛋白質(或蛋白質結構域)，在實驗中就更難獲得兩個互相配合的抗體。第二，Sandwich ELISA方法通常要求在每種探測抗體上都用人工方法標記酶或其他信號分子。如果同時定量檢測成百上千甚至上萬種蛋白質，就要把每一種蛋白質的探測抗體都進行標記，這一工作量十分巨大，而且會因為人工標記條件和效率的不同而造成不同批量探測抗體之間的差異。此外，標記過程的化學修飾可能影響到探測抗體對抗原的結合。第三，在多重性檢測多種蛋白質時，必須把所有蛋白質相對應的探測抗體都混合到一起，由此造成每個單一抗體的稀釋和非特異性結合的增加，降低特異性信號和靈敏度，擴大檢測噪音。這些局限性使Sandwich ELISA方法的應用受到很大限制，尤其是很難成為蛋白質組學(蛋白質芯片技術)研究應用的主要技術平臺。
為了克服Sandwich ELISA的上述局限，人們提出并實驗了若干種改進方法，例如，將生物樣本中的所有抗原預先用熒光化合物等報道分子進行直接標記(Miller等，2003.Proteomics.3∶56-63)。然后與固定在固相載體上的檢測抗體結合，洗除非特異性物質后，直接檢測結合在固相抗體上的被標記的抗原。這個方法雖然簡單易行，只需要一種抗體(捕獲抗體)就能夠進行檢測。但缺點是，第一，生物樣本中含有成千上萬種大小分子，其中很多會干擾標記效率，含量低的蛋白質往往難以有效地被標記。第二，標記過程本身可能修飾改變蛋白質分子上的抗原決定簇特征，降低甚至抑制與抗體的結合。實驗結果已經證明，抗原預先標記檢測方法通常本底噪音大，靈敏度低。為了提高檢測靈敏度，最近還提出了在Sandwich ELISA方法中以DNA寡聚核苷酸來標記探測抗體，然后用聚合酶鏈反應(PCR)或滾環復制(rolling circle replication)方法擴增信號，這些方法雖然可以較大程度上提高檢測靈敏度，但是檢測手段過于繁瑣、成本太高，而且上述Sandwich ELISA方法的幾個局限性依然存在。
發明內容
為了克服現有免疫檢測方法的不足，本發明公開了一種新的檢測方法，只需采用一種捕獲劑就能靈敏地、簡便地定量檢測分析物。這一方法稱為“特異性分析物標記及再捕獲法”，英文名稱是“Specific AnalyteLabeling and Recapture Assay”，簡稱SALRA。其原理是將被捕獲劑捕獲的分析物用報道分子標記；再將經過標記的分析物從復合物上洗脫下來，與新的固相捕獲劑再結合，通過檢測報道分子的標記信號來確定分析物含量。SALRA方法適用于各類基于固相方法的檢測平臺，例如微孔板、濾膜、蛋白質(抗體)芯片、微珠(beads)，等等。SALRA方法既可以用來檢測一種或幾種抗原，也可以用于多重性同時檢測幾十種幾百種乃至成千上萬種不同蛋白質；既可以檢測抗體與抗原蛋白質的結合，也可以檢測非免疫性的蛋白質-蛋白質結合或者蛋白質與其他類型分子的結合。同時，SALRA方法還能被用來快速分離鑒定產生單克隆抗體的雜交瘤株系。本發明還提供了一種用于用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法的試劑盒。
本發明用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法，其特征在于(1)捕獲分析物將捕獲劑包被到固相表面，成為捕獲裝置；加入待測生物樣本，使捕獲裝置上的捕獲劑與樣本中的特異性分析物結合，形成捕獲劑-分析物復合物；(2)標記復合物用報道分子標記捕獲劑-分析物復合物；(3)洗脫分析物將經過標記的分析物從復合物上洗脫下來；(4)再捕獲將洗脫下的分析物中和及稀釋后與檢測裝置上的捕獲劑再結合，所說的檢測裝置是指包被了捕獲劑的固相表面；(5)檢測洗去檢測裝置上未結合的非特異性物質后，通過檢測報道分子的標記信號強度來確定分析物含量。
本發明方法中所說的捕獲劑可以是抗體、抗體片段、非抗體類蛋白質、肽、寡聚核苷酸或小分子化合物，當捕獲劑是抗體時，所說的抗體最好是單克隆抗體；本發明中所說的分析物是能與所說的捕獲劑特異性結合的抗原蛋白質、抗體、其他蛋白質、肽、寡聚核苷酸適體、其他生物大分子及其復合物、小分子化合物、亞細胞結構，等等。
本發明方法中所說的報道分子，包括但不限于生物素、熒光素或其他熒光物質、酶、肽、寡聚核苷酸。
以下以抗體-抗原為例，來進一步說明用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法(1)將捕獲抗體(單克隆抗體)包被到固相表面，例如微量板、微孔表面、尼龍(或其它介質)濾膜表面、微珠表面，等等；該固相表面將用來捕獲生物樣本中的特異性抗原，稱為“捕獲裝置”；根據檢測系統、檢測目標和樣本特點的不同，捕獲裝置上包被的抗體或者是一種，或者是多種混合在一起(用于同時檢測多種抗原)；包被完成后，洗去未結合的抗體分子，用過量的非特異性蛋白質(例如脫脂奶粉或牛血清蛋白)封阻固相表面上未結合的平面空間，然后再洗去非特異性蛋白質。
加入待測生物樣本，使捕獲裝置上的抗體結合并“捕獲”樣本中的特異性抗原，形成緊密結合的抗體-抗原復合物；然后洗去未與抗體結合的非特異性蛋白質和其他組成成分。
(2)用報道分子標記捕獲劑-分析物復合物。例如加入能夠共價標記修飾蛋白質側鏈基團的小分子，這些小分子攜帶某種報道分子(生物素、熒光基團等)，從而將報道分子連接到被結合到捕獲裝置抗體上的抗原蛋白質分子表面。例如，基于N-羥基琥珀酰亞胺(N-hydroxysuccinimide，簡稱NHS)的化合物，包括NHS-生物素、NHS-熒光素、NHS-肽或NHS-寡聚核苷酸，能夠將攜帶的報道分子(生物素、熒光素、肽、寡聚核苷酸等)共價結合在蛋白質的賴氨酸自由氨基上。以NHS-生物素為例，由于賴氨酸幾乎普遍存在于所有的蛋白質中，因此NHS-生物素能夠標記幾乎的所有蛋白質。這里要著重指出的是，抗原和抗體的緊密結合使抗原分子上的特異性抗原決定簇受到保護而不被NHS-生物素修飾，仍然保持對特異性抗體的結合能力。因此，在后續步驟中抗體-抗原復合物解離分開后，該抗原分子能夠重新和同樣的抗體結合形成新的復合物。除了生物素，根據檢測系統和目標的不同也可以選用其他報道分子(信號基團)，比如寡聚核苷酸或熒光基團(例如NHS-熒光素)，以熒光基團作為報道分子尤其適用于蛋白質芯片檢測系統。除了NHS，也可以用能夠共價修飾蛋白質其它基團(如巰基、羧基或羥基)的活性小分子進行標記。
(3)用含有過量自由氨基的溶液(例如Tris-HCl緩沖液)淬滅并除去未與蛋白質共價結合的游離NHS-生物素。然后加入少量抗原洗脫液，讓標記過的抗原蛋白質從抗體-抗原復合物上離解出來。可以采用0.1M的檸檬酸(pH2.8)作為抗原洗脫液，或者使用目前市場上存在的抗原洗脫液(例如美國PIERCE公司的ImmunoPure洗脫液)。然后將含有抗原蛋白質的洗脫液移出，加入3-10倍體積的緩沖液(含有非特異性蛋白質如脫脂奶粉等)中和并稀釋抗原洗脫液，以提高pH值，降低抗原洗脫液的濃度，使之不再影響抗原蛋白質和同一抗體的再結合。
(4)將中和的標記有報道分子的抗原加入到“檢測裝置”進行檢測。根據檢測系統和檢測目標的不同，檢測裝置可以由微孔板、尼龍濾膜、微珠、玻璃或塑料薄片(蛋白質芯片)等固體表面承載。檢測裝置固相表面結合著和捕獲裝置上同樣類型的抗體，并且已經經過非特異性蛋白質的封阻。然而，和捕獲裝置不同的是，檢測裝置上的抗體均單獨存在，不混合在一起。如果捕獲裝置包被著的是混合在一起的多種抗體，這些抗體在檢測裝置上將被獨立分開，互不混淆。如果檢測裝置的固相載體是微孔板，那么每個微孔只結合有一種抗體；如果檢測裝置的固相載體是蛋白質芯片，那么芯片上抗體成陣列分布，每種抗體在陣列中均占有獨特的地理位置。檢測裝置上抗體的結合和封阻應該提前進行，當上述第“3”步驟完成，即捕獲裝置上被標記的抗原從抗體上洗脫下來并中和稀釋后，能夠立即轉移至檢測裝置。
(5)在檢測裝置上，已被標記的抗原與相應的特異性抗體重新結合(再捕獲)，洗去未結合的非特異蛋白質后，即可進行信號測定。比如，如果報道分子是生物素，可以加入標記有某種酶(通常為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)的親和素蛋白，親和素蛋白和生物素具有極強的親和力，從而把所攜帶的酶固定在被再捕獲的抗原分子表面。洗掉未結合的親和素蛋白后，加入該酶的底物，使之產生顏色、熒光或發光，即可鑒定酶的活性。如果報道分子是熒光基團，則可以直接測讀或掃描熒光強度。通過這些信號，能夠計算出生物樣本中該特異性抗原蛋白質的含量。
本發明的貢獻在于，提供了一種只需要單一捕獲劑就能定量檢測特異性分析物的新流程如圖1所示，而在本方法各步驟中涉及到的具體操作技術，如包被捕獲劑的技術、捕獲劑和分析物結合的技術、顯示并測定報道分子信號強度的技術等，是本領域普通技術人員所熟知的。
一種用于本發明方法的試劑盒，其特征在于，包括捕獲裝置、檢測裝置，以及用于標記的報道分子和分析物洗脫液。
很顯然，本發明公開的用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法，能應用在臨床診斷、生物標記鑒定分析、蛋白質組學研究分析、新藥靶位鑒定分析、臨床藥物動力學和藥效學分析等領域。
和現有的酶聯免疫檢測相比，本發明所提出的SALRA檢測方法有如下優點(1)SALRA方法只需使用一種捕獲劑就能定量檢測分析物，也就是說只要一種抗體就能檢測一種抗原蛋白質，顯而易見，獲得一個單克隆抗體比獲得兩個互相配對的單克隆抗體要容易的多。因此，對于那些目前沒有Sandwich ELISA檢測方法的蛋白質，SALRA能夠迅速建立起檢測方法。而且，SALRA方法能夠檢測只擁有一個或幾個相鄰很近抗原決定簇的蛋白質分子或分子結構域，比如蛋白質的磷酸化狀態、蛋白質的重要功能域及其活化狀態、小肽、特異性寡聚核苷酸序列、有機化合物小分子，等等。因此，SALRA的適用范圍非常廣泛，將有力促進蛋白質組學研究應用、疾病診斷、新藥研制、食品及農產品衛生檢查和化合物殘留檢測、環境保護等等各個領域的工作。
(2)SALRA方法不需要標記抗體。無論同時檢測多少種蛋白質，只需要一種標記小分子即可。
(3)檢測特異性高、噪音低。SALRA方法有兩個步驟確保檢測的特異性和降低檢測噪音第一，捕獲裝置只捕獲樣本中的特異性分析物。進行標記時，絕大多數非特異性物質已經被洗去，因此只有結合在捕獲劑上的分析物才能得到標記，而不是標記樣本中所有的物質。第二，在檢測裝置上抗體重新捕獲被標記分析物的過程中，將進一步洗去非特異物質，使之無立足之地。
(4)靈敏度高。SALRA方法標記分析物的過程本身就是重要的信號放大步驟。例如用NHS-生物素標記抗原時，由于大多數抗原蛋白質都含有幾個、十幾個甚至幾十個賴氨酸，因此可以被標記上幾個、十幾個或幾十個生物素分子，使總體檢測信號和檢測靈敏度相應提高。同時，上述確保檢測特異性的兩個步驟也為提高檢測靈敏度開辟了空間由于檢測噪音低，研究人員可以選用比較溫和的清洗條件來增強抗體對特異性抗原的捕獲能力，這對于親和力比較低的抗體-抗原體系非常重要。此外，由于捕獲裝置和檢測裝置是分開的，可以把來自捕獲裝置的抗原適當濃縮后加入到檢測裝置，從而提高檢測靈敏度。例如，可以采用面積比較大的或者表面粗糙的微孔作為捕獲裝置的載體，增加捕獲固相的表面積，同時縮小檢測裝置的平面面積，以提高特異性抗原的濃度。
(5)SALRA方法尤其適合同時多重性檢測多種蛋白質。多重檢測時，只需在捕獲裝置上包被多種捕獲劑的混合液，而在檢測裝置上則將這些捕獲劑一一單獨分開，就能同時定量檢測多種分析物。采用SALRA方法只需要少量生物樣本就能檢測多種蛋白質，尤其適合小量樣本(例如組織活體檢查樣本)的多重性檢測和蛋白質組學檢測。
(6)SALRA的原理和方法也適用于檢測非抗體-抗原關系的蛋白質-蛋白質之間或者蛋白質和其它分子之間的互作和結合。這些互作和結合對于研究生命運動、診斷疾病進程，研制新藥都非常重要。例如，為了鑒定生物樣本中某個蛋白質因子的含量，可以將能夠和該蛋白質結合的另一種蛋白質作為捕獲劑包被在捕獲裝置的固相表面，采用SALRA的原理，加入待測樣本，然后用小分子標記待測蛋白質因子，洗脫后加入到檢測裝置上和同一種作為捕獲劑的蛋白質重新結合，即可對其定量檢測。除了蛋白質，還可以用其他物質作為捕獲劑，比如肽、核酸、多糖、脂類、甚至小分子等等，來檢測與其特異性結合的各類分析物，例如蛋白質、肽、核酸適體、小分子，等等。
圖1是本發明方法的流程示意2是實施例1的檢測結果3是實施例2的檢測結果圖具體實施方式
以下結合圖1的步驟來進一步闡述本發明方法。
實施例1單一性檢測(檢測一種蛋白質)在本實施例子中，捕獲裝置和檢測裝置都是96-孔微量板。捕獲裝置的每個微孔包被一種抗體，用來檢測一種抗原蛋白質。待測抗原蛋白質為四種細胞因子(cytokines)，分別為IL-1-beta、IL-4、IL-8和GM-CSF。其相應的抗體均為單克隆抗體。
(1)捕獲抗原蛋白質a.包被捕獲抗體取兩個96-孔微量板(平底，對蛋白質高度結合)，一個用于捕獲樣本中的抗原(捕獲裝置)，另一個用于檢測標記的抗原(檢測裝置)。微孔內分別加入100μl濃度為0.5μg/ml(稀釋于PBS緩沖液)的抗IL-1-beta、IL-4、IL-8或GM-CSF的單克隆抗體。每個微孔只加有一種抗體，每個微量板上每種抗體加入8個微孔。將微量板置于4度過夜。
b.封阻非特異性結合位點移去捕獲裝置和檢測裝置微孔中的抗體溶液，用PBS+0.1％Tween 20(PBST)清洗1次。移去PBST，加入400μl的2％脫脂奶粉(溶于PBS)，在室溫下進行封阻。捕獲裝置的封阻時間為一小時；檢測裝置的封阻一直持續到使用前(約4小時)。
c.捕獲抗原蛋白質移去封阻溶液，根據抗體的分布，分別在微孔中加入100μl不同濃度的四種細胞因子(稀釋于PBS+1％脫脂奶粉)。室溫下1.5小時。
(2)標記抗原蛋白質移去未與固相抗體結合的細胞因子和非特異性物質，PBST清洗2次，PBS清洗1次。每一微孔加入100μl 0.02％NHS-生物素(溶于PBS)，室溫保持30分鐘。移去NHS-生物素，用10mM的Tris-HCl緩沖液(pH8.0)淬滅并清洗殘余的NHS-生物素(室溫下保持5分鐘)，然后移去Tris-HCl緩沖液。
(3)洗脫抗原加入20μl抗原洗脫液(使用美國PIERCE公司的ImmunoPure)，室溫下15分鐘。與此同時，移去檢測裝置微孔中的封阻溶液，加入180μlPBS+1％脫脂奶粉。
(4)抗原再捕獲將從捕獲裝置微孔中洗脫的抗原(約20μl)轉移至檢測裝置上含有對應抗體的微孔中。室溫下1小時。由于檢測裝置微孔已經含有180μlPBS+1％脫脂奶粉，抗原洗脫液被中和并稀釋10倍，不再影響到抗原和檢測裝置上特異性抗體的再結合(再捕獲)。
(5)檢測a.顯示信號移去未結合的物質，用PBST清洗2次，PBS清洗1次。加入100μl辣根過氧化物酶-親和素(用PBS+1％脫脂奶粉稀釋至1μg/ml)，室溫下30分鐘。然后用PBST清洗3次，PBS清洗1次。加入100μl過氧化物酶底物溶液(0.3mg/ml ABTS，0.02％過氧化氫)，37度30分鐘。讀測405nm波長光吸收。
b.檢測結果圖2顯示實施例1的檢測結果。供試的所有四個細胞因子的信號強度和濃度之間從100ng/ml到0.4ng/ml都展現按一定比例的線性關系，證明SALRA方法能夠在這一濃度范圍檢測這些蛋白質，靈敏度都至少可達0.4ng/ml。
實施例2多重性檢測(同時檢測三種蛋白質)在本實施例子中，捕獲裝置和檢測裝置都是96-孔微量板。捕獲裝置的每個微孔表面包被三種混合在一起的抗體，用來同時檢測三種抗原蛋白質。待測抗原蛋白質為三種細胞因子，分別為IL-1-beta、TNF-α和IL-10。其相應的抗體均為單克隆抗體。
(1)捕獲抗原蛋白質a.包被捕獲抗體取兩個96-孔微量板(平底，對蛋白質高度結合)，一個用于捕獲(捕獲裝置)，另一個用于檢測(檢測裝置)。捕獲裝置微孔內加入100μl抗IL-1-beta、TNF-α和IL-10的三種抗體混合液，每種抗體的濃度均為0.5μg/ml(稀釋于PBS緩沖液)，共加入8個微孔。而檢測裝置每個微孔只加有一種抗體，濃度為0.5μg/ml(稀釋于PBS緩沖液)，每種抗體加入8個微孔。將微量板置于攝氏4度過夜。
b.封阻非特異性結合位點同實施例1。
c.捕獲抗原蛋白質移去捕獲裝置微孔中的封阻溶液，分別在微孔中加入100μl上述三種細胞因子不同濃度的混合液(稀釋于PBS+1％脫脂奶粉)。室溫下1.5小時。抗原混合液中三種細胞因子的濃度如表1所示表1.三種細胞因子的濃度(ng/ml) (2)標記抗原蛋白質同實施例1。
(3)洗脫抗原加入20μl抗原洗脫液(同實施例1)，室溫下15分鐘。與此同時，移去檢測裝置微孔中的封阻溶液，加入60μl PBS+1％脫脂奶粉。
(4)抗原再捕獲將捕獲裝置微孔中洗脫的抗原分別加入至檢測裝置上的三個包被不同抗體的微孔，每孔6μl。室溫下1小時。由于檢測裝置微孔已經含有60μl PBS+1％脫脂奶粉，抗原洗脫液被中和并稀釋，不再影響到被標記的抗原和檢測裝置上特異性抗體的再結合(再捕獲)。
(5)檢測a.顯示信號同實施例1。
b.檢測結果圖3顯示實施例2的檢測結果。供試的三個細胞因子的信號強度和濃度之間從100ng/ml到0.4ng/ml都展現按一定比例的線性關系，證明SALRA方法能夠多重性地同時檢測多種蛋白質，本例中靈敏度都至少可達0.4ng/ml。
權利要求
1.一種用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法，其特征在于(1)捕獲分析物將捕獲劑包被到固相表面，成為捕獲裝置；加入待測生物樣本，使捕獲裝置上的捕獲劑與樣本中的特異性分析物結合，形成捕獲劑-分析物復合物；(2)標記復合物用報道分子標記捕獲劑-分析物復合物；(3)洗脫分析物將經過標記的分析物從復合物上洗脫下來；(4)再捕獲將洗脫的分析物中和及稀釋后與檢測裝置上的捕獲劑再結合，所說的檢測裝置是指包被了捕獲劑的固相表面；(5)檢測通過檢測報道分子的標記信號強度來確定分析物含量。
2.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于其中所說的捕獲劑是抗體、抗體片段、非抗體類蛋白質、肽、寡聚核苷酸或小分子化合物。
3.根據權利要求2所述的定量檢測方法，其特征在于其中所說的抗體是單克隆抗體。
4.根據權利要求1所說的分析物是能與所說的捕獲劑特異性結合的抗原蛋白質、抗體、肽、寡聚核苷酸適體、其他生物大分子及其復合物、小分子以及亞細胞結構。
5.根據權利要求1、2、3或4所述的定量檢測方法，其特征在于，所說的報道分子是生物素、熒光素或其他熒光基團、酶、肽或寡聚核苷酸。
6.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，其中所說的捕獲裝置的固相表面是試管、微量板、濾膜、測試紙或微珠；所說的檢測裝置的固相表面為微量板、濾膜、測試紙、微珠、玻璃或塑料薄片載體。
7.權利要求1所述的定量檢測方法，在臨床診斷、生物標記鑒定分析、蛋白質組學研究分析、新藥靶位鑒定分析、臨床藥物動力學和藥效學分析中的應用。
8.一種用于權利要求1所說的用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法的試劑盒，其特征在于，包括捕獲裝置、檢測裝置，以及用于標記的報道分子和分析物洗脫液。
全文摘要
本發明涉及一種用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法及其試劑盒。用單一捕獲劑定量檢測特異性分析物的方法是先使待測分析物與固相捕獲劑結合，再將被捕獲劑捕獲的分析物用報道分子標記；之后將經過標記的分析物從復合物上洗脫下來，與新的固相捕獲劑再結合，通過檢測報道分子的標記信號來確定分析物含量。用于本發明方法的試劑盒，包括捕獲裝置、檢測裝置，以及用于標記的報道分子和分析物洗脫液。本發明的有益效果是只需一種捕獲劑，能夠檢測許多目前無法檢測的分析物，應用范圍廣、靈敏度高、檢測噪音低，在疾病診斷、醫學鑒定、新藥研制、蛋白質微陣和芯片應用和基礎研究等領域有很好的應用前景。
文檔編號G01N33/543GK1700009SQ20051004029
公開日2005年11月23日 申請日期2005年5月30日 優先權日2005年5月30日
發明者孫東旭 申請人:孫東旭
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