国产自产21区,亚洲97,免费毛片网,国产啪视频,青青青国产在线观看,国产毛片一区二区三区精品

專利名稱：一種量子點(diǎn)生物探針及其制備方法和基于其的微流控蛋白質(zhì)芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種量子點(diǎn)生物探針及其制備方法 和基于其的微流控蛋白質(zhì)芯片。
背景技術(shù)：
隨著對(duì)微觀生物世界研究的深入，研究者們往往需要收集極少數(shù)量甚至
單個(gè)生物分子反應(yīng)所釋放的信號(hào)，如在微型化生物檢測(cè)中收集痕量DNA分 子、蛋白質(zhì)分子、藥物分子或病毒分子等與信號(hào)探針相互作用所產(chǎn)生的信號(hào)， 以便進(jìn)行后續(xù)分析。但如此超微量級(jí)的信號(hào)是極其微弱的，甚至采用最精密 的儀器也無(wú)法探測(cè)到，這也是先進(jìn)的探測(cè)手段如蛋白質(zhì)芯片等難以走向真正 應(yīng)用的原因之一。就蛋白質(zhì)芯片而言，靈敏度問(wèn)題嚴(yán)重影響了其技術(shù)性能， 因?yàn)榈鞍踪|(zhì)芯片的各個(gè)反應(yīng)單元所能采集到的信息量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常規(guī)反應(yīng)，所 以要收集這些微量信息必須采用高靈敏的信號(hào)探針，才能達(dá)到對(duì)樣品中多種 低豐度蛋白質(zhì)的分析目的。所以為了提高探測(cè)靈敏度，采用高亮信號(hào)探針用 于超微量生物分子的檢測(cè)是目前檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的重要趨勢(shì)之一。
具體而言，在應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片探測(cè)未知靶蛋白質(zhì)的時(shí)候，需要加入一種 信號(hào)標(biāo)記的靶蛋白質(zhì)配體分子等作為信號(hào)探針，并實(shí)現(xiàn)其與靶蛋白的結(jié)合， 形成復(fù)合物。然后，相應(yīng)數(shù)量的復(fù)合物發(fā)出相應(yīng)數(shù)量的信號(hào)。當(dāng)單個(gè)配體分 子上所標(biāo)記的信號(hào)量不足的時(shí)候，在探測(cè)極少量受體分子時(shí)，所形成的極少 量復(fù)合物發(fā)出的信號(hào)是極其微弱的，因此嚴(yán)重影響了探測(cè)的靈敏度，進(jìn)而降 低了探測(cè)的準(zhǔn)確度，造成不同程度的分析誤差。如果采用高亮信號(hào)物質(zhì)標(biāo)記 配體分子，可以構(gòu)建一個(gè)高亮信號(hào)探針，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶蛋白分子的超微量探測(cè)與分析。
1998年Alivisatos和Nie等分別首次報(bào)道了利用量子點(diǎn)替代有機(jī)熒光染 料制備生物分子標(biāo)記物，預(yù)示了量子點(diǎn)生物標(biāo)記物(QDbioconjugates)在生 物檢測(cè)中的應(yīng)用潛力。自此，量子點(diǎn)生物標(biāo)記物開始被應(yīng)用于核酸或蛋白質(zhì) 的生物分析，逐步證實(shí)了量子點(diǎn)作為新型熒光試劑的優(yōu)越性，比較典型的例 子是Ornberg和Bakalova等分別建立了基于量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫印跡技術(shù)，靈 敏度較傳統(tǒng)的免疫印跡提高了兩個(gè)數(shù)量級(jí)以上。目前納米量子點(diǎn)已被應(yīng)用于 常規(guī)體外分析(US2001/0023078、 CN1515909)或傳感器制作(US6379622), 以及作為生物偶聯(lián)的光學(xué)成像探針進(jìn)行組織和細(xì)胞的研究 (WO2006/001848、 WO2006/005065)等。遺憾的是，在量子點(diǎn)標(biāo)記物用于 蛋白質(zhì)芯片研究方面，雖然也有少數(shù)個(gè)例的嘗試，但其結(jié)果只是建立了分析 模型，或是展示了其在克服雜蛋白自身熒光背景方面的性能，而在提高芯片 的靈敏度方面并未取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種用于蛋白質(zhì)芯片的量子點(diǎn)生物探 針及其制備方法，其中量子點(diǎn)選用包覆有高分子聚合物的量子點(diǎn)納米微球。
本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，由高分子聚合物包覆量子點(diǎn)構(gòu)成的量子點(diǎn)納米 微球，在生物分子特別是蛋白質(zhì)標(biāo)記中，它不僅較單純的量子點(diǎn)具有更高的 量子效率，而且物化性質(zhì)更加穩(wěn)定，與生物分子的相容性更佳，非常適合在 蛋白質(zhì)芯片中的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明提供的一種量子點(diǎn)生物探針，其是量子點(diǎn)納米微球和靶蛋 白配體連接而成的量子點(diǎn)-生物復(fù)合探針。
根據(jù)本發(fā)明，所說(shuō)的量子點(diǎn)納米微球是由常規(guī)量子點(diǎn)和高分子聚合物聚 合而成，其粒徑通常為35 50nm;其中所說(shuō)的常規(guī)量子點(diǎn)可以是水溶性量子 點(diǎn)，也可以是有機(jī)相量子點(diǎn)，而所說(shuō)的高分子聚合物可包括聚乳酸、聚丙烯 胺、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚異丙烯酰胺、聚乙烯亞胺和聚乙烯醇等，通
過(guò)高分子聚合物的包覆，使常規(guī)量子點(diǎn)表面衍生出各種活性官能團(tuán)，如羧基
(—COOH)、醛基(一CHO)、氨基(一NH2)、環(huán)氧基等；所述的量子點(diǎn) 納米微球可參照現(xiàn)有技術(shù)，如CN1912047A公開的方法制備。本發(fā)明優(yōu)選 CdTe及核殼量子點(diǎn)CdTe/CdS等水溶性量子點(diǎn)，包覆聚丙烯酸、聚丙烯酰胺 等高分子聚合物構(gòu)成的水溶性量子點(diǎn)納米微球?yàn)槔齺?lái)進(jìn)行說(shuō)明。
根據(jù)本發(fā)明，所述的靶蛋白配體為各種可與靶蛋白質(zhì)分子特異性結(jié)合的 生物分子，如免疫球蛋白、抗體片斷、核酸適體、融合蛋白和蛋白質(zhì)復(fù)合體 等。
而本發(fā)明所述的量子點(diǎn)生物探針的制備方法，其包括將量子點(diǎn)納米微球 和靶蛋白配體進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，并將偶聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行純化。量子點(diǎn)納米微球通過(guò) 其表面所衍生的各種活性官能團(tuán)，來(lái)實(shí)現(xiàn)與靶蛋白配體的偶聯(lián)。從理論上說(shuō)， 可以通過(guò)調(diào)整量子點(diǎn)納米微球與靶蛋白配體之間的比例，在量子點(diǎn)納米微球 表面連接一個(gè)或一個(gè)以上不同數(shù)目的靶蛋白配體。為減少交聯(lián)物的形成，采 用耙蛋白配體過(guò)量的方法，使量子點(diǎn)納米微球表面的偶聯(lián)基團(tuán)充分飽和，使 得量子點(diǎn)納米微球之間不會(huì)交聯(lián)在一起。較佳地，每個(gè)量子點(diǎn)納米微球上組 裝10 200個(gè)靶蛋白配體分子。
在配體分子與量子點(diǎn)納米微球之間通過(guò)物理吸附結(jié)合的基礎(chǔ)上，為制備 更穩(wěn)定的復(fù)合探針，更佳地可以選擇化學(xué)偶聯(lián)方式增強(qiáng)二者之間的有效連 接；換言之，本發(fā)明偶聯(lián)反應(yīng)中還可采用偶聯(lián)劑，諸如生物偶聯(lián)反應(yīng)中常選 用的碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺等。
同其他生物偶聯(lián)反應(yīng)，本發(fā)明反應(yīng)完畢后需進(jìn)行純化，即除去未反應(yīng)的 原料及副產(chǎn)物。所述的純化方法也可以選用現(xiàn)有技術(shù)，例如離心、超濾和/ 或滲濾等方法。其中超濾或滲濾可選用300K左右的超濾離心管或500K左 右滲濾膜包，收集各組分，選擇高分子量組分，即通常分子量》靶蛋白配體 單體分子量10 50倍，作為最后產(chǎn)物。
由于不同粒徑和結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn)具有不同熒光，故可以將不同粒徑和/或結(jié)
構(gòu)的量子點(diǎn)與不同的靶蛋白配體進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)得到各種偶聯(lián)物，作為蛋白質(zhì) 芯片中的多色信號(hào)探針(檢測(cè)探針)。
因此，本發(fā)明還提供一種微流控蛋白質(zhì)芯片，其包括靶蛋白、捕獲探針 和信號(hào)探針，其中信號(hào)探針采用上述本發(fā)明的量子點(diǎn)生物探針。
根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)所述的微流控蛋白質(zhì)芯片為單向微流控蛋白質(zhì)芯片時(shí)，
其中不同靶蛋白所對(duì)應(yīng)的作為信號(hào)探針的生物探針帶有不同熒光光譜的量 子點(diǎn)。具體來(lái)說(shuō)在單向微流控芯片反應(yīng)區(qū)域固定多種靶蛋白捕獲探針，各 種探針在該區(qū)域按一定比例均勻分布；當(dāng)耙蛋白樣品通過(guò)微流控通道流經(jīng)該 區(qū)域時(shí)，各種靶蛋白被相應(yīng)的捕獲探針捕獲并結(jié)合為一級(jí)復(fù)合物；然后通過(guò) 微流動(dòng)力系統(tǒng)及微型管道將包含有不同量子點(diǎn)標(biāo)記的信號(hào)探針引入反應(yīng)區(qū) 域，并與所形成的各種一級(jí)復(fù)合物結(jié)合，形成各種二級(jí)復(fù)合物；每種靶蛋白 所對(duì)應(yīng)的二級(jí)復(fù)合物含有一種量子點(diǎn)的納米微球，不同的靶蛋白對(duì)應(yīng)不同的 量子點(diǎn)的納米微球，具有不同熒光光譜；在一定發(fā)射光譜范圍內(nèi)測(cè)量各種量 子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，即可獲得相應(yīng)靶蛋白的定性和定量信息。
更特別的是，當(dāng)所述的微流控蛋白質(zhì)芯片為雙向微流控蛋白質(zhì)芯片時(shí)， 其中不同耙蛋白所對(duì)應(yīng)的作為信號(hào)探針的生物探針可以帶有相同熒光光譜 的量子點(diǎn)，即可以是一種量子點(diǎn)，而無(wú)需采用不同量子點(diǎn)的納米微球標(biāo)記不 同靶蛋白的信號(hào)探針。具體來(lái)說(shuō)通過(guò)一個(gè)方向的多條微流控管道在微流控 芯片反應(yīng)區(qū)域固定多種靶蛋白捕獲探針，每條微型管道對(duì)應(yīng)一種捕獲探針； 樣品通過(guò)與前一方向非平行的一條或多條微型管道流經(jīng)芯片反應(yīng)區(qū)域，并與 其呈交叉狀態(tài)，靶蛋白與相應(yīng)交叉區(qū)域的對(duì)應(yīng)捕獲探針結(jié)合形成一級(jí)復(fù)合 物；然后通過(guò)微流動(dòng)力系統(tǒng)及微型管道將包含有相同量子點(diǎn)的納米微球標(biāo)記 的不同信號(hào)探針引入反應(yīng)區(qū)域，并與所形成的各種一級(jí)復(fù)合物結(jié)合，形成各 種二級(jí)復(fù)合物；各種靶蛋白所對(duì)應(yīng)的二級(jí)復(fù)合物均含有相同量子點(diǎn)的納米微 球，具有相同的熒光光譜；在同一固定波段測(cè)定量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，各種二 級(jí)復(fù)合物將在蛋白質(zhì)芯片的特定空間位置上給出與靶蛋白數(shù)量對(duì)應(yīng)的信號(hào)
強(qiáng)度，經(jīng)后續(xù)數(shù)據(jù)分析可以實(shí)現(xiàn)特定靶蛋白的定性和定量分析。
本發(fā)明通過(guò)量子點(diǎn)納米微球表面所衍生的上述各種活性官能團(tuán)，實(shí)現(xiàn)與
靶蛋白配體的偶聯(lián)，構(gòu)建多色信號(hào)探針，熒光量子效率達(dá)到60%以上，蛋白 質(zhì)配體活性保持在50%以上。而本發(fā)明依賴量子點(diǎn)納米微球的高量子效率特 性，可實(shí)現(xiàn)靶蛋白的高靈敏同步多元分析。


圖1為基于本發(fā)明水溶性CdTe量子點(diǎn)聚丙烯酸納米微球探針的雙向微 流控蛋白質(zhì)芯片分析圖。
圖2為基于本發(fā)明水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)聚丙烯酰胺納米微球探針的 雙向微流控蛋白質(zhì)芯片分析圖。
具體實(shí)施例方式
下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。 實(shí)施例1 3
1、水溶性CdTe量子點(diǎn)聚丙烯酸納米微球的制備(參照CN1912047A制 備)(1)碲氫化鉀制備將110.5毫克KBH4固體和91.6毫克Te粉放入到 一個(gè)小的燒瓶中，加入3毫升水，于0攝氏度下反應(yīng)20個(gè)小時(shí)后，可得到 KHTe溶液，備用；(2) CdTe前體溶液制備將36.8毫克CdCl2溶于100 毫升水，加入0.05毫升巰基乙酸，用0.5摩爾/升的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH=11.0, 注入0.30毫升KHTe溶液，作為CdTe前體溶液；(3)含有聚合物的碲化鎘 CdTe前體溶液制備將5毫升濃度為0.00001 mol/L的聚丙烯酸(M^2,000) 溶液加入CdTe前體溶液，攪拌20分鐘，作為含有聚合物的碲化鎘CdTe前 體溶液制備；(4)微波輻射制備聚合物包裹的CdTe量子點(diǎn)將所得到的含 有聚合物的碲化鎘CdTe前體溶液進(jìn)行微波輻射加熱，可得到聚合物包裹的 CdTe量子點(diǎn)，即量子點(diǎn)納米微球?？刂茥l件如下微波功率100W;反應(yīng)
溫度120°C;反應(yīng)時(shí)間5min。
2、 將150uL表面帶有活性基團(tuán)為羧基的水溶性CdTe量子點(diǎn)聚丙烯酸納 米微球(5uM)分別與100uL氨基衍生的凝血酶核酸適體(實(shí)施例1)、氨基 衍生的血小板生長(zhǎng)因子核酸適體(實(shí)施例2)或氨基衍生的免疫球蛋白E蛋 白核酸適體(實(shí)施例3) lmM (0.5M PBS， 0.1%NaN3， pH6.5)、以及5uL 碳化二亞胺(500mM)和5uL N-羥基琥珀酰亞胺(100mM)混合，室溫反 應(yīng)2小時(shí)后，4'C過(guò)夜。
3、 反應(yīng)液用300K超濾離心管(美國(guó)PALL公司)超濾，收集濾膜上層 組分，作為最后產(chǎn)物。
4、 測(cè)定收集液在波長(zhǎng)260nm處的紫外吸收，并用熒光分析儀檢測(cè)熒光 強(qiáng)度。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線插入法計(jì)算得出，每個(gè)水溶性量子點(diǎn)納米微球所偶聯(lián)的 核酸配體分子數(shù)為100 200。熒光光譜法測(cè)得熒光量子效率達(dá)到75%，雜 交分析法測(cè)得配體活性保持在95 % 。
上述實(shí)施例中各核酸適體由上海生工生物工程公司合成。 實(shí)施例4~6
1、水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)聚丙烯酰胺納米微球的制備(參照 CN1693207A及CN1912047A制備)(1 )碲氫化鈉制備將92.7毫克NaBH4 固體和127.6毫克Te粉放入到一個(gè)小的燒瓶中，加入3毫升水，于15攝氏 度下反應(yīng)7個(gè)小時(shí)后，可得到NaHTe溶液備用；(2) CdTe量子點(diǎn)制備將 22.5毫克CdCl2溶于100毫升水，加入0.03毫升巰基乙酸，用0.5摩爾/升的 NaOH溶液調(diào)節(jié)pH-9.5,通氮?dú)?0分鐘，升溫至100攝氏度，注入0.2毫 升NaHTe溶液，反應(yīng)3小時(shí)，得到CdTe量子點(diǎn)溶液；(3) CdTe/CdS前體 溶液制備將18.5毫克CdCl2和5.6毫克Na2S溶于100毫升水，加入0.06 毫升巰基乙酸，用0.5摩爾/升的NaOH容顏調(diào)節(jié)pH=10.5，注入10毫升CdTe 量子點(diǎn)溶液，得到CdTe/CdS前體溶液；(3)含有聚合物的CdTe/CdS前體 溶液制備將0.5毫升濃度為0.05mol/L的聚丙烯酰胺(Mw=15,000)溶液
加入CdTe/CdS前體溶液，攪拌15分鐘，作為含有聚合物的CdTe/CdS前體 溶液制備；(4)微波輻射制備聚合物包裹的CdTe/CdS量子點(diǎn)將所得到的 含有聚合物的CdTe/CdS前體溶液進(jìn)行微波輻射加熱，可得到聚合物包裹的
CdTe/CdS量子點(diǎn)?？刂茥l件如下微波功率100W;反應(yīng)溫度100。C; 反應(yīng)時(shí)間20min。
2、 將150uL酰胺基團(tuán)衍生的水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)聚丙烯酰胺納米微 球(5uM)經(jīng)0.5%戊二醛活化后，與100uLCA125 (實(shí)施例4)、 CA19-9 (實(shí) 施例5)或CA15-3 (實(shí)施例6)等3種蛋白質(zhì)的單克隆抗體(商購(gòu)自美國(guó) FITZGERALD公司)100uM (0.5MPBS， 0.1%NaN3， pH7.5)混合，室溫反 應(yīng)2小時(shí)后，4'C過(guò)夜。
3、 反應(yīng)液通過(guò)蠕動(dòng)泵及管路進(jìn)入500k滲濾膜包(美國(guó)PALL公司)， 收集各組分，選擇高分子量組分(通常分子量》免疫球蛋白分子量單體10 倍)作為最后產(chǎn)物。
4、 測(cè)定收集液在波長(zhǎng)280nm處的紫外吸收，并用熒光分析儀檢測(cè)熒光 強(qiáng)度。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線插入法計(jì)算得出，每個(gè)量子點(diǎn)聚合體所偶聯(lián)的免疫球蛋 白分子數(shù)為10 50。熒光光譜法測(cè)得熒光量子效率達(dá)到70%，免疫分析法 測(cè)得配體活性保持在90%。
實(shí)施例7
采用聚二甲基硅氧垸(PDMS)制備相互垂直的雙向微流控通道，方法 可參考本發(fā)明人的專利申請(qǐng)文件，申請(qǐng)?zhí)枮镃N200610117234,X。該微通道 與芯片基片通過(guò)物理方法進(jìn)行可逆封合。
1、 將凝血酶、血小板生長(zhǎng)因子和免疫球蛋白E等3種蛋白質(zhì)的單克隆 抗體(商購(gòu)自美國(guó)FITZGERALD公司)通過(guò)3條同一方向的獨(dú)立微流控通 道固定在芯片反應(yīng)區(qū)，3種抗體的濃度均為150mg/L， 2小時(shí)后進(jìn)行洗漆和 封閉等后處理。
2、 將濃度為20pg/ml、 50pg/ml、 100pg/ml、 200pg/ml和500pg/ml的凝
血酶、血小板生長(zhǎng)因子和免疫球蛋白E等3種耙蛋白通過(guò)與步驟1中微通道 方向垂直的另一方向的微流控通道進(jìn)入芯片反應(yīng)區(qū)域，流動(dòng)速度為2微升/ 小時(shí)，5分鐘后停止進(jìn)樣。
3、 芯片經(jīng)洗滌后，以與步驟2中同樣的進(jìn)樣方式將實(shí)施例1 3獲得的 同種量子點(diǎn)的聚丙烯酸納米微球分別標(biāo)記的凝血酶、血小板生長(zhǎng)因子和免疫 球蛋白E等3種蛋白質(zhì)的核酸適體的混合液注入芯片反應(yīng)區(qū)域，5分鐘后停 止進(jìn)樣。
4、 芯片經(jīng)洗滌后在熒光檢測(cè)器(德國(guó)ZEISS公司AXIOSKOP2型)下 觀察靶蛋白與信號(hào)探針的反應(yīng)情況，采集各空間分離的反應(yīng)單元內(nèi)的量子點(diǎn) 信號(hào)，應(yīng)用儀器配套軟件進(jìn)行信號(hào)數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果如圖1所示，基于水溶性CdTe量子點(diǎn)聚丙烯酸納米微球探針的雙 向微流控蛋白質(zhì)芯片可以實(shí)現(xiàn)的耙蛋白檢測(cè)最低限為5pg/ml。 實(shí)施例8
同實(shí)施例7，采用雙向微流控通道的蛋白質(zhì)芯片。
1、 將CA125、 CA19-9和CA15-3等3種蛋白質(zhì)的單克隆抗體(分別與 實(shí)施例4 6所采用單克隆抗體配對(duì)；商購(gòu)自美國(guó)FITZGERALD公司)通過(guò) 3條同一方向的獨(dú)立微流控通道固定在芯片反應(yīng)區(qū)，3種抗體的濃度均為 150mg/L， 2小時(shí)后進(jìn)行洗滌和封閉等后處理。
2、 將濃度為10pg/ml、 20pg/ml、 50pg/ml、 100pg/ml、 200pg/ml的CA125、 CA19-9和CA15-3等3種耙蛋白通過(guò)與步驟1中微通道方向交叉的另一方向 的微流控通道進(jìn)入芯片反應(yīng)區(qū)域，流動(dòng)速度為2微升/小時(shí)，5分鐘后停止進(jìn) 樣。
3、 芯片經(jīng)洗滌后，以與步驟2中同樣的進(jìn)樣方式將實(shí)施例4 6所得納 米微球單克隆抗體信號(hào)探針混合液注入芯片反應(yīng)區(qū)域，5分鐘后停止進(jìn)樣。
4、 芯片經(jīng)洗滌后在熒光檢測(cè)器(德國(guó)ZEISS公司AXIOSKOP2型)下 觀察靶蛋白與信號(hào)探針的反應(yīng)情況，采集各空間分離的反應(yīng)單元內(nèi)的量子點(diǎn)
信號(hào)，應(yīng)用儀器配套軟件進(jìn)行信號(hào)數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果如圖2所示，基于水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)聚丙烯酰胺納米微球探 針的雙向微流控蛋白質(zhì)芯片可以實(shí)現(xiàn)的靶蛋白檢測(cè)最低限為lpg/ml。
可見，本發(fā)明量子點(diǎn)生物探針作為信號(hào)探針的微流控蛋白質(zhì)芯片，其檢 測(cè)結(jié)果具有較佳的靈敏度。
權(quán)利要求
1.一種量子點(diǎn)生物探針，其是量子點(diǎn)納米微球和靶蛋白配體連接而成的量子點(diǎn)-生物復(fù)合探針。
2、 如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)生物探針，其特征在于所述的量子點(diǎn)納 米微球?yàn)榘灿懈叻肿泳酆衔锏牧孔狱c(diǎn)，其中所述的高分子聚合物選自聚丙 烯酸和聚丙烯酰胺，所述的量子點(diǎn)選自CdTe和CdTe/CdS。
3、 如權(quán)利要求2所述的量子點(diǎn)生物探針，其特征在于所述的量子點(diǎn)為 水溶性量子點(diǎn)。
4、 如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)生物探針，其特征在于所述的靶蛋白配 體選自免疫球蛋白、抗體片斷、核酸適體、融合蛋白和蛋白質(zhì)復(fù)合體中的一 種或幾種。
5、 一種如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的量子點(diǎn)生物探針的制備方法，其 包括將量子點(diǎn)納米微球和靶蛋白配體進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，并將偶聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行純 化，最終偶聯(lián)產(chǎn)物中1分子量子點(diǎn)能帶上10 200個(gè)分子的靶蛋白配體。
6、 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的偶聯(lián)反應(yīng)中還可 采用偶聯(lián)劑。
7、 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的偶聯(lián)劑為碳化二 亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺。
8、 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的純化采用離心、 超濾或滲濾的方法。
9、 一種微流控蛋白質(zhì)芯片，其包括靶蛋白、捕獲探針和信號(hào)探針，其 特征在于所述的信號(hào)探針采用如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的量子點(diǎn)生物探 針。
10、 如權(quán)利要求9所述的微流控蛋白質(zhì)芯片，其特征在于所述的微流控 蛋白質(zhì)芯片為雙向微流控蛋白質(zhì)芯片，其中不同靶蛋白所對(duì)應(yīng)的作為信號(hào)探 針的生物探針帶有相同熒光光譜的量子點(diǎn)納米微球。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種量子點(diǎn)生物探針及其制備方法。該生物探針是由高分子聚合物包覆量子點(diǎn)形成的量子點(diǎn)納米微球和靶蛋白配體通過(guò)偶聯(lián)反應(yīng)連接而成的量子點(diǎn)-生物復(fù)合探針。本發(fā)明還提供采用上述量子點(diǎn)-生物復(fù)合探針作為信號(hào)探針(檢測(cè)探針)的微流控蛋白質(zhì)芯片。本發(fā)明采用量子點(diǎn)納米微球，它不僅較單純的量子點(diǎn)具有更高的量子效率，而且物化性質(zhì)更加穩(wěn)定，與生物分子的相容性更佳，非常適合在蛋白質(zhì)芯片中的應(yīng)用，大大提高了芯片的靈敏度。
文檔編號(hào)G01N33/566GK101368943SQ20071004488
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2007年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月15日
發(fā)明者耀 何, 宋世平, 樊春海, 汪聯(lián)輝, 娟 顏, 維 黃 申請(qǐng)人:蘇州市長(zhǎng)三角系統(tǒng)生物交叉科學(xué)研究院有限公司