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專利名稱：氨基酸診斷/測定試劑(盒)及氨基酸的濃度測定方法
技術領域：
本發明涉及一種氨基酸診斷/測定試劑(盒)，同時本發明還涉及測定氨基酸濃度
的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。
背景技術：
氨基酸含量的測定在醫學/食品/工業/農業/環境中都是比較重要的測定項目。 現有的測定方法有色譜法、電化學法、儀器分析法(氨基酸分析儀)、分光光度計等方法，這 些方法或是操作方法較為繁雜、特異性差、或儀器設備成本較高等缺點。 氨基酸不是單純的一種物質，用氨基酸分析儀可直接測定出17種氨基酸(儀器價 格昂貴，不能普遍使用)，對于醫學/食品/工業/農業/環境中來說，多數情況下，都是很 多種氨基酸同時存在，所以需要測定總的氨基酸含量，它們不能以氨基酸百分率來表示，只 能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。 大量食肉或饑餓時尿中氨基酸氮增加，孕婦及新生兒尿液氨基酸氮也增加。氨基 酸代謝異常，造成某些氨基酸在體內積累過多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎縮、肝功能 衰竭、Reye綜合征、或某些因素造成蛋白質分解加速的疾病，遺傳性疾病所導致的代謝異常 均可使尿中氨基酸氮增加。 酶法測定血、尿、體液、食品、土壤、工業產品中氨基酸氮含量具有特異性高、方法 簡便、成本低的特點。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)聯法(Couple Reaction)技術，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶) 在340nm波長處吸光度的變化，得以測定氨基酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實 現該方法的氨基酸診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或 半、全自動生化分析儀上進行氨基酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到 切實的推廣應用。 本發明氨基酸濃度測定方法如下 氨基酸+水+氧氨某酸氧化酶氧代酸+氨+過氧化氫
過氧化氫+尿酸黃嘌呤氧化酶黃嘌呤+水+氧
黃嘌呤+輔酶+水黃嘌呤脫氡酶尿酸+還原型輔酶 這種方法應用氨基酸氧化酶(amino-acid oxidase ;EC 1. 4. 3. 2 ;EC 1.4.3.3)酶(偶)聯黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase ;EC 1. 17. 3. 2)、黃嘌呤脫氫酶 (xanthinedehydrogenase ;EC 1.17.1.4)酶促反應比色終點法。氨基酸氧化酶酶解氨基 酸反應產生過氧化氫，再通過(偶)聯合黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶的作用，最終將輔酶 (在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還 原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算氨基酸的濃度大小。 實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單
劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明氨基酸診斷/測定試劑(盒)較為理想 緩沖液 100mmol/L 穩定劑 500mmol/L 輔酶 3mmol/L 氨基酸氧化酶10000U/L 黃嘌呤氧化酶 12000U/L 黃嘌呤脫氫酶 12000U/L 尿酸 12mmol/L 本發明的氨基酸診斷/測定試劑(盒)可以是單劑，包括 緩沖液、穩定劑、輔酶、氨基酸氧化酶、黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶、尿酸。 試劑(盒)可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，
直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑
試劑1 緩沖液、穩定齊U、輔酶、尿酸。
試劑2 緩沖液、穩定劑、氨基酸氧化酶、黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶。輔酶、氨基酸氧化 酶、黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶、尿酸在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑(盒) 可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑
試劑1 緩沖液、穩定齊U、輔酶、尿酸。
試劑2 緩沖液、穩定劑、黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶。
試劑3 緩沖液、穩定劑、氨基酸氧化酶。 輔酶、氨基酸氧化酶、黃嘌呤氧化酶、黃嘌呤脫氫酶、尿酸在試劑1、試劑2或試劑3 中的位置可以不限。試劑(盒)可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成 液體試劑，直接使用。 無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定氨基酸濃度的方法，其輔酶可以是NADP+、 NAD+或thio-NAD+中的一種。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。
實施例一 本實施例的氨基酸診斷/測定試劑為單試劑，包括
三(羧甲基)氨基甲烷_鹽酸緩沖液100mmol/L
穩定劑 500mmol/L
輔酶 3,1/L
氨基酸氧化酶 10000U/L
黃嘌呤氧化酶 12000U/L
黃嘌呤脫氫酶 12000U/L
尿酸 12mmol/L 試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈 水，復溶后使用。 在全自動生化分