国产自产21区,亚洲97,免费毛片网,国产啪视频,青青青国产在线观看,国产毛片一区二区三区精品

專利名稱：抗ku70內(nèi)化的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及物質(zhì)、組合物和方法，其用于醫(yī)藥中。特別地，本發(fā)明涉及包含能夠選擇性地與Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)在醫(yī)藥中的用途，特別是在癌癥治療和診斷中的用途。
背景技術(shù)：
與治療相關(guān)的是，腫瘤相關(guān)抗原應(yīng)該在癌細(xì)胞表面表達(dá)，而不在或以明顯較低的程度在非轉(zhuǎn)化性的細(xì)胞(non-transformed nature)上表達(dá)。細(xì)胞表面受體是基于抗體的癌癥治療的重要靶標(biāo)。與抗體結(jié)合后，與細(xì)胞膜結(jié)合的靶抗原可將信號(hào)傳遞到所述細(xì)胞中， 例如引發(fā)凋亡的信號(hào)(Shan et al. , 1998 ；Fransson et al.，2006)，或通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被內(nèi)化(Liu et al.，2004 ；Fransson et al.，2004)。與抗體結(jié)合后受體的內(nèi)化為多種治療性干涉提供了途徑，例如，抗體-藥偶聯(lián)物(Wu，2005)或抗體介導(dǎo)的基因治療(aiang et al.，2002)。Ku蛋白是被稱為Ku70和KuSO的兩個(gè)緊密結(jié)合的亞單位的異二聚體，通常位于細(xì)胞核內(nèi)，在此它參與負(fù)責(zé)修復(fù)DNA雙鏈斷裂(DSB)的非同源末端連接過程。Ku與受損DNA 結(jié)合并招募DNA依賴性蛋白質(zhì)激酶(DNA-H(C)的催化亞單位，最終導(dǎo)致DSB修復(fù)酶的結(jié)合 (Lieber et al.，2003)。因此，具有Ku缺失的轉(zhuǎn)基因小鼠在細(xì)胞增殖方面顯示明顯缺陷并且由于DSB修復(fù)中的缺陷對(duì)電離輻射具有超敏性(Lees-Miller and Meek, 2003) 有研究證明Ku在腫瘤細(xì)胞系的表面表達(dá)，這就需要對(duì)Ku蛋白僅在細(xì)胞核中定位的結(jié)論進(jìn)行重新評(píng)價(jià)。由于Ku在轉(zhuǎn)化細(xì)胞質(zhì)膜中的表達(dá)(Prabhakar et al.，1990)似乎參與結(jié)合、轉(zhuǎn)移和侵襲(綜述參見Muller et al.，2005)，并且最近顯示所述侵襲活性由Ku 和金屬蛋白酶9之間的特異性相互作用介導(dǎo)(Monferran et al.，2004)，因此顯示Ku蛋白具有多能性。此外，在胞液中，Ku70與促凋亡蛋白Bax相互作用并阻止其向線粒體遷移，這提示Ku70抑制Bax介導(dǎo)的凋亡(Sawada, M. et al.，2003)。因此，Ku似乎參與腫瘤發(fā)展的兩個(gè)重要特征促生存和促侵襲過程(Hanahan和Wieinberg，2000)，并且已經(jīng)在多種人細(xì)胞系上報(bào)道，但是目前僅在原發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤上報(bào)道(Muller et al. ,2005 ；Tai et al., 2002)。在人非轉(zhuǎn)化細(xì)胞上，僅檢測(cè)到Ku70在人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞上和單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞上表達(dá)(Ginis et al.，1995 ；Monferran et al. ,2004)。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)Ku蛋白在與細(xì)胞外物質(zhì)(例如抗體)結(jié)合后即被內(nèi)化。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)受體介導(dǎo)的Ku蛋白內(nèi)吞作用是快速的(t1/2為12分鐘)且廣泛的(100分鐘后90%的受體集中到細(xì)胞中)，并且可以作為細(xì)胞毒性荷載物(payload)進(jìn)入各種來源的腫瘤細(xì)胞的入口。這個(gè)驚人的發(fā)現(xiàn)提示Ku蛋白的內(nèi)化特性可以用作向腫瘤細(xì)胞遞送細(xì)胞毒性物質(zhì)的入口并用于選擇性給藥和癌癥治療中。

發(fā)明內(nèi)容
因此，在第一方面，本發(fā)明提供了包含能夠選擇性地與Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)，其可用于醫(yī)藥中。所述“物質(zhì)”包括任何純化的或分離出的天然實(shí)體或化學(xué)合成實(shí)體，該實(shí)體包含一個(gè)或多個(gè)分子。優(yōu)選地，所述物質(zhì)包括一種或多種多核苷酸和/或一種或多種多肽和/或一種或多種化學(xué)小分子，其中所述多核苷酸和/或多肽和/或化學(xué)小分子可以或不可以通過離子和/或共價(jià)引入化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行修飾。所述“結(jié)合部分”包括本發(fā)明的物質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域，其能夠可逆地和/或不可逆地通過共價(jià)鍵和/或離子間相互作用與另外一個(gè)或多個(gè)分子的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域結(jié)合。所述“選擇性結(jié)合”包括本發(fā)明物質(zhì)與本文所定義的Ku蛋白的結(jié)合比與其它多肽的結(jié)合至少?gòu)?qiáng)10倍的能力，優(yōu)選至少?gòu)?qiáng)50倍且更優(yōu)選至少?gòu)?qiáng)100倍。優(yōu)選地，所述物質(zhì)在生理?xiàng)l件下，例如在體內(nèi)結(jié)合Ku蛋白。在人細(xì)胞中，Ku蛋白是包含分別被稱為Ku70和Ku80的70kDa和80kDa亞基的異二聚體，并且負(fù)責(zé)修復(fù)DNA雙鏈斷裂(DSB)。所述“Ku蛋白”包括任何天然或合成的蛋白， 其包含人Ku蛋白單體的和/或人Ku蛋白單體的同源物和/或直系同源物和/或與本文所定義的人Ku蛋白具有相同結(jié)構(gòu)和/或相同功能的蛋白質(zhì)和/或其天然變體。優(yōu)選地，所述Ku蛋白為人類蛋白質(zhì)，但也可以來自任何哺乳動(dòng)物，例如馴養(yǎng)的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選具有農(nóng)業(yè)或商業(yè)價(jià)值的哺乳動(dòng)物，包括馬、豬、牛、綿羊、狗和貓)。所述“哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)”包括從哺乳動(dòng)物的一種或多種細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的、衍生的和/或分離的任何蛋白； 例如，術(shù)語“人類蛋白質(zhì)”包括從人的一種或多種細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的、衍生的和/或分離的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的物質(zhì)中Ku蛋白包含Ku-70單體和/或Ku-80單體。更優(yōu)選地，所述Ku蛋白為異二聚體，便利地為Ku-70/80異二聚體。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的物質(zhì)中所述Ku70蛋白包含SEQ ID NO 1的多肽序列和/或由SEQ ID NO :3的多核苷酸序列所編碼，和/或所述Ku80蛋白包含SEQ ID NO :2的多肽序列和/或由SEQ ID NO 4的多核苷酸序列所編碼。所述“天然變體”包括例如等位基因變體。通常地，這些變體可根據(jù)給定序列改變一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)并通常不超過10或20個(gè)氨基酸殘基。通常，所述變體具有保守性取代。本文所定義的多肽變體包括包含以下序列的多肽，其中所述序列與選自以下組的氨基酸序列具有至少60%的同一性，所述組包含SEQ ID NO =USEQID NO :2、SEQ ID NO :5、 SEQ ID NO 6, SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :8、SEQID N0:9、SEQ ID NO :10 禾口 SEQ ID NO: 11， 優(yōu)選與上述序列具有至少70 %或80 %或85 %或90 %的同一性，并且更優(yōu)選具有至少95 %、 96%、97%、98%或 99% 的同一性。例如，可以利用全局比對(duì)選項(xiàng)(global alignment option)、打分矩陣 BL0SUM62 (scoring matrix BL0SUM62)、空位開放罰分-14 (opening gap penalty-14)、 空位延伸罰分-4作為參數(shù)，通過位于Expasy工具庫網(wǎng)頁(http: // www, cb. embnet. orR/software/LALIGN form, html)的 LALIGN 程序(Huang and Miller, Adv. App 1. Math. (1991) 12 :337-357)確定同一性百分比。也可以利用合適的計(jì)算機(jī)程序，例如University of Wisconsin Genetic Computing Group的GAP程序確定兩個(gè)多肽之間序列同一性的百分比，并且同一性百分比最好是對(duì)由序列經(jīng)最佳比對(duì)的多肽進(jìn)行計(jì)算。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的物質(zhì)中所述Ku蛋白定位于細(xì)胞表面，更優(yōu)選地，所述Ku蛋白定位于癌細(xì)胞表面。所述“定位于細(xì)胞表面”包括這樣的含義Ku蛋白與細(xì)胞結(jié)合，這樣Ku蛋白的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域呈現(xiàn)在細(xì)胞外表面。例如，Ku蛋白可以被插入到細(xì)胞質(zhì)膜中(即為跨膜蛋白) 并且具有一個(gè)或多個(gè)呈現(xiàn)在細(xì)胞外表面的區(qū)域。或者，整個(gè)Ku蛋白可以位于細(xì)胞外部，并且通過共價(jià)和/或離子間相互作用將其定位于細(xì)胞表面的一個(gè)或多個(gè)特定區(qū)域。因此，所述“癌細(xì)胞表面”包括這樣的含義以某種方式定位Ku蛋白使其與衍生自或具有癌細(xì)胞或腫瘤特征的一種或多種細(xì)胞相連。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了一種物質(zhì)(或一種試劑)，其能誘導(dǎo)和/或提高Ku蛋白和/ 或包含所述物質(zhì)和Ku蛋白的復(fù)合體的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化。所述“細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化”包括與分子從細(xì)胞的細(xì)胞外表面遷移至細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)表面的過程相關(guān)的分子、生化和細(xì)胞事件。負(fù)責(zé)分子細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化的過程是分子和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，并且可以參與細(xì)胞外分子(例如，激素、抗體和有機(jī)小分子)、膜結(jié)合分子(例如，細(xì)胞表面受體)以及膜結(jié)合分子和細(xì)胞外分子結(jié)合形成的復(fù)合體(例如，配體和跨膜受體結(jié)合或膜結(jié)合分子和抗體結(jié)合)的內(nèi)化。因此，所述“誘導(dǎo)和/或提高細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化”包括引發(fā)細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化和/或提高細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化的速率和/或程度的事件。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了還包括細(xì)胞毒性部分的物質(zhì)，更優(yōu)選地，所述細(xì)胞毒性部分為直接細(xì)胞毒性和/或間接細(xì)胞毒性。所述“直接細(xì)胞毒性”包括這樣的含義所述部分本身具細(xì)胞毒性。所述“間接細(xì)胞毒性”包括這樣的含義所述部分雖然本身不具細(xì)胞毒性但可以誘導(dǎo)細(xì)胞毒性，例如，通過作用于另一個(gè)分子或通過進(jìn)一步作用于自身誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。便利地，所述細(xì)胞毒性部分位于細(xì)胞內(nèi)時(shí)是細(xì)胞毒性的，并且優(yōu)選位于細(xì)胞外時(shí)不是細(xì)胞毒性的。優(yōu)選地，本發(fā)明提供了這樣的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分是直接細(xì)胞毒性的化療物質(zhì)。任選地，所述細(xì)胞毒性部分為直接細(xì)胞毒性的多肽。細(xì)胞毒性化療物質(zhì)是本領(lǐng)域熟知的。細(xì)胞毒性化療物質(zhì)(例如抗癌物質(zhì))包括烷基化物質(zhì)，包括氮芥，例如二氯甲基二乙胺(HN2)、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美發(fā)侖(左旋溶肉瘤素)和苯丁酸氮芥；乙撐亞胺和甲基三聚氰胺，例如六甲基三聚氰胺、三胺硫磷；烷基磺酸酯，例如白消安；亞硝基脲，例如卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)和鏈脲霉素(鏈脲佐霉素)； 和三氮烯例如，氮烯咪胺(DTIC，二甲基三氮烯咪唑酰胺)；抗代謝物，包括葉酸類似物，例如氨甲葉酸(氨甲蝶呤)；嘧啶類似物如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶，5-FU)、氟尿苷(氟代脫氧尿苷，F(xiàn)UdR)和阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷)；和嘌呤類似物及相關(guān)抑制劑，例如巰基嘌呤(6-巰基嘌呤，6-MP)、硫鳥嘌呤(6-硫鳥嘌呤，TG)和噴司他丁(2’ -脫氧助間型霉素)。 天然產(chǎn)物包括長(zhǎng)春花生物堿，例如長(zhǎng)春堿(VLB)和長(zhǎng)春新堿；表鬼白毒素，例如依托泊甙和替尼泊甙；抗生素，例如更生霉素(放射菌素D)、道諾紅霉素(柔毛霉素、紅比霉素)、多柔比星、博來霉素、普卡霉素(光神霉素)和絲裂霉素(絲裂霉素C)；酶，例如左旋天冬酰胺酶；和生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，例如干擾素alphenome (interferon alphenomes)。此外還包括鉬配位復(fù)合物，例如順鉬(cis-DDP)和卡鉬；蒽二酮，例如米托蒽醌和蒽環(huán)類；取代脲，例如羥基脲；甲基胼衍生物，例如甲基芐胼(N-甲基胼，MIH)；和腎上腺皮質(zhì)抑制劑，例如米托坦(O， P’ -DDD)和氨苯乙哌啶酮；紫杉醇及類似物/衍生物；和激素激動(dòng)劑/拮抗劑，例如氟他胺和他莫昔芬。之前已經(jīng)將多種這些抗癌藥結(jié)合在抗體和其它靶位點(diǎn)遞送劑上，因此本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地制備包含這些藥物的本發(fā)明物質(zhì)。例如，可以使用碳二亞胺結(jié)合 (Bauminger & Wilchek(1980)Methods Enzymol. 70，151-159 ；通過引用并入本文)以使包括多柔比星在內(nèi)的多種藥物與抗體或肽結(jié)合。碳二亞胺包括具有通式R1-N = C = N-R2的一組化合物，其中R1和&可以為脂肪族或芳香族，其用于肽鍵的合成。制備工藝簡(jiǎn)單、快速且在溫和條件下進(jìn)行。碳二亞胺化合物攻擊羧基基團(tuán)以將其變成游離氨基的反應(yīng)位點(diǎn)。水溶性碳二亞胺，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)對(duì)將功能部分與結(jié)合部分相結(jié)合特別有用，并可以使多柔比星與腫瘤歸巢肽(tumour homing peptide) 結(jié)合。多柔比星與結(jié)合部分的結(jié)合需要存在由多柔比星提供的氨基基團(tuán)和由結(jié)合部分如抗體或肽提供的羧基基團(tuán)。除了使用碳二亞胺直接形成肽鍵外，還可以使用EDC制備活性酯，例如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯。隨后，可將僅與氨基基團(tuán)結(jié)合的NHS酯用于誘導(dǎo)與多柔比星的單氨基基團(tuán)形成酰氨鍵。EDC和NHS的組合應(yīng)用通常用于結(jié)合反應(yīng)以提高偶聯(lián)物(或結(jié)合物)形成的產(chǎn)量(Bauminger & Wilchek，如上文，1980)。還可以使用細(xì)胞毒性部分與結(jié)合部分結(jié)合的其它方法。例如，可以使用高碘酸鈉的氧化，隨后還原性烷化適當(dāng)反應(yīng)物，也可以使用戊二醛交聯(lián)。然而，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，不論選擇了哪種方法產(chǎn)生本發(fā)明偶聯(lián)物，都必須確定結(jié)合部分保持其靶向能力以及功能部分保持其相關(guān)功能。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性部分為細(xì)胞毒性肽或多肽部分，其包括導(dǎo)致細(xì)胞死亡的任何部分。細(xì)胞毒性肽和多肽部分是本領(lǐng)域熟知的并且包括，例如蓖麻蛋白、相思豆毒素、假單胞菌外毒素、組織因子等。使所述細(xì)胞毒性肽和多肽部分與靶向部分(例如抗體)連接的方法也是本領(lǐng)域已知的。在Burrows & Thorpe (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90，8996-9000中闡述了將蓖麻蛋白用作細(xì)胞毒性物質(zhì)，其通過引用并入本文；Ran et al (1998) Cancer Res. 58，4646—4653 禾口 Huang et al (1997) Science 275，M7-550闡述了使用導(dǎo)致腫瘤的定位血凝和梗塞的組織因子。1Tsai et al(1995)Dis. Colon Rectum 38，1067-1074闡述了與單克隆抗體結(jié)合的相思豆毒素A，其通過引用并入本文。在WO 96/06641將其它核糖體失活蛋白描述為細(xì)胞毒性物質(zhì)。假單胞菌外毒素可以用作細(xì)胞毒性多肽部分(參見,例如Aiello et al (1995)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92， 10457-10461 ；其通過引用并入本文)。特定細(xì)胞因子如TNFa和IL_2也可以用作細(xì)胞毒性物質(zhì)。特定放射性原子如果以足夠的劑量遞送也可以是細(xì)胞毒性的。因此，細(xì)胞毒性部分可以包含放射性原子，所述放射性原子在使用中向靶位點(diǎn)遞送足量的放射以產(chǎn)生細(xì)胞毒性。合適的放射性原子包括磷-32、碘-125、碘-131、銦-111、錸-186、錸-188、釔-90，或者任何其它發(fā)出足夠能量以破壞相鄰細(xì)胞、細(xì)胞器或核酸的同位素。優(yōu)選地，本發(fā)明物質(zhì)中所述同位素和放射性原子的密度可以將大于4000cGy (優(yōu)選至少6000、8000或IOOOOcGy)的劑量遞送至靶位點(diǎn)，并且優(yōu)選遞送至位于靶位點(diǎn)的細(xì)胞和其細(xì)胞器，特別是細(xì)胞核。放射性原子可以以已知的方式結(jié)合在結(jié)合部分上。例如，可以將EDTA或另一個(gè)螯合劑結(jié)合在結(jié)合部分上并用于結(jié)合111L或9°Y。可以用125I或131I直接標(biāo)記酪氨酸殘基。細(xì)胞毒性部分可以是合適的間接細(xì)胞毒性的多肽。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述間接細(xì)胞毒性的多肽為具有酶活性的多肽，并能夠?qū)o毒和/或相對(duì)無毒的前藥轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒藥物。當(dāng)結(jié)合部分為抗體時(shí)，這個(gè)類型的系統(tǒng)通常稱為ADEPT(抗體引導(dǎo)的酶前藥治療)。該系統(tǒng)需要結(jié)合部分將酶部分定位于患者體內(nèi)的期望位點(diǎn)并且允許所述酶經(jīng)過一定時(shí)間定位于所述位點(diǎn)后施用作為所述酶底物的前藥，催化作用的最終產(chǎn)物為細(xì)胞毒化合物。該方法的目的是使期望位點(diǎn)的藥濃度最大并使正常組織中的藥濃度最小(參見 Senter, P.D.et al (1988) "Anti-tumour effects of antibody-alkaline phosphatase conjugates in combination with etoposide phosphate"Proc. Natl.Acad. Sci. USA85, 4842-4846 ；Bagshawe(1987)Br. J. Cancer 56，531-2;禾口 Bagshawe，K. D. et al (1988) "A cytotoxic agent can be generated selectively at cancer sites"Br.J.Cancer. 58, 700-703)。顯然，對(duì)Ku蛋白具有特異性的任何結(jié)合部分都可以用于替代這種類型的抗體引導(dǎo)的酶前藥治療系統(tǒng)中的抗體。例如，可使用具有高度穩(wěn)定性但允許在某些位置引入變異的支架結(jié)構(gòu)(scaffold structures)建立分子文庫，可從該分子文庫中衍生結(jié)合部分。這些分子中經(jīng)最優(yōu)表征的是能夠耐受變異的纖粘蛋白域和58個(gè)氨基酸的大蛋白A域(Nygren and Uhlen， Scaffolds for engineering novel binding sites in proteins.Curr Opin Struct Biol. 1997Aug;7(4) :463-9)。可以使用的另一個(gè)支架結(jié)構(gòu)是基于纖粘蛋白支架的結(jié)構(gòu)，其已經(jīng)用于產(chǎn)生針對(duì)多種靶分子的高親和特異性結(jié)合劑(Weng et al. Proteomics, 2001,2 48-57)。還存在允許一定程度改變的其它分子折疊物。此類實(shí)例包括I型和II型主要組織相容性復(fù)合體(MHC)分子，以及已經(jīng)被鑒定為具有類似的基本結(jié)構(gòu)且同時(shí)在基因家族成員內(nèi)/間具有寬泛的序列變異的最近一類命名為“防御素”的新型分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了其中的細(xì)胞毒性部分能夠?qū)o細(xì)胞毒性的前藥轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒藥物的物質(zhì)。利用本文所述靶向酶的系統(tǒng)中的酶和前藥可以是上文提出的任何酶和前藥。細(xì)胞毒性底物可以為現(xiàn)有的任何抗癌藥，例如烷基化試劑，插入DNA中的物質(zhì)，抑制任何關(guān)鍵酶(例如，二氫葉酸還原酶、胸苷合成酶、核糖核苷酸還原酶、核苷激酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶)的物質(zhì)，或通過與任何其它細(xì)胞成分相互作用導(dǎo)致細(xì)胞死亡的物質(zhì)。依托泊甙是拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的一個(gè)實(shí)例。所報(bào)道的前藥系統(tǒng)包括由大腸桿菌β -葡糖醛酸酶激活的苯酚芥前藥(Wang et al，1992和Roffler et al，1991)，由人β -葡糖醛酸酶激活的柔比多星前藥(Bosslet et al，1994)，由咖啡豆α-半乳糖苷酶激活的另一種柔比多星前藥(Azoulay et al,1995), 由α-D-半乳糖苷酶激活的道諾霉素前藥(Gesson et al，1994)，由大腸桿菌β-D-半乳糖苷酶激活的5-氟尿苷前藥(Abraham et al，1994)，和由羧肽酶A激活的氨甲蝶呤前藥 (例如，氨甲蝶呤-丙氨酸)(Kuefner et al, 1990, Vitols et al，1992 和 Vitols et al, 1995)。這些前藥及其它前藥包括在下表A中。表 A
權(quán)利要求
1.包含能選擇性與Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)，其用于醫(yī)藥中。
2.如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白定位于細(xì)胞表面。
3.如權(quán)利要求1或2所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白定位于癌細(xì)胞表面。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述物質(zhì)能夠誘導(dǎo)和/或提高所述Ku 蛋白和/或包含所述物質(zhì)和Ku蛋白的復(fù)合體的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白為哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白為人類蛋白質(zhì)。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白包含Ku-70單體和/或 Ku-80單體。
8.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白為異二聚體。
9.如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku蛋白為Ku-70/80異二聚體。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述Ku70蛋白包含SEQID NO 1的多肽序列和/或由SEQ ID NO :3的多核苷酸序列所編碼，和/或所述KuSO蛋白包含SEQ ID NO 2的多肽序列和/或由SEQ ID NO 4的多核苷酸序列所編碼。
11.如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其還包含細(xì)胞毒性部分。
12.如權(quán)利要求11所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為直接細(xì)胞毒性和/或間接細(xì)胞毒性。
13.如權(quán)利要求11或12所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分在細(xì)胞內(nèi)時(shí)是細(xì)胞毒性的。
14.如權(quán)利要求13所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分在細(xì)胞外時(shí)不是細(xì)胞毒性的。
15.如權(quán)利要求11至14中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分是直接細(xì)胞毒性的化療物質(zhì)。
16.如權(quán)利要求11至15中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分是直接細(xì)胞毒性的多肽。
17.如權(quán)利要求11至16中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分能夠?qū)o細(xì)胞毒性的前藥轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性藥物。
18.如權(quán)利要求11至17中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為放射增敏劑。
19.如權(quán)利要求11至18中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為能夠?qū)o細(xì)胞毒性的前藥轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性藥物的核酸分子。
20.如權(quán)利要求11或12所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為直接細(xì)胞毒性的核酸分子。
21.如權(quán)利要求11或12所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為編碼直接細(xì)胞毒性多肽和/或間接細(xì)胞毒性多肽的核酸分子。
22.如權(quán)利要求11或12所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分為編碼治療性多肽的核酸分子。
23.如權(quán)利要求11或12所述的物質(zhì)，其中所述細(xì)胞毒性部分包含放射性原子。
24.如權(quán)利要求23所述的物質(zhì)，其中所述放射性原子選自于包含磷-32、碘-125、 碘-131、銦-111、錸-186、錸-188、釔-90 的組。
25.如權(quán)利要求1至M中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其還包含易檢測(cè)部分。
26.如權(quán)利要求25所述的物質(zhì)，其中所述易檢測(cè)部分包含放射性原子。
27.如權(quán)利要求沈所述的物質(zhì)，其中所述放射性原子為锝_99m或碘-123。
28.如權(quán)利要求25所述的物質(zhì)，其中所述易檢測(cè)部分選自包含碘-123、碘-131、 銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳、鐵的組。
29.如權(quán)利要求1至28中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其還包含能夠選擇性地與直接細(xì)胞毒性部分或間接細(xì)胞毒性部分結(jié)合的部分。
30.如權(quán)利要求1至觀中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其還包含能夠選擇性地與易檢測(cè)部分結(jié)合的部分。
31.如權(quán)利要求1至觀中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述結(jié)合部分和所述細(xì)胞毒性部分為彼此融合的多肽。
32.如權(quán)利要求1至31中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)，其中所述結(jié)合部分包含肽和/或多肽。
33.如權(quán)利要求32所述的物質(zhì)，其中所述結(jié)合部分包含選自下組的多肽序列，所述組包含 SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO :11ο
34.如權(quán)利要求32或33所述的物質(zhì)，其中所述結(jié)合部分包含抗體或其片段。
35.如權(quán)利要求34所述的物質(zhì)，其中所述抗體或其片段為scFv或Fab。
36.如權(quán)利要求35所述的物質(zhì)，其中所述scFv或Fab包含SEQID NO :11的多肽序列。
37.權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所定義的物質(zhì)在制備癌癥治療藥物中的應(yīng)用。
38.如權(quán)利要求37所述的應(yīng)用，其中所述癌癥為實(shí)體瘤。
39.如權(quán)利要求38所述的應(yīng)用，其中所述癌癥為癌。
40.如權(quán)利要求38或39所述的應(yīng)用，其中所述癌癥選自包含前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、宮頸上皮癌、多發(fā)性骨髓瘤、急性單核細(xì)胞白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、惡性膠質(zhì)瘤的組。
41.包含能選擇性地與Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)，其如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所定義。
42.藥物組合物，包含治療有效量的如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41所定義的物質(zhì)以及藥學(xué)上可接受的載體。
43.權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)在制備組合物中的應(yīng)用， 所述組合物用于鑒定潛在地易受治療影響的癌細(xì)胞，所述治療使用如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)和/或如權(quán)利要求37至40中任一項(xiàng)所定義的藥物和 /或權(quán)利要求42中所定義的藥物組合物。
44.治療個(gè)體癌癥的方法，包括向所述個(gè)體施用有效量的如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)和/或如權(quán)利要求37至40中任一項(xiàng)中所定義的藥物和/ 或如權(quán)利要求42中所定義的藥物組合物的步驟。
45.鑒定具有潛在地易受治療影響的癌細(xì)胞的個(gè)體的方法，所述治療使用如權(quán)利要求 1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)和/或如權(quán)利要求37至40中任一項(xiàng)所定義的藥物和/或如權(quán)利要求42中所定義的藥物組合物，所述方法包括以下步驟a)提供所述待檢測(cè)個(gè)體的包含一種或多種癌細(xì)胞的樣本；b)合并所述樣本以及如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)和/或如權(quán)利要求37至40中任一項(xiàng)所定義的藥物和/或權(quán)利要求42中所定義的藥物組合物；c)測(cè)定所述物質(zhì)和/或藥物和/或藥物組合物與定位于所述一種或多種癌細(xì)胞表面的 Ku蛋白的結(jié)合和隨后所述Ku蛋白的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化；d)鑒定具有潛在地易受治療影響的癌細(xì)胞的個(gè)體，所述治療使用所述物質(zhì)和/或藥物和/或藥物組合物誘導(dǎo)和/或促進(jìn)定位于所述一種或多種癌細(xì)胞表面的Ku蛋白的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化。
46.鑒定能選擇性地與定位于細(xì)胞表面的Ku蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)和/或提高所述Ku蛋白的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化的物質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟a)提供包含定位于一種或多種細(xì)胞表面的Ku蛋白的樣本；b)合并所述樣本和待檢測(cè)物質(zhì)；c)測(cè)定所述物質(zhì)是否與定位于所述一種或多種細(xì)胞表面的Ku蛋白結(jié)合，以及Ku蛋白隨后是否被內(nèi)化；d)通過所述物質(zhì)能夠選擇性地與定位于細(xì)胞表面的Ku蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)和/或提高所述Ku蛋白的細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化而鑒定所述物質(zhì)。
47.如權(quán)利要求44所述的方法，其還包括e)合成并/或分離步驟(d)中所鑒定的物質(zhì)。
48.如權(quán)利要求46或47所述的方法，其還包括將步驟(d)中鑒定的和/或步驟(e)中合成和/或分離的所述物質(zhì)配制成藥物組合物的步驟。
49.編碼如權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)或其結(jié)合部分的核酸分子。
50.包含如權(quán)利要求49所述的核酸分子的表達(dá)載體。
51.包含如權(quán)利要求49所述的核酸分子的重組宿主細(xì)胞。
52.如權(quán)利要求51的重組宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌細(xì)胞。
53.如權(quán)利要求52的重組宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
54.權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)或權(quán)利要求41中所定義的物質(zhì)或其結(jié)合部分的制備方法，其包括表達(dá)如權(quán)利要求49所述的核酸分子或如權(quán)利要求50所述的表達(dá)載體或培養(yǎng)如權(quán)利要求51至53中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞。
55.試劑盒，其包括如權(quán)利要求17所述的物質(zhì)和相對(duì)無毒的前藥。
56.基本上如本文所述的包含能夠選擇性地與所述Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)。
57.基本如本文所述的物質(zhì)在制備癌癥治療藥物中的應(yīng)用。
58.基本如本文所述的藥物組合物。
59.基本如本文所述的治療個(gè)體癌癥的方法。
60.鑒定具有潛在地易受治療影響的癌細(xì)胞的個(gè)體的方法，所述治療使用基本如本文所述的物質(zhì)和/或藥物和/或藥物組合物。
61.鑒定能夠選擇性地與定位于細(xì)胞表面的Ku蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)和/或提高Ku蛋白細(xì)胞內(nèi)內(nèi)化的物質(zhì)的方法，其基本如本文所定義。
62.編碼本文所定義的物質(zhì)或其結(jié)合部分的核酸分子，其基本如本文所定義。
63.包含核酸分子的表達(dá)載體，其基本如本文所定義。
64.包含核酸分子的重組宿主細(xì)胞，其基本如本文所定義。
65.基本如本文所定義的物質(zhì)的制備方法。
66.基本如本文所定義的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明涉及物質(zhì)、組合物和方法在醫(yī)藥中的用途。特別地，本發(fā)明涉及包含能夠選擇性地與Ku蛋白結(jié)合的結(jié)合部分的物質(zhì)在醫(yī)藥中的用途，特別是在癌癥治療和診斷中的用途。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102406944SQ20111022209
公開日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2007年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月12日
發(fā)明者卡爾·博雷貝克, 約翰·弗蘭松 申請(qǐng)人:生物發(fā)明國(guó)際公司