專利名稱：一種鑒別華南忍冬和金銀花的方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明公開了一種鑒別華南忍冬和金銀花的方法及其應用，屬于藥物分析 領域。
背景技術：
華南忍冬在2005年版《中華人民共和國藥典》之前的各版中作為金銀花 中的一個來源收載，2005年版《中華人民共和國藥典》( 一部)將二者區分開， 但兩者來源科屬相同、品種相似，性味、鑒別、功能與主治、用法與用量相同， 含量測定項均為高效液相色譜法測定綠原酸含量，方法及限度相同，區別在于 金銀花增加了木犀草苷含量測定項，但文獻報道華南忍冬亦含有木犀草香。根 據文獻報道，標準分列的主要原因是"中藥材內含成分差別較大的多來源品種, 按一物一名的原則逐步分列"，表示其化學成分或有效成分的含量不同。
中藥復方制劑中的投料藥材為華南忍冬還是金銀花， 一直無法區分。國家 食品藥品監督管理局規定投料藥材必須固定品種，從而保證制劑質量的穩定、 均 一 ，因此區分華南忍冬和金銀花是急需解決的技術問題。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服已有技術的困難，目的在于提供一種高 效、可靠的鑒別華南忍冬和金銀花的方法。
本發明的另一目的是提供上述方法的應用。 本發明通過以下技術方案實現上述目的
一種鑒別華南忍冬和金銀花的方法，是利用薄層色鐠法對華南忍冬和金銀 花進行區分；所述薄層色譜法的色語條件為對照品溶液綠原酸和咖啡酸混合 的曱醇溶液，各組分濃度均為lmg/ml，供試品溶液為藥材的甲醇溶液；薄層 板為以羧曱基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H板或G板；點樣量0.1 20^1;展開 劑為乙酸丁酯-曱酸-水(7:2.5:1-3)的上層溶液或氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5); 紫外光燈365nm下檢視。
檢視的結果為供試品色語中，在與對照品色譜相應的位置上，顯示相同
3顏色的熒光斑點。華南忍冬供試品薄層色譜中，可以看到一系列的特征斑點， 通過與綠原酸，咖啡酸對照品對照，兩個展開系統對比，能夠清晰看到華南忍 冬具有的3個特征斑點區別于金銀花的藍色熒光斑點，因此可以區分金銀花與 華南忍冬。
更進一 步的，結合高效液相色譜對華南忍冬和金銀花進行區分 高效液相色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-磷酸
溶液(12:88)為流動相；檢測波長為310 ~ 340nm;理論塔板數按咖啡酸峰計
算不低于1000。
對照品溶液的制備精密稱取綠原酸和咖啡酸對照品適量，置棕色并瓦中， 加50%曱醇溶液制成每lml含綠原酸40pg、咖啡酸8嗎的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末(過四號篩)0.1 10g ，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，精密加入50。/。曱醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻 率35kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%曱醇補足減失的重量，搖勻， 濾過，精密量取續濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%曱醇至刻度，搖勻， 即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5 lOy,注入色譜儀， 測定，即得。本品按干燥品計算，10批華南忍冬和金銀花中的綠原酸((:16111809) 含量2.4~3.9%,兩種藥材的含量相當；華南忍冬的咖啡酸(C9H804)含量范 圍大約在0.1% ~ 0.23%，而金銀花中咖啡酸含量大約0.02% ~ 0.03%，華南忍 冬的咖啡酸含量是金銀花的IO倍左右。
本發明還提供上述筌別方法的應用，是應用于鑒別含有華南忍冬或金銀花 的藥物制劑。
與現有技術相比，本發明具有以下有益效果
本發明的鑒別方法可用于金銀花或華南忍冬藥材真偽及品質優劣的評價， 可用于區分金銀花藥材與華南忍冬藥材，還可用于制劑中投料藥材的品質評 價，保證其質量的穩定、均一，可控。本發明的方法具有操作簡便、重現性好、 直觀性強等優點。
圖1和圖2是本發明的華南忍冬與金銀花薄層色譜定性圖鐠，置紫外光燈 365nm下檢視，點樣順序1 ~ 2.金銀花供試品溶液(依次為對照藥材121060-200504,市售品)，3.綠原酸對照品，4.咖啡酸對照品，5~14.10批華 南忍冬供試品溶液。圖1展開劑為乙酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:1)的上層溶液， 圖2展開劑為氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5)。圖中A、 B、 C、 D為特征斑點，其中 A為綠原酸、B為咖啡酸，兩個展開系統對比，能夠清晰看到藍色熒光斑點B、 C、 D為可以區分金銀花與華南忍冬的3個特征藍色熒光斑點。
圖3、圖4、圖5是本發明的高效液相色譜定量圖譜，分別為綠原酸、咖 啡酸混合對照品、華南忍冬藥材及金銀花對照藥材液相色譜圖；圖中33均為 綠原酸，34均為咖啡酸。
具體實施例方式
以下通過具體的實施例進一步說明本發明的技術方案。 實施例1
1儀器與試藥
1.1 儀器戴安Dionex公司高效液相色譜儀(ASI-100自動進樣器、 ATH-585柱溫箱、P680四元梯度泵、PDA-100 4全測器)；
色語柱Dikma PLATISIL ODS C18,250mm x4.6mm,5|jm;
預制硅膠H薄板、G薄板(玻璃片基20x20cm浙江省臺州市路橋四曱生 化塑料廠)；
CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER薄層自動點樣儀、CAM AG TLC REPROSTAR薄層自動成像系統、CAMAG雙槽展開缸(瑞士 CAMAG公司)；
1.2試藥10批華南忍冬藥材及口炎清顆粒、金銀花對照藥材，均由廣 州白云山和記黃埔中藥有限公司提供。實驗中液相色譜所用試劑乙腈均為色譜
純，其余所用試劑均為分析純，水為超純水。 2方法與結果
2.1 口炎清顆粒中華南忍冬的薄層鑒別取本品10袋，研細，取約10g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處 理(功率360W,頻率35kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用曱醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml,減壓回收溶劑至干，殘渣加水 約5ml溶解，定量轉移至固相萃取小柱(填料C18,規格6ml,500mg),加 水15ml分次淋洗，'淋洗液棄去，再用曱醇15ml分次洗脫，收集洗脫液，減壓 回收溶劑至干，殘渣定量加入曱醇2ml，使完全溶解，用0.45pm微孔濾膜濾
5過，作為成品供試品溶液。另取華南忍冬或金銀花藥材粉末0.2g,加曱醇提取， 濾過，濾液作為藥材供試品溶液。再取綠原酸、咖啡酸對照品，加曱醇制成每 lml各含lmg的溶液，作為混合對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和 國藥典》2005年一部附錄VIB)試驗，吸取成品供試品溶液、上述對照品溶液、 藥材供試品溶液及成品供試品溶液各lOpl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為 黏合劑的硅膠H薄層板上，分別以乙酸丁酯-曱酸-水(7:2.5:1 3)的上層溶液 或氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5)為展開劑，展開約15厘米，取出，晾干，置紫外 光燈(365nm)下檢視。以展開劑前者所得圖像見圖1，以展開劑后者所得圖 像見圖2。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點。
2.2 高效液相色譜分析
供試品溶液的制備取藥材粉末(過四號篩)0.5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻汆 35kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%曱醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，精密量取續濾液2ml，置10ml棕色量瓶中，力口50%曱醇至刻度，搖勻，即得。
對照品溶液的配制精密稱取綠原酸和咖啡酸對照品適量，置棕色瓶中， 加50%曱醇溶液制成每lml含綠原酸40)Lig、咖啡酸8叫的溶液，即得。
色譜條件色錯柱為Dikma PLATISIL ODS C18 ，250mm x4.6mm，5|im;流 動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(p形2.50) ( 12:88)為流動相，流速1.0ml/min,檢 測波長為327nm。
測定法精密吸取對照品及供試品溶液10^1,進樣，依法測定綠原酸和 咖啡酸的含量。
綠原酸和咖啡酸混合對照品色i普圖見圖3,華南忍冬藥材液相色語圖見圖 4，金銀花對照藥材液相色譜圖見圖5。
IO批華南忍冬中綠原酸均達到藥典規定的要求> 1.5%;咖啡酸最高含量 為0.23%，最低含量為0.10%。通過對比分析，華南忍冬和金銀花的綠原酸含 量2.4~3.9%左右，兩種藥材的含量相當。IO批華南忍冬的咖啡酸(C9H804) 含量范圍大約在0.1% ~ 0.23%,而金《艮花中咖啡酸含量大約0.02%-0.03%, 華南忍冬的咖啡酸含量是金銀花的5 ~ 10倍。2.3 精密度試驗精密吸耳又咖啡酸、綠原酸對照品混合溶液10|il,在以 上色譜條件下，連續重復進樣6次，依法測定，計算咖啡酸、綠原酸對照品峰 面積的相對標準偏差分別為0.51%及0.88%，表明該方法的精密度好。
2.4重復性試驗精密稱取同一批號藥材粉末6份，照上述供試品溶液 的制備方法及色譜條件操作測定，進樣10iil，計算咖啡酸、綠原酸峰面積的相 對標準偏差分別為1.65%及2.31%，表明該方法的重復性好。
2.5 中間精密度試驗精密稱取同一批號藥材粉末2份，分別在不同日 期、不同儀器變動因素條件下，按2.2高效液相色譜分析依法進行操作測定， 計算咖啡酸和綠原酸的含量及相對標準偏差。結果不同日期RSD: 1.33%，不 同儀器RSD-0.52。/。，表明該方法具有較好的中間精密度。
2.6加樣回收率試驗分別精密稱取已知咖啡酸、綠原酸含量的藥材粉 末適量，再分別精密加入一定量的對照品，使供試品溶液中咖啡酸、綠原酸濃 度分別在咖啡酸、綠原酸標準曲線的高、中、低三個濃度區域，每個濃度平行 操作3份，按2.2高效液相色語分析依法操作測定，計算回收率。結果咖啡酸、 綠原酸的平均回收率分別為99.6%及104.7%, RSD分別為2.16%及3.26%。表 明該方法回收率好，即準確度好。
權利要求
1. 一種鑒別華南忍冬和金銀花的方法，是利用薄層色譜法對華南忍冬和金銀花進行區分；所述薄層色譜法的色譜條件為對照品溶液綠原酸和咖啡酸混合的甲醇溶液，各組分濃度均為1mg/ml，供試品溶液為藥材的甲醇溶液；薄層板為以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H板或G板；點樣量0.1～20μl；展開劑為乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶1～3)的上層溶液或氯仿-甲醇-甲酸(9∶1∶0.5)；紫外光燈365nm下檢視。
2. 如權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于進一步釆用高效液相色譜 法對華南忍冬和金銀花進行區分；高效液相色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-磷酸 溶液(12:88)為流動相；進樣量5-10^1;檢測波長為310 ~ 340nm;理論塔板數按咖啡酸峰計算不低于1000;對照品溶液綠原酸和咖啡酸的混合的50%曱醇溶液，其中每ml含綠原 酸40pg、咖啡酸8iig;供試品溶液藥材的50%甲醇的溶液；
3. 權利要求1或2所述鑒別方法的應用，是應用于鑒別含有華南忍冬或 金銀花的藥物制劑。
全文摘要
本發明公開了一種鑒別華南忍冬和金銀花的方法，是利用薄層色譜法對華南忍冬和金銀花進行區分；本發明還進一步采用高效液相色譜法對華南忍冬和金銀花進行區分。本發明的鑒別方法可用于金銀花或華南忍冬藥材真偽及品質優劣的評價，可用于區分金銀花藥材與華南忍冬藥材，還可用于制劑中投料藥材的品質評價，保證其質量的穩定、均一，可控。本發明的方法具有操作簡便、重現性好、直觀性強等優點。
文檔編號G01N30/90GK101520444SQ20091003737
公開日2009年9月2日 申請日期2009年2月24日 優先權日2009年2月24日
發明者關倩怡, 維 彭, 李楚源, 青 林, 峰 梁, 王德勤, 王永剛, 肖曉麗, 蘇薇薇, 琳 黃 申請人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司;中山大學
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
