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專利名稱：載體介導(dǎo)的分布系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了測(cè)定高、中和低親油值(lipophilicity value)的方法。
背景技術(shù)：
親油性是藥物發(fā)現(xiàn)中一種重要的分子性質(zhì)。對(duì)于與一些藥學(xué)過程如膜滲透、溶解度、分布容積、代謝穩(wěn)定性和蛋白結(jié)合的相關(guān)性而言，對(duì)藥物親油性的精確了解是很有用的。親油性用log P(中性分子的辛醇-水分配系數(shù))或log D(荷電分子的辛醇-水分布系數(shù))表示。
通常，親油性通過常規(guī)的搖瓶法(M.M.Abraham，H.S.Chadha，J.P.Dixon和A.J.Leo.氫鍵.第9部分.溶質(zhì)在水和各種醇之間的分配(Hydrogen bonding.Part 9.The partition of solutes between water andvarious alcohols).Phys.Org.Chem.7712-716(1994)來測(cè)定。當(dāng)手動(dòng)進(jìn)行時(shí)，這種方法十分費(fèi)時(shí)(每天僅可測(cè)定2-5個(gè)化合物)。但是，由于快速的類似物合成和組合化學(xué)的發(fā)展，藥物發(fā)現(xiàn)中制備出的化合物的數(shù)目急劇增加。這種情況需要快速且有效的測(cè)定化合物親油性的方法。
此外，現(xiàn)有技術(shù)中的方法不適用于溶解度低的化合物。從2002年以來，由于化合物在參比溶液中沉淀或水相中的樣品濃度低，約35％的log D測(cè)量以失敗而告終(來源RODIN和SPC數(shù)據(jù)庫，2004)。另一方面，需要log D＞4的高通量測(cè)量，對(duì)于要求高親油性的藥物目標(biāo)而言尤其存在這種需要。
因此，需要一種快速的、可測(cè)定低溶解度化合物的親油性的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及測(cè)定感興趣的化合物的親油性的方法，其包括a)提供一個(gè)層，b)用溶劑A浸漬所述的層，c)將感興趣的化合物施加于被浸漬的層，d)加入溶劑B，e)在已經(jīng)達(dá)到分布平衡后，取出溶劑B，和f)測(cè)定感興趣的化合物在各溶劑相的至少一個(gè)相中的量。
優(yōu)選地，測(cè)定感興趣的化合物在粘附于所述層上的溶劑相中的量。
感興趣的化合物可以是任何化學(xué)或生物學(xué)化合物。感興趣的化合物可以是例如有機(jī)化合物、蛋白質(zhì)、肽或核酸。有機(jī)化合物還可包括有機(jī)-無機(jī)分子。本文所用的術(shù)語有機(jī)-無機(jī)分子指的是其中至少一個(gè)無機(jī)原子與碳原子相連接的有機(jī)分子。無機(jī)原子可以是金屬原子，如硅(Si)或鍺(有機(jī)金屬化合物，即有機(jī)分子的Si或Ge的bioisoester)。
感興趣的化合物可以是固體或液體。可以將感興趣的化合物溶解于適宜的溶劑如例如DMSO(二甲基亞砜)中。感興趣的化合物可以是親脂性化合物或親水性化合物。用于親水性化合物的適宜溶劑優(yōu)選地是極性溶劑；用于親脂性化合物的適宜溶劑優(yōu)選地是非極性溶劑。
本文所用的術(shù)語“層”指的是溶劑的載體，該層能完全吸收溶劑。術(shù)語“完全吸收”意指施加于該層上的溶劑(即溶劑A)與所述的層結(jié)合，不會(huì)滲漏到其它相(即溶劑B)中。
所述的層具有空穴。這些空穴可以是孔、腔、洞或縫。這些空穴可以由載體材料形成，如一種情況是例如由形成網(wǎng)狀物的纖維形成。這些空穴還可以例如通過用離子穿透所述的層而產(chǎn)生。優(yōu)選地，所述的層是可滲透性的。
所述的層可以是例如網(wǎng)狀物或膜狀物(例如Westran Clear Signal膜狀箔(Whatman)、Immobilon-P PVDF(Millipore)、PVDF-Plus、TransferMembrane(Koma Biotech))。優(yōu)選地，所述的層是膜狀物。如果溶劑是非極性的，則載體材料優(yōu)選地是疏水性的，如聚偏二氟乙烯(polyvinyldenfluorid)(PVDF)、聚四氟乙烯(PTFE)、環(huán)烯烴共聚物(COC)、聚丙烯(PP)或聚碳酸酯(PC)。如果溶劑是極性的，則載體材料優(yōu)選地是親脂性的，如醋酸纖維素、玻璃纖維、親水性聚偏二氟乙烯(PVDF)、親水化的聚碳酸酯和其它親水化的濾料。
溶劑A可以是非極性或極性溶劑。溶劑B也可以是非極性或極性溶劑。溶劑A與溶劑B不可混溶或幾乎不可混溶。如果溶劑A是非極性溶劑，則溶劑B是極性溶劑，如果溶劑A是極性溶劑，則溶劑B是非極性溶劑。
本文所用的術(shù)語“非極性溶劑”指的是疏水性溶劑。非極性溶劑與極性溶劑如例如水不可混溶或幾乎不可混溶。親脂性化合物通常具有在非極性溶劑中比在極性溶劑中更易溶的傾向。非極性溶劑的介電常數(shù)通常比水的介電常數(shù)低。疏水性溶劑的實(shí)例有有機(jī)溶劑，如辛醇或脂族烴(十二烷、十六烷或鹵化烴)。
本文所用的術(shù)語“親水性溶劑”或“極性溶劑”指的是含有電荷分布不均等并因此荷電的分子的溶劑。極性溶劑與非極性或疏水性溶劑不可混溶或者幾乎不可混溶。極性或可電離的化合物具有在極性溶劑中更易溶的傾向。極性溶劑可以是例如親水性緩沖液，其可以由在水中的緩沖鹽(即被緩沖為pH 7.4的磷酸鹽或TAPSO鹽的水溶液)組成，在感興趣的pH范圍內(nèi)具有高緩沖容量。感興趣的pH可以是pH 0至14，優(yōu)選pH是約7.4。
本文所用的術(shù)語“分布平衡”指的是在特定的時(shí)間后，感興趣的化合物在極性溶劑和非極性溶劑之間分布平衡。優(yōu)選地，在0.1-24小時(shí)之間達(dá)到分布平衡，更優(yōu)選地在2小時(shí)內(nèi)達(dá)到分布平衡。
可以通過將溶劑施加于所述的層來對(duì)該層進(jìn)行浸漬，從而所述的層能完全吸收所述溶劑。可以用分配器來施加溶劑。其它方法是本領(lǐng)域已知的，如例如機(jī)器人液體處理系統(tǒng)，其使得可以將0.1μl-50μl/cm2的有機(jī)改性劑分配到所述層的表面上，所述層可以是濾膜。
可以通過一些方法來測(cè)定感興趣的化合物在溶劑(溶劑A或溶劑B)中的量，所述的方法包括但不限于紫外線光譜法和/或質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳(CE)和高效液相色譜法(HPLC)。
優(yōu)選地，所述的層被附著在管的底部。所述的管包括但不限于透明小容器、孔或多孔板。優(yōu)選地，所述的層附著于其上的所述的管是歐洲專利申請(qǐng)EP 1232792中所述的管，將該專利申請(qǐng)全部引入本文作為參考。更優(yōu)選地，所述的層附著于其上的所述的管是EP 05111522.8中所述的管，將該專利申請(qǐng)全部引入本文作為參考。
所述的層附著于其上的優(yōu)選的透明小容器具有上部室17和下部室18，17和18具有一個(gè)共同的通過兩個(gè)室中心的對(duì)稱軸Y-Y。上部室17和下部室18各自基本為圓柱形。上部室17的在其中央部分的橫截面大于下部室18的橫截面(圖5)。
這種透明小容器具有帶有開放的下端23的下部室18和帶有開放的頂端24和環(huán)狀底部壁25的上部室17。該底部壁具有中央環(huán)狀開口26，其連接所述的上部室17和下部室18(圖5)。
底部壁25的內(nèi)表面27是圓錐面的一部分，其橫截面與透明小容器的對(duì)稱軸Y-Y形成約80度的角，從而使得所述上部室17和所述下部室18之間的橫截面急劇改變。
下列材料是能用于制造透明小容器的材料的實(shí)例醋酸纖維素、聚碳酸酯、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚砜、聚苯乙烯、聚丙烯(PP)、環(huán)狀烯烴共聚物(COC)。也可以用具有相似收縮系數(shù)(shrinkage coefficient)(與注射成型有關(guān))和熔化性質(zhì)的材料來制造所述的管。
優(yōu)選地，透明小容器是陣列11的一部分(圖4)。所述陣列中的各透明小容器具有相同的形狀和大小，并且相鄰的透明小容器通過單連結(jié)板(single web)15、16彼此相連。這些單連結(jié)板15、16各自具有彎曲的形狀。
形成透明小容器陣列11的一部分的每一個(gè)透明小容器12的對(duì)稱軸Y-Y基本位于一個(gè)相同的平面A-A上，該平面是透明小容器陣列11的對(duì)稱面。陣列11的中間透明小容器12的上部通過第一單連結(jié)板15與位于中間透明小容器12的一側(cè)的相鄰?fù)该餍∪萜?3相連，并且通過第二單連結(jié)板16與位于中間透明小容器12另一側(cè)的相鄰?fù)该餍∪萜?4相連。第一單連結(jié)板15和第二單連結(jié)板16位于所述對(duì)稱面A-A的相反側(cè)。
連結(jié)板15、16是柔韌性的，因此無論透明小容器陣列11的長度如何變化，它們均有助于將透明小容器插入到透明小容器固定器中，所述的長度變化是由于通過注射成型制造透明小容器陣列11所用的不同材料的收縮系數(shù)不同而造成的。
透明小容器陣列11中的一些透明小容器具有鎖扣21和22(圖4B)，其是透明小容器的固有部分并且用于將透明小容器以可拆卸的方式與透明小容器固定器52相連。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，透明小容器固定器52基本為矩形并且具有四個(gè)中心定位肋狀物(centering rib)，它們各自位于透明小容器固定器52的一個(gè)角的外表面上(圖8)。
透明小容器陣列11中的一些透明小容器具有放射狀取向的肋狀物19、29(圖4B)，它們用于將透明小容器精確定位入透明小容器固定器32的開口中。
透明小容器陣列11是通過將所選擇的第一種塑性材料注射成型而制成的，所述的第一種塑性材料特別適合于與所選擇的構(gòu)成所述的層的第二種材料組合使用。調(diào)節(jié)該層使其與透明小容器陣列中的各透明小容器緊密附著在一起以覆蓋各透明小容器的至少一個(gè)開口。
優(yōu)選對(duì)用于制造透明小容器陣列的注射成型裝置進(jìn)行配置和尺寸調(diào)整以便能用一種相同的裝置對(duì)具有不同收縮系數(shù)的不同材料進(jìn)行注射成型。
下列材料是能用于制造透明小容器陣列11的材料的實(shí)例醋酸纖維素、聚碳酸酯、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚砜、聚苯乙烯、聚丙烯(PP)。也可以用具有相似收縮系數(shù)(與注射成型有關(guān))和熔化性質(zhì)的材料制造透明小容器陣列11。
所述的層與各透明小容器的附著可以例如通過將所述的層與透明小容器粘合在一起或通過焊接方法來實(shí)現(xiàn)。附著在各單個(gè)透明小容器上的層僅與該單個(gè)透明小容器附著在一起，不與任何其它透明小容器或附著在不同透明小容器上的箔相連。
所述層與透明小容器的附著必需確保這些組成部分的介質(zhì)緊密連接(液體緊密連接)。
所述的層附著于其上的更優(yōu)選的管是具有上部室37和下部室38以及通過兩個(gè)室中心的共同對(duì)稱軸Y-Y的透明小容器。上部室37和下部室38各自基本為圓柱形。上部室37的在其中央部分的橫截面大于下部室38的橫截面(圖7A)。
下部室38具有開放的下端33。上部室37具有開放的頂端34和環(huán)狀底部壁35。該底部壁具有中央環(huán)狀開口36，其連接所述的上部室37和下部室38。
底部壁45的內(nèi)表面是圓錐面的一部分，其橫截面與該透明小容器的對(duì)稱軸Y-Y形成約80度的角，從而使得所述上部室37和所述下部室38之間的橫截面急劇改變。
透明小容器陣列31是通過將所選擇的第一種塑性材料注射成型而制成的，所述的第一種塑性材料特別適合于與所選擇的構(gòu)成所述層的第二種材料組合使用。調(diào)節(jié)該層使其與透明小容器陣列中的至少一個(gè)透明小容器緊密附著在一起以覆蓋透明小容器的至少一個(gè)開口。對(duì)于所述的第一種塑性材料和所述的第二種塑性材料而言，可以使用相同的塑性材料。
所述的層與一個(gè)或多個(gè)透明小容器的附著可以例如通過將所述的層與一個(gè)或多個(gè)透明小容器粘合在一起或通過焊接方法來實(shí)現(xiàn)。附著在一個(gè)單個(gè)透明小容器上的層僅與該單個(gè)透明小容器附著在一起，不與任何其它透明小容器或附著在不同透明小容器上的箔相連。
所述層與透明小容器的附著必需確保這些組成部分的介質(zhì)緊密連接(液體和/或氣體緊密連接)。
陣列31中的每一個(gè)透明小容器均具有相同的形狀和尺寸，相鄰的透明小容器通過單連結(jié)板35、36彼此相連。這些單連結(jié)板35、36各自是柔韌性的并且具有彎曲的形狀(圖6)。
形成透明小容器陣列31的一部分的每一個(gè)透明小容器32的對(duì)稱軸Y-Y基本位于一個(gè)相同的平面A-A上，該平面是透明小容器陣列31的對(duì)稱面。陣列31中的中間透明小容器32的上部通過第一單連結(jié)板35與位于中間透明小容器32一側(cè)的相鄰?fù)该餍∪萜?3相連，并且通過第二單連結(jié)板36與位于中間透明小容器32另一側(cè)的相鄰?fù)该餍∪萜?4相連。
單連結(jié)板35、36是柔韌性的，因此無論透明小容器陣列31的長度如何變化，它們均有助于將透明小容器插入到透明小容器固定器、例如透明小容器固定器52中，所述的長度變化是由于通過注射成型制造透明小容器陣列31所用的不同材料的收縮系數(shù)不同而造成的。這些單連結(jié)板35、36可以位于平面A-A的兩個(gè)相對(duì)側(cè)面的任何一個(gè)側(cè)面(圖5)。
陣列31中的至少兩個(gè)透明小容器具有用于將透明小容器以可拆卸的方式與透明小容器固定器相連的手段，該手段是透明小容器的一個(gè)固有部分。優(yōu)選地，這些連接手段是鎖扣41和42。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，透明小容器固定器基本為矩形并且具有四個(gè)中心定位肋狀物，它們各自位于透明小容器固定器、如圖8中的透明小容器固定器52的一個(gè)角的外表面上。
優(yōu)選地，具有連接手段的透明小容器在陣列中的分布是均衡的。如果兩個(gè)透明小容器具有連接手段，則優(yōu)選地第一個(gè)和最后一個(gè)透明小容器各自具有連接手段，或者第二個(gè)和倒第二個(gè)透明小容器各自具有連接手段，或者第三個(gè)和倒第三個(gè)透明小容器各自具有連接手段等。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在八個(gè)透明小容器的陣列中，第一個(gè)透明小容器、第三個(gè)透明小容器、第四個(gè)、第五個(gè)、第六個(gè)和第八個(gè)透明小容器各自具有連接手段。
正如可從圖8領(lǐng)會(huì)到的那樣，按照透明小容器固定器52排列的透明小容器的二維陣列51具有開口54的矩陣陣列53，所述的開口54用于接受至少一種具有上述特征的線型透明小容器陣列11、31中的透明小容器12、32。透明小容器陣列11、31中的各透明小容器12、32具有恰好適配入透明小容器固定器52的開口54中的形狀和尺寸。
如圖9所示，可以將兩個(gè)或更多個(gè)各自具有上文參照?qǐng)D8所描述的結(jié)構(gòu)的二維透明小容器陣列51和81彼此組套，以形成三維透明小容器陣列。對(duì)該類陣列的組成部分進(jìn)行配置和尺寸調(diào)整以便在其各自固定器中具有相同的相對(duì)位置的透明小容器與其對(duì)稱軸相符地精確地一個(gè)定位于另一個(gè)上面，所述透明小容器中的一個(gè)占據(jù)上部透明小容器91的位置，另一個(gè)占據(jù)下部透明小容器92的位置。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，各上部透明小容器91的下部的一部分位于相應(yīng)的下部透明小容器92的上部室內(nèi)，上部透明小容器91的下端與下部透明小容器92的上部室的底部壁之間具有預(yù)定的距離。
如圖10所示，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的多孔板而言，也可以將具有上文參照?qǐng)D8所描述的結(jié)構(gòu)的二維透明小容器陣列51組套在標(biāo)準(zhǔn)固定器板85上。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種測(cè)定感興趣的親脂性化合物的親油性的方法，其包括a)提供一個(gè)疏水性層，b)用非極性溶劑浸漬所述的層，c)將感興趣的化合物施加于被浸漬的層，d)加入親水性溶劑，e)在已經(jīng)達(dá)到分布平衡后，取出親水性溶劑，和f)測(cè)定感興趣的化合物在粘附于疏水性層上的親脂性溶劑相中的量。
本文所用的術(shù)語“疏水性層”指的是非極性溶劑的載體。優(yōu)選地，疏水性層是疏水性膜。該類膜可以以疏水性材料的網(wǎng)狀物形式或具有孔的層的形式形成。優(yōu)選地，孔徑或網(wǎng)目尺寸為0.01-100μm。疏水性膜載體材料包括但不限于PVDF、PTFE、環(huán)狀烯烴共聚物(COC)、PP或PC。
感興趣的親脂性化合物可以是例如多環(huán)芳族或脂族烴、脂溶性維生素、疏水性藥物如殺真菌劑、包含鹵素的芳族或脂族烴、包含氮和氧的芳族或脂族烴。
非極性溶劑與極性溶劑不可混溶或者幾乎不可混溶。優(yōu)選的非極性溶劑是辛醇(辛-1-醇)。優(yōu)選的極性溶劑是水或緩沖液。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及一種測(cè)定感興趣的親水性化合物的親油性的方法，其包括a)提供一個(gè)親水性層，b)用極性溶劑浸漬所述的層，
c)將感興趣的化合物施加于被浸漬的層，d)加入非極性溶劑，e)取出非極性溶劑，和f)測(cè)定感興趣的化合物在粘附于親水性層上的親水性相中的量。
本文所用的術(shù)語“親水性層”指的是極性溶劑的載體。優(yōu)選地，親水性層是親水性膜。該類膜可以以親水性材料的網(wǎng)狀物形式或以具有孔的層的形式形成。優(yōu)選地，孔徑或網(wǎng)目尺寸為0.01-100μm。親水性載體材料包括但不限于醋酸纖維素、玻璃纖維、親水性聚偏二氟乙烯(PVDF)、親水化的聚碳酸酯和其它親水化的濾料。
非極性溶劑與極性溶劑不可混溶或幾乎不可混溶。優(yōu)選的非極性溶劑是辛醇(辛-1-醇)。優(yōu)選的極性溶劑是水或緩沖液。
本發(fā)明還涉及被溶劑浸漬的層用于測(cè)定感興趣的化合物的親油性的用途。
所述的層可以是疏水性層或親水性層。所述的溶劑可以是非極性(疏水性)或極性(親水性)溶劑。如果所述的溶劑是非極性溶劑，則所述的層優(yōu)選地是疏水性的。如果所述的溶劑是極性溶劑，則所述的層優(yōu)選地是親水性的。
感興趣的化合物可以是任何化學(xué)或生物學(xué)化合物。感興趣的化合物可以是例如有機(jī)化合物、蛋白質(zhì)、肽或核酸。有機(jī)化合物還可包括有機(jī)-無機(jī)分子。本文所用的術(shù)語有機(jī)-無機(jī)分子指的是其中至少一個(gè)無機(jī)原子與碳原子相連接的有機(jī)分子。無機(jī)原子可以是金屬原子，如硅(Si)或鍺(有機(jī)金屬化合物，即有機(jī)分子的Si或Ge的bioisoester)。
感興趣的化合物可以是固體或液體。可以將感興趣的化合物溶解于適宜的溶劑如例如DMSO(二甲基亞砜)中。用于親水性化合物的適宜溶劑優(yōu)選地是極性溶劑；用于親脂性化合物的適宜溶劑優(yōu)選地是非極性溶劑。
感興趣的化合物可以是親脂性化合物或親水性化合物。如果感興趣的化合物是親脂性化合物，則所述的層可以是被非極性溶劑浸漬的疏水性層。優(yōu)選地，所述的非極性溶劑是辛醇。如果化合物是親水性化合物，則所述的層可以是被極性溶劑浸漬的親水性層。優(yōu)選地，所述的非極性溶劑是水或緩沖液。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的層附著在管的底部。所述的管包括但不限于透明小容器、孔或多孔板。更優(yōu)選地，所述的疏水性層附著在歐洲專利申請(qǐng)EP 1232792或EP 05111522.8中所述的管上，將這兩個(gè)專利申請(qǐng)全部引入本文作為參考。優(yōu)選的管在該文件的另一處有描述。
下列材料是能用于制造管的材料的實(shí)例醋酸纖維素、聚碳酸酯、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚砜、聚苯乙烯、聚丙烯(PP)或環(huán)狀烯烴共聚物(COC)。也可以用具有相似收縮系數(shù)(與注射成型有關(guān))和熔化性質(zhì)的材料來制造管。
本發(fā)明的方法使得可以迅速測(cè)定高親油值。另外，對(duì)一種化合物進(jìn)行試驗(yàn)所必需使用的材料更少，并且可以用標(biāo)準(zhǔn)液體處理工作站容易地自動(dòng)進(jìn)行該方法。此外，該方法不需要使用有沉淀風(fēng)險(xiǎn)的水性參比溶液。
現(xiàn)已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了一般性描述，通過參考具體實(shí)施例以及下文的附圖將可以更好地理解本發(fā)明，除非特別說明，否則本文所包括的實(shí)施例目的僅在于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例說明，而并非旨在限制本發(fā)明。


圖1以圖解方式表示了現(xiàn)有技術(shù)的方法。在多孔板(W)中，將感興趣的化合物溶解于適宜的溶劑中并向其中加入親水性緩沖液(H)。向該緩沖液中加入親脂性溶劑(L)。將板密封(S)并將該板振搖直至達(dá)到分布平衡。然后，取出水相，測(cè)定感興趣的化合物在親水性緩沖液中的量。由于體積小，難以進(jìn)行相分離并且相分離的結(jié)果常常不能令人滿意。
圖2以圖解方式表示了本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案。將膜(M)附著在管(T)上。將該膜用辛醇浸漬并將溶解的感興趣的化合物施加于膜上。將管(T)插入到充滿親水性緩沖液(HB)的板(P)中，從而使得膜與緩沖液相接觸。在達(dá)到平衡后，將管簡單地從板中取出，從而實(shí)現(xiàn)相分離。
圖3表示通過本發(fā)明的方法所獲得的log D(DIFI-log D)和由文獻(xiàn)獲得的值(Lit.log D)的線性回歸曲線。文獻(xiàn)值是從MEDChem數(shù)據(jù)庫(得自DAYLIGHTChemical Information Systems Inc.27401 Los Alto，USA的商業(yè)數(shù)據(jù)庫)、Winiwarter等人，J.Med.Chem，414939-49(1998)和SiriusTechnical Application Notes第2卷(1995)中獲得的。
圖4表示線型透明小容器陣列11。A)透明小容器陣列的俯視圖，B)通過A)中透明小容器陣列的平面A-A的橫截面圖。
圖5表示圖4中線型透明小容器陣列11中的一個(gè)透明小容器12的橫截面視圖。A)沒有層，B)具有附著的層61。
圖6表示線型透明小容器陣列31。A)透明小容器陣列的俯視圖，B)通過A)中透明小容器陣列的平面A-A的橫截面圖。
圖7表示圖6中線型透明小容器陣列31的一個(gè)透明小容器32的橫截面視圖。A)沒有層，B)具有附著的層71。
圖8表示具有透明小容器固定器52、矩陣陣列53和用于透明小容器的開口54的二維透明小容器陣列51的俯視圖，在該二維透明小容器陣列51中，插入了兩個(gè)線型透明小容器陣列11。
圖9表示組套的二維透明小容器陣列51和81的橫截面圖。
圖10表示組套在標(biāo)準(zhǔn)分析多孔板85上的二維透明小容器陣列51的橫截面圖。
參照數(shù)字列表11線型透明小容器陣列12透明小容器13透明小容器14透明小容器15連結(jié)板16連結(jié)板17上部室18下部室
19肋狀物21鎖扣22鎖扣23開放的下端24開放的頂端25底部壁26開口27底部壁25的內(nèi)表面29肋狀物31陣列32透明小容器33相鄰的透明小容器34相鄰的透明小容器35單連結(jié)板36單連結(jié)板37上部室38下部室41肋狀物42肋狀物43下部頂端44開放的頂端45底部壁46開口51二維透明小容器陣列52透明小容器固定器53開口的矩陣陣列54開口(用于接受透明小容器)61層
71層81二維透明小容器陣列82透明小容器固定器83固定器板85用于標(biāo)準(zhǔn)多孔板的標(biāo)準(zhǔn)固定器板91上部透明小容器92下部透明小容器具體實(shí)施方式
實(shí)施例除非特別說明，否則實(shí)施例中所涉及的可通過商業(yè)途徑獲得的試劑是根據(jù)生產(chǎn)商的說明書來進(jìn)行使用的。
實(shí)施例1親油性實(shí)驗(yàn)是在與歐洲專利申請(qǐng)EP 1232792所述的新型DIFI-管組合的96-深孔微量滴定板中進(jìn)行的。
將驗(yàn)證組的所有化合物以10mM的濃度溶解于二甲基亞砜中(DMSO-貯備液)。
通過準(zhǔn)確包被0,45μm的疏水性PVDF膜(Immobilon-P PVDF(Millipore)和PVDF-Plus(Whatman，Headquater27 Great West Road，Brentford，Middlesex，TW8 9BW，UK)來開始實(shí)驗(yàn)，所述的PVDF膜和PVDF-Plus被固定在DIFI-管的底部。
將各膜用精確的1μl辛醇和1μl DMSO-貯備液浸漬。
在10分鐘的短期溫育后，將具有包被膜的管與已經(jīng)預(yù)填充了精確的1600μl所選擇的緩沖液(50mM TAPSO(FLUKA，BioChemika，ArtNo.93357)，pH 7.4)的96-深孔板連接在一起。所得的夾心結(jié)構(gòu)確保了膜被完全浸到緩沖液中(圖2)。
然后，將板密封并振搖2小時(shí)。從而，在此期間所述物質(zhì)在膜、辛醇和緩沖液之間進(jìn)行分布。
在達(dá)到分布平衡后(2小時(shí)后)，小心地將管從深孔板的頂部拆下來，以便對(duì)仍然粘附在膜上的辛醇相進(jìn)行分析。
因此，用另外的辛醇作為洗脫劑將該辛醇相中剩余的化合物洗脫下來。然后，用紫外線光譜法在250至450nm的吸收波長下測(cè)定洗脫液中的物質(zhì)濃度。
為了了解用緩沖液進(jìn)行溫育之前的精確樣品濃度，在與上文所述的樣品板相同的條件下產(chǎn)生參比板。參比板直接用洗脫液處理，并用紫外線光譜法測(cè)量所得的辛醇相中的參比濃度。
評(píng)估可以由用緩沖液溫育后分析得到的樣品濃度(Co)和進(jìn)行分布前的參比濃度(Cref)計(jì)算親油值log D。
logD=log(CoCref-Co·VwVo)]]>由于所有的UV測(cè)量均在相同條件下進(jìn)行這一事實(shí)，可以用相同波長下的UV-吸收值(Abs)來代替濃度項(xiàng)。
logD=log(AbsoAbsref-Abso·VwVo)]]>在該方程中，Vw是水相的體積，用其除以辛醇相的體積Vo。
驗(yàn)證用一組14種在文獻(xiàn)中具有已知log D值的被充分表征的、化學(xué)上不同的藥物來驗(yàn)證該方法。對(duì)于各化合物，按照上述方法進(jìn)行三次測(cè)定。手動(dòng)進(jìn)行參比板和樣品板的制備。
然后，將獲得的log D值(DIFI-log D)與從文獻(xiàn)中獲得的值(Lit.log D)進(jìn)行比較。表1匯總了驗(yàn)證結(jié)果。圖3中使用了相應(yīng)的數(shù)據(jù)。
表1.驗(yàn)證組的14種在文獻(xiàn)中具有已知log D值(Lit.log D)的藥物。對(duì)由不同來源得到的文獻(xiàn)值與用新方法獲得的數(shù)據(jù)的比較來驗(yàn)證本發(fā)明的方法。

a)MEDChem01，MEDChem03b)由logP和pKa計(jì)算得到c)Winiwarter，S.，Bonham，N.M.，Ax，F(xiàn).，Hallberg，A.，Lennernas，H.，Karlen，A.，J.Med.Chem.，41，4939-4949(1998)d)Sirius Technical Application Notes第2卷(1995)在用HTlog D進(jìn)行的比較中，對(duì)于高log D值的測(cè)定而言，本發(fā)明的方法需要非常低的辛醇-水比例。其它的優(yōu)點(diǎn)在于樣品消耗量降低和可以容易地分離出辛醇相以及用極性溶劑將載體固定的非極性溶劑轉(zhuǎn)移到多個(gè)孔中，從而增加了高親脂性化合物的分布容積并因此增加了其測(cè)量范圍(表2)。
表2.與新方法比較的HTlog D。

權(quán)利要求
1.測(cè)定感興趣的化合物的親油性的方法，其包括a)提供一個(gè)層，b)用溶劑A浸漬所述的層，c)將感興趣的化合物施加于被浸漬的層，d)加入溶劑B，e)在已經(jīng)達(dá)到分布平衡后，取出溶劑B，和f)測(cè)定感興趣的化合物在各溶劑相的至少一個(gè)相中的量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中測(cè)定感興趣的化合物在粘附于所述層上的相中的量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述的層是疏水性層。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中溶劑A是非極性溶劑，溶劑B是極性溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述的層是親水性層。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中溶劑A是極性溶劑，溶劑B是非極性溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或6中任意一項(xiàng)所述的方法，其中非極性溶劑是辛醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的層是膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的層附著在管的底部。
10.被溶劑浸漬的層用于測(cè)定感興趣的化合物的親油性的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述的溶劑是親脂性溶劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述的親脂性溶劑是辛醇。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述的溶劑是親水性溶劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中所述的親水性溶劑是緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于測(cè)定感興趣的化合物的親油性的新方法，其包括a)提供一個(gè)層，b)用溶劑A浸漬所述的層，c)將溶解的感興趣的化合物施加于被浸漬的層，d)加入溶劑B，e)在已經(jīng)達(dá)到分布平衡后，取出溶劑B，和f)測(cè)定感興趣的化合物在各溶劑相的至少一個(gè)相中的量。
文檔編號(hào)G01N33/00GK1837818SQ20061006542
公開日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月21日
發(fā)明者H·菲舍爾, M·坎西, B·瓦格納 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司