專利名稱：一種流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種流行性出血熱病毒抗體檢測試紙條及其應用。
背景技術：
國際上將流行性出血熱(EHF)與流行性腎病(NE)等統稱腎綜合征出血熱(HFRS)。(HFRS)是由布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Hantavirus)中某些病毒引起和有某些嚙齒動物攜帶傳播的一類自然疫源性疾病。在我國流行的是EFH，黑線姬鼠和褐家鼠為其主要宿主和傳染源，傳播主要通過與宿主動物或其排泄物(尿、糞)/分泌物(唾液)接觸。我國是受漢坦病毒危害最為嚴重的國家，近10年來每年報告病例4-6萬，占世界報道病例總數的90％以上，是國家重點防治的傳染病之一。EHF起病急，進展快，病死率高，早期診斷對降低病死率有著特殊的重要意義。
漢坦病毒的基因組由L、M和S三個片段組成，S片段編碼病毒核蛋白，核蛋白可誘導產生非中和抗體，在免疫保護中起一定的作用；M片段編碼病毒糖核蛋白，包括G1和G2，G1區有抗原決定簌的主要部位，毒力基因可能也在G1區，糖蛋白可能是產生中和抗體、血凝抑制抗體、細胞融合和細胞免疫的主要功能部位，不同血清型病毒的糖蛋白有差異，血清型不同的病毒毒力和同一血清型不同毒株的毒力也均不同，造成了不同血清型病毒在病原學、流行病學、臨床表現等方面的差異的基礎；L片段編碼L蛋白主要是病毒多聚酶(或轉錄酶)蛋白，在病毒復制中起主要作用。
目前流行性出血熱病毒抗體傳統的檢測方法是采用血清學診斷方法，包括有應用IgM捕獲ELISA法檢測EHF IgM抗體、間接酶免疫吸附試驗檢測EHFIgG抗體、免疫熒光試驗檢測雙份血清IgG抗體等，這些方法均需要一定的儀器設備，需要專業技術人員在專業實驗室進行，有的方法需要檢測雙份血清，在檢測時間上也達不到快速篩查病人、及時控制疫情的目的。
針對流行現狀和防治要求，對于流行性出血熱的診斷，不但要求高的特異性和敏感性，還需要快速、簡便、易于基層醫療和衛生單位使用。
發明內容
(一)、要解決的技術問題本發明的目的是提供一種方便、快捷地檢測流行性出血熱病毒抗體的試紙條。
本發明另一個目的是提供所述試紙條在檢測流行性出血熱病毒抗體中的應用。
(二)、技術方案本發明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。
本發明所述的試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗原保護膜。
本發明所述的試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
本發明所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
本發明所述的試紙條，其中金標抗原保護膜同時具有吸水功能，選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發明還提供了所述試紙條在檢測流行性出血熱中的應用。將疑似病人血清標本滴入金標抗原保護膜上，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如含有流行性出血熱抗體，則與試紙條上膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原形成相應的復合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的抗人IgMμ鏈單克隆抗體結合，形成紅色線條，即在T處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原繼續向上爬行與包被在膜上的抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質控線，如膠體金失效，此線就不會出現，說明試紙條失效。
本發明的技術方案是采用抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結合膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原，應用膜層析及膠體金標記技術，檢測標本中的流行性出血熱病毒抗體。
(三)、有益效果本發明結合膠體金標記技術和膜層析技術，可快速定性半定量檢測樣本中可能存在的流行性出血熱病毒抗體，達到快速篩檢病人、及時控制疫情的目的，為下一步的分離鑒定創造了有利條件，節省了大量人力物力，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設備，不需專業培訓，結果清晰易辨；操作簡單、易于推廣、適合基層以及突發事件的大批量現場檢測，適合流行病調查，對流行性出血熱病毒感染診斷起到輔助作用。
圖1A本發明試紙條的正面示意圖；B本發明試紙條的側面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體條帶；C抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體的質控條帶)；3含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜；4金標抗原保護膜；5反應支持物。
圖2檢測結果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線均未顯色為無效。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
實施例1 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cmm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例2 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cmm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例3 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cmm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)將疑似病人血清標本100μl滴入金標抗原保護膜上，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如含有流行性出血熱抗體，則與試紙條上膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原形成相應的復合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的抗人IgMμ鏈單克隆抗體結合，形成紅色線條，即在T處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原繼續向上爬行與包被在膜上的抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質控線，如膠體金失效，此線就不會出現，說明試紙條失效。
實驗例1 臨床檢測結果共檢測疑似病人和密切接觸者樣本500例，結果快速試紙條(T2法)檢出陽性14例，與間接酶免疫吸附試驗相比完全吻合，其特異性和敏感性均為100％。
間接熒光法(T1)與試紙條法(T2)對比實驗統計表
權利要求
1.一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。
2.根據權利要求1所述的試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗原保護膜。
3.根據權利要求2所述的試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
4.根據權利要求2所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據權利要求2所述的試紙條，其中金標抗原保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
6.權利要求1-5之任一所述試紙條在檢測流行性出血熱病毒抗體中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。應用膜層析及膠體金標記技術，檢測標本中的流行性出血熱病毒抗體。應用本發明試紙條檢測，不需特殊儀器，不需專業培訓，且方便快捷、準確特異，10－15分鐘判讀結果，適合醫院等基層單位，適合大規模的流行病學調查及應對突發公共衛生事件。
文檔編號G01N33/569GK1963516SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優先權日2005年11月10日
發明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司
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