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專利名稱：扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸b的測定方法
技術領域：
本發明屬藥物代謝動力學領域，特別是涉及扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法。
背景技術：
扶正化瘀植物藥由丹參、桃仁、五味子等復方組成，具有治療肝、肺、腎纖維化的作用，但對扶正化瘀制劑缺乏藥物代謝動力學的研究，因而對體內的藥效成分不清楚，難以為質量控制及指導臨床合理用藥提供依據，阻礙了該藥進入國際市場。
到目前為止，未見有關扶正化瘀植物藥藥物代謝動力學的研究報道，無該復方在生物樣品(包括血漿樣品)中丹參素和丹酚酸B測定方法。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，該方法用于藥代動力學研究，闡明扶正化瘀植物藥丹參素和丹酚酸B的藥代動力學規律。
本發明解決的技術問題通過以下技術方案來實現扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，包括下列步驟(1)哺乳類血漿樣品預處理a.將哺乳類給予扶正化瘀植物藥后的含藥血漿，加入加2-5mol/L磷酸混勻后，血漿與磷酸之間的體積比為1∶2-3，加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，經水及80-100％甲醇淋洗和0.2-1％氨水甲醇洗脫后，洗脫液在25-30℃條件下揮干富集，用流動相復溶。
b.流動相復溶后用UPLC/MS法檢測色譜條件色譜柱Acquity UPLC BEH C18，2.1×100mm，流動相AWater-Acetonitrile-Formic acid 95∶5∶0.1v/v/v，流動相BAcetonitrile-Formic acid 100∶0.1v/v；質譜條件電噴霧離子源(ESI)，采用負離子模式檢測，質量掃描范圍m/z 150～800。
所述步驟(1)淋洗條件為第一步用水，第二步用80-100％甲醇，洗脫條件為0.2-1％氨水甲醇。
所述步驟(2)負離子模式檢測，脫溶劑氣流量為440L/h，脫溶劑氣溫度為300℃，錐孔氣流量為50L/h，離子源溫度為100℃，噴霧毛細管電壓為3800V，取樣錐孔電壓為30V，萃取錐孔電壓為2.00V，透鏡電壓0.1V。
本發明在固相萃取過程中，固相對分析物的吸附力大于樣品母液，當樣品通過固相萃取柱時，分析物及一些相近似的成分被吸附在固體表面，其他組分則隨樣品母液通過柱子，先用極性較大的溶劑淋洗柱子，將一些無關的成分清洗去除，最后用適當的溶劑將分析物洗脫下來，洗脫液抽干富集；利用UPLC系統，將分析物與洗脫液中的其他成分進行分離，最后通過質譜檢測儀進行檢測。
本發明的丹參素和丹酚酸B均為水溶性成分，采用固相萃取方法，可充分將因漿中的丹參素和丹酚酸B萃取出來，再加上使用UPLC/MS系統進行檢測，使丹參素和丹酚酸B與樣品中其他成分的分離度明顯提高，且分析方法更加靈敏和快捷，以利于進行藥代動力學研究中丹參素和丹酚酸B的血藥濃度測定。


圖1.丹參素UPLC-MS色譜圖。
圖2.丹酚酸B UPLC-MS色譜圖。
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
實施例1扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法包括1、血漿樣品預處理方法將哺乳類給予扶正化瘀植物藥的含藥血漿先加2.17mol/L磷酸混勻后，生物樣品與磷酸之間的體積比為1∶2-3；再加入已用甲醇和水活化后的WatersOasis HLB小柱，經水及80-100％甲醇淋洗和0.2-1％氨水甲醇洗脫后，洗脫液在25℃條件下揮干富集，用流動相復溶。
2、UPLC/MS測定方法本發明采用UPLC/MS法的分析條件色譜條件色譜柱AcquityUPLC BEH C18，2.1×100mm，流動相AWater-Acetonitrile-Formic acid 95∶5∶0.1v/v/v，流動相BAcetonitrile-Formic acid 100∶0.1v/v，按下列梯度洗脫


質譜條件電噴霧離子源(ESI)，采用負離子模式檢測；脫溶劑氣流量為440L/h，脫溶劑氣溫度為300℃，錐孔氣流量為50L/h，離子源溫度為100℃，噴霧毛細管電壓為3800V，取樣錐孔電壓為30V，萃取錐孔電壓為2.00V，透鏡電壓0.1V。質量掃描范圍m/z 150～800。
測定結果哺乳類灌服扶正化瘀植物藥后血漿中可測出丹參素和丹酚酸B(見圖1-2)
權利要求
1.扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，包括下列步驟(1)哺乳類血漿樣品預處理a.將哺乳類給予扶正化瘀制劑后的含藥血漿，加入加2-5mol/L磷酸混勻后，血漿與磷酸之間的體積比為1∶2-3，加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，經水及80-100％甲醇淋洗和0.2-1％氨水甲醇洗脫后，洗脫液在25-30℃條件下揮干富集，用流動相復溶。b.流動相復溶后用UPLC/MS法檢測色譜條件色譜柱Acquity UPLC BEH C18，2.1×100mm，流動相AWater-Acetonitrile-Formic acid 95∶5∶0.1 v/v/v，流動相BAcetonitrile-Formic acid 100∶0.1v/v；質譜條件電噴霧離子源(ESI)，采用負離子模式檢測，質量掃描范圍m/z 150～800。
2.根據權利要求1所述的扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，其特征在于所述步驟(2)負離子模式檢測，脫溶劑氣流量為440L/h，脫溶劑氣溫度為300℃，錐孔氣流量為50L/h，離子源溫度為100℃，噴霧毛細管電壓為3800V，取樣錐孔電壓為30V，萃取錐孔電壓為2.00V，透鏡電壓0.1V。
3.根據權利要求1所述的扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，其特征在于所述步驟(1)淋洗條件為第一步用水，第二步用80-100％甲醇，洗脫條件為0.2-1％氨水甲醇。
全文摘要
本發明公開了扶正化瘀植物藥血漿丹參素和丹酚酸B的測定方法，包括(1)哺乳類血漿樣品預處理方法，將含藥血漿加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，經淋洗和洗脫后，洗脫液揮干富集，用流動相復溶后用UPLC/MS法進行檢測，(2)UPLC/MS測定方法色譜條件色譜柱Acquity UPLC BEH C
文檔編號G01N30/88GK101078712SQ20071004013
公開日2007年11月28日 申請日期2007年4月27日 優先權日2007年4月27日
發明者馬越鳴, 王天明, 張永煜 申請人:上海現代中醫藥技術發展有限公司