專利名稱：抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種交叉配血卡及其應用。更具體的說，本發明涉及一種抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的組成、制備方法及其應用，涉及輸血醫學領域。
(二)
背景技術：
通過交叉配血試驗可發現ABO血型鑒定錯誤、亞型、血型不合、不規則抗體等，正確進行交叉配血試驗是安全輸血的基礎和保障。交叉配血試驗是指受血者(患者)在輸血前必須與供血者(待輸用血)進行交叉配血，即必須保證受血者血清中不存在與獻供血者紅細胞上抗原起反應并導致供血者紅細胞破壞的抗體。還要確保供血者血清中不存在與患者紅細胞上抗原起反應并導致受血者紅細胞破壞的抗體。目的是確保患者輸用了供血者的血液后能在患者體內有效的存活，避免因輸注不配合的血液成份所導致的不良溶血性輸血反應，來保障安全、有效輸血治療的目的。 國家衛生部于2000年發文要求，凡輸注全血、濃縮紅細胞、紅細胞懸液、洗滌紅細
胞、冰凍紅細胞、濃縮白細胞、手工分離濃縮血小板等的患者，應進行交叉配血試驗。 在國內外，已經有部分廠家生產交叉配血卡，但其采用的凝膠為葡聚糖凝膠，此凝
膠的顆粒大小為70納米以上，顆粒較大，凝膠之間的縫隙較大，從而使得進行交叉配血試
驗的靈敏度降低。
(三)
發明內容
本發明的目的在于克服上述不足，提供一種靈敏度高、特異性好且質量穩定的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的制備方法。 本發明的目的是這樣實現的一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個微柱凝膠管，所述6個微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠管，所述方法包括以下工藝過程步驟一、凝膠懸浮介質的配制所述凝膠懸浮介質配方如下
對羥基苯甲酸甲酯(5. 5-6. 5) X 10—Vml對羥基苯甲酸丙酯(1. 0-1. 5) X 10—Vml甘氨酸(1. 6-1. 9) X 10—Vml氯化鈉(1. 7-1. 8) X 10—Vml磷酸二氫鉀(2. 1-2. 4) X 10—Vml磷酸氫二鈉(4. 6—4. 8) X 10—4g/ml牛血清白蛋白《2%，以上試劑用蒸餾水溶解，調PH值為6. 6-6. 8。
步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米。用步驟一配制的凝膠懸浮介質浸泡后再用該凝膠懸浮介質洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收
集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的適用的凝膠。 步驟三、抗體的選擇 選擇抗人球蛋白試劑(抗IgG)， 抗IgG靈敏度要求按照體積比1 : 2和體積比1 : 4稀釋的IgG抗人球蛋白血清必須對照體積比l : 16稀釋的IgG致敏的紅細胞有肉眼可見凝集。
步驟四、凝膠的配制 將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2 : 1 6 : l的比例混合，配制成含有含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠。
步驟五、分裝 按照每管22 28微升的量，將步驟四配制的凝膠分別加入到一空白卡片的六個微柱管中，形成具有6個微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)。
本發明的有益效果是 本發明的第一個方面，提出了一種標準化的凝膠懸浮介質體系，用于凝膠的洗滌和懸浮，并可以長時間維持抗體以及凝膠的穩定，其特點在于 1、設計了具有很強緩沖能力的緩沖體系，采用磷酸鉀鹽、鈉鹽以及氨基酸組成的緩沖體系，使體系的PH值維持在6. 6-6. 8。與輸血領域通常采用的單一的枸櫞酸緩沖體系相比，具有緩沖能力更強的特點，有利于保持整個體系處于要求的緩沖范圍，同時保證了整個凝膠懸浮介質的離子強度。 2、具有更加有效的低鹽濃度體系，從其組成可以看出，本發明的凝膠懸浮介質采
用氨基酸和氯化鈉作為添加劑，輔助以微量的磷酸鹽來維持低離子強度環境，保持凝膠顆
粒呈圓球顆粒并充分溶脹，并維持凝膠顆粒的直徑大小在所要求的范圍內。 3、本發明具有獨特的潤滑體系，采用一定濃度的牛蛋白、對羥基苯甲酸甲酯及對
羥基苯甲酸丙酯，使得紅細胞通過凝膠間隙時獲得合適的潤滑能力，使無凝集的紅細胞具
有完全通過凝膠顆粒間隙的能力，而凝集的紅細胞則不能通過。 4、本發明具有優越的防腐體系，選擇有機物苯甲酸酯類作為防腐劑，采用對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯協同作用(各種對羥基苯甲酸單酯中的側面碳鏈長短的不同，因而其在穿透細胞膜的能力不同，并且其抑菌的作用位點也就不同，所以各種單酯針對不同種類微生物的抑制能力就不同。幾種酯的復合，具有更好的防腐能力。國內外大量的實際應用也證實了復合的對羥基苯甲酸酯比單一的對羥基苯甲酸酯的抑菌效果好)，有效防止細菌的繁衍，獲得較長時間的保存期，同時不僅避免使用疊氮鈉化學防腐劑對凝膠懸浮介質體系的離子強度提升從而對抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的靈敏度和特異性產生的不良影響，也避免使用抗生素類在保存過程中所代謝產生的中間體對抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的特異性產生的不良影響。 本發明的另一方面，為了保證本發明抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的質量，在制備過程中還需要對凝膠進行篩選，即，首先要選擇適當的凝膠，一般應該滿足的條件是選擇顆粒直徑為30-60納米，經過丙烯酰化后的葡聚糖凝膠。對篩選獲得的凝膠原料需要進行溶脹、洗滌、懸浮，目的是讓凝膠顆粒充分溶脹，洗滌去除破損的凝膠顆粒、聚集的凝膠顆粒、內徑在30-60納米以外的超大或超小凝膠顆粒以及凝膠以外的其它雜質成分。洗滌完成后用凝膠懸浮介質來懸浮凝膠。 本發明的再一方面，為了保證本發明抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的質量，在 制備過程中還需要對與凝膠混合的抗體原料進行篩選，其中抗人球蛋白試劑(抗IgG)為
最適稀釋度，即抗人球蛋白試劑(抗igG)經i : 2和i : 4稀釋后對i : ie稀釋的igG
性質抗D致敏的紅細胞有肉眼可見凝集。 綜上所述，本發明的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)之所以可以具有優良的特異 性、靈敏度以及長達1年的保存期，是在于整個體系各種成分的協同作用，緩沖體系可以維 持分型卡反應體系需要的PH ;低鹽濃度體系可以保證凝膠顆粒得到充分溶脹且凝膠顆粒 直徑在所需要的范圍內。潤滑體系可以保證凝膠顆粒之間適當的潤滑能力。酯類防腐劑可 以防止凝膠或抗體因為細菌繁殖而失效。丙烯酰化的凝膠可以保證凝膠顆粒之間的合適的 間隙。標準化的抗體可以保障抗原的有效檢出。 用此抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)檢測抗D、抗Jkb、抗Fya效價，測得效價均不 低于試管間接抗人球蛋白法。 一般在18-25t:條件下保存有效期不低于12個月。
總之，本發明的實施提供了標準化的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)產品，各 醫院和采供血機構可以直接從生產供應商處得到標準一致的抗人球蛋白交叉配血卡(抗 IgG)，為準確進行交叉配血試驗、保證安全輸血創造了條件。
具體實施例方式
以下通過具體實施例詳細說明本發明的實施和所具有的有益效果，旨在幫助閱讀 者更好的理解本發明的精神和實質，并不能對本發明的實施范圍構成任何限定。實施例1 :步驟一、凝膠懸浮介質的配制所述凝膠懸浮介質配方如下
對羥基苯甲酸甲酯(5. 5-6. 5) X 10—Vml對羥基苯甲酸丙酯(1. 0-1. 5) X 10—Vml甘氨酸(1. 6-1. 9) X 10—Vml氯化鈉(1. 7-1. 8) X 10—Vml磷酸二氫鉀(2. 1-2. 4) X 10—Vml磷酸氫二鈉(4. 6—4. 8) X 10—4g/ml牛血清白蛋白《2%，以上試劑用蒸餾水溶解，調PH值為6. 6-6. 8。
步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米。用步驟一配制的凝膠懸浮介質浸泡后再用該凝膠懸浮介質洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收
集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的適用的凝膠。 步驟三、抗體的選擇 抗人球蛋白試劑(抗IgG)為最適稀釋度，即
選擇抗人球蛋白試劑(抗IgG)， 抗IgG靈敏度要求按照體積比1 : 2和體積比1 : 4稀釋的IgG抗人球蛋白血
5清必須對照體積比i : 16稀釋的igG致敏的紅細胞有肉眼可見凝集。 步驟四、凝膠的配制 將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2 : 1 6 : l的比例混合， 配制成含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠。
步驟五、分裝 按照每管22 28微升的量，將步驟四配制的凝膠加入到一空白卡片的六個微柱 管中，形成具有6個微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)。
步驟六、半成品測定 要求微柱凝膠管中加入抗體后，與具有抗體相應抗原的紅細胞產生陽性反應，即 紅細胞集中在凝膠上層表面或凝膠中。而與不含有抗體對應抗原的紅細胞產生陰性反應， 即紅細胞可以全部通過凝膠到達微管底部，沉積在微管底部。
步驟七、封口 用鋁箔紙通過壓膜方式將微柱管上口密封。貼標簽標記后于18-25t:保存。
步驟八、保存試驗 上述抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)保存了 1年以上，在此保存期間，該抗人球 蛋白交叉配血卡(抗IgG)具有以下檢測結果
(1)外觀 微管內的抗人球蛋白凝膠應呈均勻綠色，膠面上端有1 2mm清澈透明的液體，凝
膠顆粒之間不應有氣泡和異物。
(2)靈敏度 用上述抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)檢測抗D、抗JP、抗Fya效價，測得效價均
不低于試管間接抗人球蛋白法。
(3)特異性 要求微柱凝膠管中加入抗體后，與具有抗體相應抗原的紅細胞產生陽性反應，即 紅細胞集中在凝膠上層表面或凝膠中。而與不含有抗體對應抗原的紅細胞產生陰性反應， 即紅細胞可以全部通過凝膠到達微管底部，沉積在微管底部。
實施例2: 1、在抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)上對于每位供血者標記2管，分別為主側和 次側管。 2、向主側管中加入來自供血者的懸浮在LISS溶液中的0. 8 1 %體積百分比的紅 細胞50iU，后加入25iU受血者的血清或血漿，混合均勻。 3、向次側管中加入受血者的懸浮在LISS溶液中的0. 8 1 %體積百分比的紅細胞 50 iU，后加入25 iU來自供血者的血清或血漿，混合均勻。
4、37t:孵育15分鐘。 5、于微柱凝膠卡專用離心機離心5分鐘，900rpm 2分鐘，1500rpm3分鐘，取出后肉
眼判定結果，記錄。 6、結果判定 6. 1如果主側管中的紅細胞浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應，即受血者血清/血 漿中的抗體與獻血者的紅細胞上的抗原為陽性反應，說明交叉配血主側不相合。獻血者的紅細胞不能輸用。 6. 2如果次側管中的紅細胞浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應，即獻血者血清/血 漿中的抗體與受血者的紅細胞上的抗原為陽性反應，說明交叉配血次側不相合。獻血者的 血漿不能輸用。 6. 3如果主側管的紅細胞沉于微柱凝膠的底部，呈陰性反應，表明獻血者的紅細胞 可以輸用。如果次側管的紅細胞沉降于微柱凝膠的底部，表明獻血者的血漿可以輸用。如 果主、次側管均陰性，表明獻血者的全血可以輸用。
權利要求
一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個微柱凝膠管，所述6個微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑的凝膠管，所述方法包括以下工藝過程步驟一、凝膠懸浮介質的配制所述凝膠懸浮介質配方如下對羥基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml對羥基苯甲酸丙酯(1.0-1.5)×10-4g/ml甘氨酸 (1.6-1.9)×10-2g/ml氯化鈉 (1.7-1.8)×10-3g/ml磷酸二氫鉀 (2.1-2.4)×10-4g/ml磷酸氫二鈉 (4.6-4.8)×10-4g/ml牛血清白蛋白≤2％，以上試劑用蒸餾水溶解，調pH值為6.6-6.8；步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米，用步驟一配制的凝膠懸浮介質浸泡后再用該凝膠懸浮介質洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的凝膠；步驟三、抗體的選擇選擇抗人球蛋白試劑，抗IgG靈敏度要求按照體積比1∶2和體積比1∶4稀釋的IgG抗人球蛋白血清對照體積比1∶16稀釋的IgG致敏的紅細胞有肉眼可見凝集；步驟四、凝膠的配制將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2∶1～6∶1的比例混合，配制成含有含有抗人球蛋白試劑的凝膠。步驟五、分裝按照每管22～28微升的量，將步驟四配制的凝膠分別加入到一空白卡片的六個微柱管中，形成具有6個微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡。
全文摘要
本發明涉及一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個微柱凝膠管，所述6個微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑的凝膠管，所述方法包括以下工藝過程凝膠懸浮介質的配制、凝膠的制備、抗體的選擇、凝膠的配制和分裝。所述凝膠懸浮介質配方如下對羥基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml，對羥基苯甲酸丙酯1.0-1.5)×10-4g/ml，甘氨酸(1.6-1.9)×10-2g/ml，氯化鈉(1.7-1.8)×10-3g/ml，磷酸二氫鉀(2.1-2.4)×10-4g/ml，磷酸氫二鈉(4.6-4.8)×10-4g/ml，牛血清白蛋白≤2％，以上試劑用蒸餾水溶解，調pH值為6.6-6.8。本發明方法制備的抗人球蛋白交叉配血卡靈敏度高，特異性好且質量穩定。
文檔編號G01N33/80GK101718786SQ20091023461
公開日2010年6月2日 申請日期2009年11月25日 優先權日2009年11月25日
發明者朱慶平, 錢國強, 陳玉平 申請人:江陰力博醫藥生物技術有限公司
專業數控銑床產品供應商
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