專利名稱：檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測抗體的免疫膠體金試劑，還涉及該試劑的制備方法。
背景技術：
現有用于檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附、放射免疫試驗、免疫膠體金滲濾法、免疫印跡試驗(WBA)等。酶聯(lián)免疫吸附(EIA)方法的缺陷是需要專門的儀器設備如酶標儀來配合使用；檢測操作人員需要經過專業(yè)培訓；操作過程相對比較復雜，檢測所需時間比較長；檢測所需費用較高，不能實現單人份檢測。免疫膠體金滲濾法的缺陷是操作過程相對比較復雜，不能實現一步操作；試劑需要低溫保存；檢測所需費用較高；檢測所需時間比膠體金免疫層析法要長。放射免疫試驗的缺陷是操作人員需要經過專業(yè)培訓；操作過程復雜，要求高；試劑需要低溫保存；由于試驗涉及到放射性同位素，試驗不是很安全，所以很少采用；檢測費用較高；檢測所需時間長。免疫印跡試驗(WBA)的缺陷是操作人員需要經過專業(yè)培訓；操作過程復雜，要求高；試劑需要低溫保存；目前尚無商品化的HSV血清抗體的蛋白印跡檢測試劑盒面世，這種方法僅限于某些專業(yè)實驗室中進行；檢測費用高；檢測所需時間長。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為了克服當前技術在推廣使用中存在的缺陷，提供一種不需要特定儀器設備輔助的檢測試劑，并且能有效地降低檢測成本，減輕需檢測人員的負擔。同時提供該試劑的制備方法。
檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑及制備方法，該試劑包括結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯，PVC背襯一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間粘附硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。結合墊上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物。硝酸纖維素膜上包被了單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(或羊抗兔IgG)，具體由標記用的是蛋白A還是兔抗人IgG來決定。如果用蛋白A來標記膠體金，則用雞抗蛋白A來作為控制線；如果用兔抗人IgG來標記膠體金，則用羊抗兔IgG來作為控制線。
該試劑的制備方法包括以下步驟(1)制備兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，純化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接購買)；(2)制備多克隆抗體用單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，純化后得羊抗兔IgG；(3)制備膠體金用檸檬酸三鈉等還原劑將氯金酸還原成20nm～40nm的膠體金顆粒；(4)制備單克隆抗體膠體金標記將膠體金與蛋白A(或兔抗人IgG)按1∶0.005～0.015(ml/mg)比例混勻，使膠體金與蛋白A(或兔抗人IgG)形成穩(wěn)定的膠體顆粒，通過純化濃縮形成蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物；(4)將蛋白A(或兔抗人IgG)膠體金標記物包被在膠體金結合墊上，將抗單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(羊抗兔IgG)包被在硝酸纖維素膜的檢測區(qū)和控制區(qū)，充分干燥。
本發(fā)明的積極效果在于價格低廉，生產流程簡單，成本低，檢測的費用比使用其它檢測方法都要便宜得多；檢測速度快，全過程只需30分鐘，可以實現自我檢測；可以現場檢測；特異性好、靈敏度高、重復性好；操作簡便，快速定性，結果準確、快速，操作簡便，無需沖洗過程和標準對照，可分批或單個樣品及時檢測；易于推廣使用，操作人員無需專業(yè)培訓，按說明書即可完成操作。
具體實施例方式
將PVC背襯一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間粘附硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。結合墊上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物。硝酸纖維素膜上包被了單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(或羊抗兔IgG)，具體由標記用的是蛋白A還是兔抗人IgG來決定。如果用蛋白A來標記膠體金，則用雞抗蛋白A來作為控制線；如果用兔抗人IgG來標記膠體金，則用羊抗兔IgG來作為控制線。
按以下步驟制備(1)制備兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，純化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接購買)；(2)制備多克隆抗體用單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，純化后得羊抗兔IgG；(3)制備膠體金將100ml 0.01％氯化金用0.9ml 1％檸檬酸三鈉還原成40nm大小的顆粒；(4)制備蛋白A--膠體金標記物用0.1mol/LK2CO3將膠體金溶液的pH值調至6.5左右，將膠體金溶液與單克隆抗體按100ml膠體金溶液中加入0.8mg蛋白A的比例混合均勻，使膠體金與抗體形成穩(wěn)定的膠體金復合物，再通過多次離心、棄上清、清洗，通過純化濃縮形成兔抗人IgG—膠體金標記物，冷藏備用；(5)用Biodot點膜機將蛋白A膠體金標記物噴涂在膠體金結合墊上，將抗單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A噴涂在硝酸纖維素膜的檢測區(qū)和控制區(qū)，充分干燥；(6)將硝酸纖維素膜、膠體金結合墊、樣品墊、吸水墊等依次粘在PVC背襯上；(7)將粘好的PVC材料切成一定寬度的試劑條，即制成檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑。
在檢測前先將樣本和試劑條(板)放在室溫條件下放置一段時間(10分鐘)，使其恢復至室溫；從鋁箔袋中取出檢測試劑條，按MARK線下箭頭所示的方向將試劑條浸入樣本溶液中，液面不得超過MARK線，5秒～8秒后取出，平放在操作臺上；如果是試劑板從鋁箔袋中取出檢測試劑板，平放在操作臺上，往加樣孔中滴加3滴(約120ul)樣品溶液(血清)；3分鐘～15分鐘內即可判斷結果，30分鐘后判斷的結果為無效。結果判斷如果樣品中有要檢測的“單純皰疹病毒I型抗體IgG”存在，則檢測線處出現紅色條帶，同時質控線上也出現紅色條帶，此時結果為陽性；如果樣品中沒有要檢測的“單純皰疹病毒I型抗體IgG”存在，則檢測線處無條帶出現，但質控線上出現紅色條帶，此時結果為陰性。如果質控線上沒有紅色條帶出現，則產品無效。
權利要求
1.檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑及制備方法，該試劑包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯，PVC背襯一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間粘附硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊，其特征在于結合墊上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物，硝酸纖維素膜上包被了單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(或羊抗兔IgG)。
2.根據權利要求1所述的檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑及制備方法，其特征在于該試劑的制備方法包括以下步驟(1)制備兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，純化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接購買)；(2)制備多克隆抗體用單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，純化后得羊抗兔IgG；(3)制備膠體金用檸檬酸三鈉等還原劑將氯金酸還原成20nm～40nm的膠體金顆粒；(4)制備單克隆抗體膠體金標記將膠體金與蛋白A(或兔抗人IgG)按1∶0.005～0.015(ml/mg)比例混勻，使膠體金與蛋白A(或兔抗人IgG)形成穩(wěn)定的膠體顆粒，通過純化濃縮形成蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物；(4)將蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物包被在膠體金結合墊上，將抗單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(羊抗兔IgG)包被在硝酸纖維素膜的檢測區(qū)和控制區(qū)，充分干燥。
全文摘要
檢測單純皰疹病毒I型抗體IgG的免疫膠體金試劑及制備方法，該試劑包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯，PVC背襯一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間粘附硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。結合墊上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—膠體金標記物。硝酸纖維素膜上包被了單純皰疹病毒I型特異性表面膜抗原和雞抗蛋白A(或羊抗兔IgG)。該試劑是一種特異性強、敏感性高、簡易快速、費用低廉、能現場檢測，全過程只需30分鐘，操作人員無需專業(yè)培訓，按說明書即可完成操作。
文檔編號G01N33/569GK1431506SQ0311513
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月24日 優(yōu)先權日2003年1月24日
發(fā)明者張少恩 申請人:湖州瑞澤生物技術有限公司
專業(yè)數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
