專利名稱：涼粉草藥材指紋圖譜的建立及其指紋圖譜的制作方法
技術領域：
本發明涉及中藥藥材的質量控制方法，具體涉及涼粉草藥材高效液相色譜法指紋圖譜的構建方法和標準指紋圖譜。
背景技術：
涼粉草(Mesonei Blume)又名仙人草、仙草、仙人凍、薪草，為唇形科仙草屬一年生草本植物，目前中國有 3 種，分別為i/· chinensisBenth，Μ. paruifsota (Benth)Brea, Μ. procum-bens Hemsl，分布于我國的廣東、福建、廣西、江西、海南、浙江、臺灣和云南等地，其他國家如印度、印度尼西亞、馬來西亞也有分布。涼粉草可入藥，據《本草求原》記載，涼粉草清暑熱，解藏府結熱毒，治酒風。可治中暑、關節炎、高血壓、糖尿病、急性傳染性肝炎、痢疾、腹瀉、結合膜炎等癥。涼粉草也可作為食品工業的原材料，如涼粉草的莖、葉加水煎汁可制成涼粉凍，以涼粉草為原料制成各種飲料，還可從涼粉草中提取涼粉草膠、綠色素等。總之，涼粉草的應用極為廣泛。然而，在涼粉草藥材質量控制方面，目前為止沒有一種能全面表征涼粉草藥材質量的方法。因此，為了使涼粉草能夠進一步的得到充分利用，規范涼粉草藥材的質量標準， 保證涼粉草藥材的質量，解決涼粉草藥材質量參差不齊的問題，對涼粉草藥材的質量控制方法有待于開發建立。
發明內容
本發明的目的為涼粉草藥材的質量控制和真偽鑒別提供一個新的方法，通過建立涼粉草藥材指紋圖譜的方法，并由此方法得到涼粉草藥材共有模式的指紋圖譜。為達到本發明的目的所采用的技術方案用高效液相色譜法建立涼粉草藥材指紋圖譜的方法，具體包括如下步驟
①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；
③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；紫外檢測波長為300 360nm ；
④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。進一步優選的方法可以通過下述步驟實施
①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉(二號篩)1.0 5. Og,置于100 500mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 250mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；
③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為 1. 0% 3. 0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；柱溫20 40°C ；紫外檢測波長為300 360nm ；流速0. 5 1. 2mL · mirT1 ；時間90min 120min ；
④、測定精密吸取供試品溶液10 20μ L注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。本發明最佳的檢測方法可以通過下述步驟實施
步驟②供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉(二號篩)l.og，置于IOOmL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液適量，以0. 22 μ m微孔濾膜濾過， 即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相為1甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫25°C ；檢測波長為320nm ；流速為0. SmL · mirT1 ；分析時間為 95min。在步驟③中，所述的梯度洗脫，優選梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行 0分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的21的甲酸溶液；
18分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 25分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 60分鐘時，流動相A為24%的乙腈溶液、流動相B為76%的m的甲酸溶液； 65分鐘時，流動相A為34%的乙腈溶液、流動相B為66%的m的甲酸溶液； 80分鐘時，流動相A為45%的乙腈溶液、流動相B為55%的m的甲酸溶液； 90分鐘時，流動相A為60%的乙腈溶液、流動相B為40%的m的甲酸溶液； 95分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的m的甲酸溶液。具體見下表
權利要求
1.一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為300 360nm ；④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。
2.根據權利要求1所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟②供試品溶液的制備，采用精密稱取涼粉草藥材粗粉1. 0 5. Og,置于100 500mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 250mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；所述步驟③色譜條件，采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為1. 0% 3. 0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液；柱溫20 40°C ；紫外檢測波長為 300 360nm ；流速0. 5 1. 2mL · mirT1 ；時間90min 120min ；所述步驟④測定，采用精密吸取供試品溶液10 20 μ L注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。
3.根據權利要求1所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟②供試品溶液的制備，采用精密稱取涼粉草藥材粗粉1. 0g，置于IOOmL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱定重量，于100°C水浴中回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液適量，以0. 22 μ m微孔濾膜濾過， 即得供試品溶液；所述步驟③色譜條件中流動相為2、甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫25°C ；檢測波長為320nm ；流速為0. 8mL · mirT1 ；分析時間為95min。
4.根據權利要求2或3所述的一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于 所述步驟③色譜條件中所述的梯度洗脫，梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行 0分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的21的甲酸溶液；18分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 25分鐘時，流動相A為16. 5%的乙腈溶液、流動相B為83. 5%的m的甲酸溶液； 60分鐘時，流動相A為24%的乙腈溶液、流動相B為76%的m的甲酸溶液； 65分鐘時，流動相A為34%的乙腈溶液、流動相B為66%的m的甲酸溶液； 80分鐘時，流動相A為45%的乙腈溶液、流動相B為55%的m的甲酸溶液； 90分鐘時，流動相A為60%的乙腈溶液、流動相B為40%的m的甲酸溶液； 95分鐘時，流動相A為10%的乙腈溶液、流動相B為90%的m的甲酸溶液。
5.一種涼粉草藥材的指紋圖譜，其特征在于涼粉草藥材指的紋圖譜的建立，具體包括如下步驟①、對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品，用甲醇配制成每ImL含咖啡酸0.2 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；②、供試品溶液的制備精密稱取涼粉草藥材粗粉，加入50%乙醇回流提取，濾過，取續濾液適量濾膜濾過，即得供試品溶液；③、色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為300 360nm ；④、測定精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜；所述指紋圖譜中有10個特征共有峰，其中1號色譜峰為咖啡酸參照峰，最強峰為7號色譜峰，圖譜總長度為90min，具體如下1號峰，平均保留時間RT為15. 58min，RSD為0. 03%,峰面積為448. 251，RSD為57. 12% ； 2號峰，平均保留時間RT為27. 63min, RSD為0. 03%,峰面積為968. 365，RSD為41. 74% ； 3號峰，平均保留時間RT為29. 27min, RSD為0. 03%,峰面積為209. 201，RSD為44. 44% ； 4號峰，平均保留時間RT為34. 67min，RSD為0. 03%,峰面積為831. 631，RSD為67. 58% ； 5號峰，平均保留時間RT為38. 77min，RSD為0. 02%,峰面積為551. 551，RSD為40. 45% ； 6號峰，平均保留時間RT為43. 75min, RSD為0. 03%,峰面積為1946. 438，RSD為 40. 97% ；7號峰，平均保留時間RT為48. 02min, RSD為0. 02%,峰面積為2觀3. 524，RSD為 57. 81% ；8號峰，平均保留時間RT為51. 03min,RSD為0. 02%,峰面積為637. 764，RSD為41. 03% ； 9號峰，平均保留時間RT為58. 26min，RSD為0. 02%,峰面積為815. 393，RSD為41. 34% ； 10號峰，平均保留時間RT為69. 94min，RSD為0. 00%，峰面積為307. 076，RSD為46. 52%。
全文摘要
本發明公開了一種涼粉草藥材指紋圖譜的建立及其指紋圖譜，涉及中藥藥材的質量控制方法，具體是建立HPLC指紋圖譜以檢測涼粉草藥材提取液的方法。本發明步驟為，先對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為1.0%～3.0%甲酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫20～40℃，紫外檢測波長為300～360nm，時間90min～120min；高效液相色譜法測得指紋圖譜。本發明的有益效果能有效表征涼粉草藥材的質量，有利于監控藥材的質量；具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好；可快速、準確地鑒別藥材的真偽優劣。
文檔編號G01N30/14GK102269748SQ20111009452
公開日2011年12月7日 申請日期2011年4月15日 優先權日2011年4月15日
發明者丁婕, 賴小平, 黃松 申請人:東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
