專利名稱：：分析用保持體及其利用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及分析用保持體、保持有分析對象的保持體、質譜分析方法和氨基酸序列的分析方法。
背景技術：
：在蛋白質、肽、多糖類等高分子化合物、有機化合物的解析中，激光解吸電離(LDI)、基質輔助激光解吸電離(MALDI)及利用該電離的飛行時間質譜分析(TOFMS)等質譜分析法成為有用的手段。在這些電離方法、例如MALDI中，通常在樣品載玻片上放置芥子酸等基質與蛋白質的混合物，對該混合物進行激光照射，由此使蛋白質電離。在這樣的電離工序中所用的樣品板使用導電性的不銹鋼等金屬制板以便用于其后的質譜分析工序。此外，利用電泳或者噴墨等印刷方法將二維排列的分子印跡(bbt)在透液性的保持體上，用導電性雙面膠帶等將該保持體貼覆在金屬制樣品板上或以其它方式置于金屬制樣品板上(例如，日本特開2005-83784)。
發明內容質譜分析中，大多對分析對象進行化學修飾等，但金屬制板對這樣的化學修飾不具有耐受性，需要另外進行化學修飾后將修飾物轉移到金屬制樣品板上。并且，上述現有的保持體其自身均不具有導電性，因此即使將其貼覆在(或以其他方式置于)金屬制板上也難以實現良好的電離。進而，由于需要貼在金屬制板上，所以不得不使用薄膜狀的保持體，導致操作困難。因此，本發明的一個目的是提供一種分析對象的保持體，其適于LDI和MALDI等中的電離。并且，本發明的另一目的是提供一種質譜分析法，其能簡化分析對象的化學修飾等。并且，本發明另一目的是提供一種蛋白質或肽的分析方法，其能簡化用于序列分析的化學修飾操作。本發明人為了解決上述課題進行了深入研究，結果發現通過將具有非金屬性基質的導電性材料用作電離時所用的固相保持體，可以解決至少一個上述課題，從而完成了本發明。即，根據本發明，提供以下方案。本發明人研究出以下方案用于解決至少一個上述課題。(1)一種分析用保持體，其用于保持分析對象，該保持體為具有非金屬性基質的導電性材料。(2)如(l)所述的保持體，其中，所述導電性材料為導電性高分子材料。(3)如(2)所述的保持體，其中，所述導電性高分子材料為導電性材料分散保持在有機高分子基質中而成的復合導電性高分子材料。(4)如(l)所述的保持體，其中，所述導電性材料為導電性陶瓷材料。(5)如(4)所述的保持體，其中，所述導電性陶瓷材料為具有表面處理層的石墨材料，所述表面處理層是利用玻璃態碳或熱分解碳形成的。(6)如(1)(5)任一項所述的保持體，其中，所述保持體對選自由乙酸、三氟乙酸和乙酸酐組成的組中的酸具有耐蝕性。(7)如(1)(6)任一項所述的保持體，其中，所述保持體是透液性的或非透液性的。(8)如(1)(7)任一項所述的保持體，其中，所述保持體為膜狀、板狀和微量滴定板(microtiterplate)狀中的任一形狀。(9)如(1)(8)任一項所述的保持體，其中，所述保持體以選自多核苷酸、寡聚核苷酸、蛋白質、肽、糖蛋白質和多糖類中的1種或2種以上的分子或這些物質的衍生物為分析對象。(10)如(1)(9)任一項所述的保持體，其中，該保持體為質譜分析用的樣品板或其一部分。(11)如(10)所述的保持體，其中，該保持體用于基質輔助激光解吸電離質譜分析。(12)如(ll)所述的保持體，其中，該保持體用于飛行時間質譜分析。(13)如(1)(12)任一項所述的保持體，其中，該保持體對埃德曼反應具有耐蝕性。(14)如(13)所述的保持體，其中，該保持體用于保持在保持體上進行的埃德曼反應或者其類似反應的反應產物(product)和反應中間體(intermediateproduct)。(15)如(1)(14)任一項所述的保持體，其中，該保持體用于氨基酸序列分析。(16)—種保持體，其為用于保持分析對象的分析用保持體，該保持體為具有非金屬性基質的導電性材料，并對埃德曼反應具有耐蝕性，同時可以保持埃德曼反應產生的埃德曼反應生成物(by-product)。(17)—種保持體，其保持有1種或2種以上的分析對象，所述保持體含有分散保持在非金屬制基質中的導電性高分子材料。(18)如(17)所述的保持體，其中，該保持體中排列有2個以上的分析用區域，該分析用區域保持所述1種或2種以上的分析對象。(19)如(18)所述的保持體，其中，所述分析用區域各自具有固有的位置{曰息。(20)如(17)(19)任一項所述的保持體，其中，所述分析對象選自氨基酸、肽和蛋白質。(21)如(17)(20)任一項所述的保持體，其中，在所述分析用區域保持有N末端氨基酸殘基不同的蛋白質或肽。(22)如(17)(20)任一項所述的保持體，其中，在所述分析用區域保持有埃德曼反應或者其類似反應的反應產物和反應中間體。(23)如(17)(22)任一項所述的保持體，其中，通過電泳或液相色譜法將所述分析對象供給至所述保持體進行保持。(24)—種質譜分析方法，其具有使用分析對象的保持體的激光解吸電離工序，所述分析對象的保持體為具有非金屬制基質的導電性材料。(25)如(24)所述的方法，其中，所述激光解吸電離工序為基質輔助激光電離工序。(26)如(24)或(25)所述的方法，該方法具有飛行時間質譜分析工序。(27)如(24)(26)任一項所述的方法，其中，所述電離工序為使用(17)(23)任一項所述的分析對象的保持體的工序。(28)—種方法，其為蛋白質或肽的分析方法，該方法具有如下工序(a)將蛋白質或肽供給至保持體上進行保持的工序，該保持體為具有非金屬制基質的導電性材料；(b)對上述保持體上的蛋白質或肽的部分末端氨基酸殘基進行化學修飾，同時進行切斷的工序；和(c)對上述保持體上的由上述(b)工序得到的末端氨基酸殘基發生欠缺的片斷和在上述(b)工序中并未被切斷的上述蛋白質或肽進行質譜分析的工序。(29)如(27)所述的方法，其中，所述(b)工序為利用埃德曼反應或其類似反應來進行的工序。(30)如(28咸(29)所述的方法，其中，對所述蛋白質或肽的N末端氨基酸殘基依次反復實施適當次數的所述(b)工序和所述(c)工序。(31)如(28)(30)任一項所述的方法，其中，所述保持工序是將通過電泳分離的或通過液相色譜法洗脫的蛋白質或肽供給至所述保持體進行保持的工序。具體實施方式本發明的分析用保持體的特征在于，該保持體由具有非金屬制基質的導電性材料形成。根據本發明，由于保持體由這樣的導電性材料構成，因而其作為在需要向保持體施加電壓以進行樣品的供給、保持或分析時的保持體是有用的。例如，本發明的分析用保持體可以替代MALDI-TOFMS等質譜分析用的金屬制樣品板或者用作其一部分。此外，由于本發明的分析用保持體由具有非金屬制基質的導電性材料形成，因而與金屬制的保持體相比，本發明的分析用保持體可以容易地提高耐蝕性。因此，在保持體上可以容易地實施用于對分析對象進行修飾的各種化學反應。因此，本發明可以消除以往在進行質譜分析之前要另外進行將修飾反應的產物涂布在質譜分析用的樣品板上的操作之類的麻煩，可以在同一保持體上實施修飾反應和分析工序。在作為本發明其他實施方式的質譜分析方法和蛋白質或肽的分析方法中，也以具有本發明的分析用保持體或使用本發明的分析用保持體為特征，由此可以提供與該實施方式對應的優點。下面對本發明的分析用保持體進行說明，同時依次對作為本發明的其他實施方式的質譜分析方法和肽分析方法進行說明。(分析用保持體)對于本發明的分析用保持體(以下簡稱為"保持體")中所用的導電性高分子材料，其形態并無限定，可以采用與分析目的等相對應的形態。例如可以是珠粒狀、基板等板狀、膜狀、具有形成為1個或2個以上的分析對象區域的孔(well)等的凹部或隔壁的微量滴定板狀。例如，在應用于蛋白質測序儀和質譜分析或熒光分析等時，優選板狀、膜狀、微量滴定板狀等。另外，此處所說的板狀的保持體是指作為整體具有容易處理的程度的剛性的保持體。作為所謂的基板，優選具有目前使用的程度的剛性。將保持體制為板狀時，其可以單獨用作樣品板。另外，膜狀保持體是指其自身具有難以維持恒定的三維形態的程度的撓性或柔軟性的保持體。對于這樣的膜狀保持體，既可以將其與由具有非金屬制基質的導電性材料形成的板的表面一體化來使用，也可以將其與不銹鋼、鋁、鈦等具有導電性的金屬板的表面一體化來使用。此外，在將其與板進行一體化的情況中，優選利用膜原有的粘合性進行一體化，但也可以使用含有導電性材料的膠帶材料(^一7'材)或粘結劑等。此外，保持體既可以為具有多孔性等透液性的物體，也可以為通過致密材質或者通過具有防液性等而成為非透液性的物體，優選為非透液性的物體。保持體為透液性時，分析對象被保持在保持體內部，具有電離效率降低且質譜分析的精度降低的傾向。更優選通過使材料為致密材質而成為非透液性的保持體。對保持體所具有的導電性沒有特別限定。例如，用于TOFMS時，可以使用厚度方向的體積電阻率(Qcm)為210000的支持體。該體積電阻率可以基于例如JISK7194迸行測定。此外，通過使保持體為具有非金屬制基質的導電性材料，其自身可以作為質譜分析、特別是LDI-TOFMS或MALDI-TOFMS的樣品板。并且，由于該保持體不會阻礙利用MALDI進行的電離工序，因而可以認為導電性材料是適于MALDI的保持體。此外，保持體優選具有耐蝕性。作為針對具有耐蝕性所優選的酸，可舉出硫酸、鹽酸、硝酸等無機酸以及乙酸、三氟乙酸等鹵化有機酸、有機磺酸等有機酸。其中，考慮到肽和蛋白質的解析，優選對蛋白質和肽的修飾反應中通常使用的有機酸具有耐蝕性。該有機酸的典型例子可舉出以埃德曼反應切斷N末端氨基酸時所用的乙酸、三氟乙酸等鹵化有機酸和乙酸酐等有機酸酐，優選所述保持體對這樣的酸具有耐蝕性。另外，保持體優選對甲醇和乙腈等具有耐蝕性。作為具有非金屬制基質的導電性材料，可舉出導電性高分子材料。作為導電性高分子材料，例如可舉出取代的或未取代的聚乙炔、二乙炔聚合物、取代的或未取代的聚吡咯、取代的或未取代的聚噻吩、聚苯胺等實質上為導電性塑料的材料，此外還可舉出在塑料或硅酮等高分子材料中分散復合有金屬粉末或纖維、或者炭黑或石墨的粉末或纖維等導電性材料的復合導電性高分子材料。本發明中，從耐蝕性的角度出發，優選使用聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯等。導電性高分子材料可以具有對保持分析對象有利的官能團。這樣的官能團既可以在高分子材料合成時預先在單體等中具有，也可以在合成后通過對保持體的表面進行后修飾而導入這樣的官能團。例如，可舉出導入氨基、羧基、環氧基、甲?；?、羥基、碳二亞胺基、活性酯基。例如對于為保持DNA和RNA等核酸而優選的官能團，可舉出N-羥基琥珀酰亞胺基、碳二亞胺基、環氧基、甲?；?，對于為保持肽而優選的官能團，可舉出N-羥基琥珀酰亞胺基、碳二亞胺基、環氧基、甲酰基、金屬螯合物。此外，作為其他導電性材料，可舉出導電性陶瓷材料。例如，可舉出碳化硅(SiC)、石墨等非氧化物系陶瓷。另外，還可以舉出在絕緣性陶瓷的基質中混合有金屬或導電性陶瓷材料的顆粒而成的復合導電性陶瓷材料等。優選的導電性陶瓷材料為石墨，更優選為在其表面具有利用玻璃態碳或熱分解碳形成的表面處理層的石墨。利用這樣的石墨，可以制成如下的樣品板來使用，其不僅能夠抑制石墨的脫離并同時具有優異的導電性，而且還具有優異的耐溶劑性和反復使用性。其中，具有利用熱分解碳形成的表面處理層的石墨可以進一步抑制碳顆粒的脫落，同時具有針對乙腈等溶劑的優異的耐溶劑性、針對酸和堿性等的耐腐蝕性并具有強度、反復使用性等，因而是更優選的。這些具有表面處理層的石墨材料均可以單獨構成適于MALDI的樣品板，而不用貼覆在金屬制板上。作為具有利用玻璃態碳形成的表面處理層的石墨，可優選使用將玻璃態碳浸滲到石墨表面和內部的材料。浸滲深度例如優選為lmm以上，更優選為10mm以下。作為這樣的石墨材料，可以以例如VGI(揖斐電株式會社的石墨制品)的形式得到。另外，作為具有利用熱分解碳形成的表面處理層的石墨，可以使用具有通過碳的化學蒸鍍形成的覆膜的石墨。優選石墨為各向同性石墨。作為這樣的石墨材料，例如可以以Pyrocarb(揖斐電株式會社的石墨制品)的形式獲得。這樣的保持體具有必要的耐蝕性，因此可以在保持體上進行以埃德曼反應為首的用于對分析對象進行制備或修飾的反應，同時具有借助非共價鍵性的結合來對蛋白質、肽和氨基酸或者它們的衍生物進行保持的傾向。因此，本發明的保持體可以使蛋白質和氨基酸或者它們的衍生物在其上生成并保持在保持體上直接供于質譜分析等。由以上可知，本發明的保持體可以成為用于LDI或MALDI質譜分析的保持體，此外還可以用作含有利用埃德曼反應或者其類似反應進行氨基酸序列分析的裝置中所用的分析對象保持體的蛋白質和肽的化學修飾用保持體。進而，其結果是，本發明的保持體可以用作在該保持體上實施埃德曼反應等化學反應并將反應產物保持在該保持體上直接用于質譜分析的保持體，特別是在實施對樣品板施加電壓的方式的質譜分析工序的質譜分析方法中可以用作樣品板或者其一部分。即，可以在實施分析對象的合成、提取、或者對分析對象進行修飾等的化學反應后，直接使用同一保持體進行質譜分析，而無需將分析對象轉移至質譜分析用的樣品板。因此，通過這樣使用本發明的保持體，可以不必像以往那樣在對質譜分析的分析對象進行了各種反應后將反應產物轉移到金屬制的樣品板上，并且不必像以往那樣將保持有反應產物的膜貼覆在金屬制樣品板上。(分析對象)作為保持在保持體上的分析對象，沒有特別限制，可舉出DNA或RNA、DNA/RNA嵌合體、DNA/RNA雜合體等形態的多核苷酸和寡聚核苷酸、肽、蛋白質、多糖類、糖蛋白質、脂質、PNA(肽核酸)等。為了進行分析，可以對這樣的生物高分子實施化學修飾進行衍生物化。并且，作為分析對象，除這樣的生物高分子外，還可舉出天然或人工的有機化合物。這樣的分析對象包含在細胞或菌體提取物、發酵產物、無細胞提取物、PCR產物、人工的合成產物、蛋白質的酶處理物等中。并且，由于本發明的保持體適用于質譜分析，因而本發明中的分析對象優選為可通過質譜分析特別是MALDI進行分析的化合物或適于通過質譜分析特別是MALDI進行分析的化合物。'(分析方法)本發明的分析方法的特征在于，其使用保持有分析對象的保持體。即，該方法的特征在于，首先制作保持有分析對象的保持體，其后對該保持體實施各種分析方法，從而得到分析結果。以下，首先對保持有分析對象的保持體及其制作工序進行說明。(保持有分析對象的保持體)分析對象在保持體上的保持是指至少直至對保持體上的分析對象迸行分析時為止都保持在一定位置上。因此，即使處于分析后的分析對象能夠通過清洗等容易地從保持體上除去的程度的固定狀態，也可以認為該分析對象保持于保持體上。分析對象的保持形態沒有特別限定。例如，既可以是通過離子鍵、氫鍵、靜電相互作用、疏水性相互作用、螯合等非共價鍵性的結合進行保持，也可以通過共價鍵進行保持。并且也可以是這些化學鍵合以外的保持形態，即使是分析對象僅存在于保持體表面上的凹部的情況下，只要是直到進行分析時為止分析對象都被保持在該凹部，就可以認為保持有該分析對象。對于固定形態，根據分析對象的種類和保持體的材料或表面修飾等可以有各種形態，但考慮到質譜分析中的電離，優選為非共價鍵性的結合。分析對象可以直接保持于保持體的表面，也可以例如隔著直接保持于保持體表面上的間隔物間接地保持于保持體。例如，可以預先在保持體上保持有抗體或抗原，然后對該保持體供給抗原或抗體進行抗原抗體反應，由此以抗原-抗體配合物的形態在保持體上保持作為分析對象的抗體或抗原。并且，可以通過核苷酸鏈間的配對堿基間的氫鍵形成配合物(雜交)來保持作為分析對象的寡聚核苷酸或核酸等可雜交的化合物。此時，預先使保持體保持具有一定核苷酸序列的核酸等。利用這樣的抗原-抗體間的特異的相互作用、受體-配體相互作用、雜交等的蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白質-核酸相互作用和其他各種相互作用；預先保持在保持體上的間隔物與分析對象之間的氫鍵、親水性相互作用、疏水性相互作用、靜電相互作用、以及螯合作用等，將分析對象保持在保持體上。此外，根據需要可以對分析對象進行化學修飾。化學修飾的種類沒有特別限制。如后面詳細敘述的那樣，例如對于蛋白質，可以將基于埃德曼法的反應產物作為分析對象進行保持。對于保持有具有某種一致的1種或2種以上的分析對象的保持體上的區域(位點(spot)等)來說，由于含有分析對象，因而可以直接構成用于分析的單元(cdl)。即，在保持體上可以具有1個或2個以上保持有1種或2種以上的分析對象的分析用單元。此外，所謂單元是指保持有1種或2種以上的分析對象的區域，其是成為分析方法的測定對象的區域。具有2種以上的分析用單元的情況下，優選對這些分析用單元進行配置，更優選與各自固有的位置信息具有關聯。即，優選各分析用單元在保持體上的位置是特定的。由于分析用的單元與固有的位置信息具有關聯且其位置是特定的，因而可以簡化分析工序，同時可以簡化分析工序后的解析，其結果，可以在保持體上保持有大量分析用單元時進行高速化分析。例如，利用MALDI分析時，依次對排列于保持體上的分析用單元照射激光，使單元中含有的分析對象解吸/電離，由此可以容易且迅速地對大量的分析用單元進行解析。(保持有分析對象的保持體的制作)將分析對象直接保持于保持體上時，首先將分析對象供給于保持體上。分析對象既可以在保持體上合成，也可以將預先制備的分析對象供給于保持體上。作為在保持體上直接合成分析對象的情況，可以舉出利用無細胞蛋白質合成系合成蛋白質的情況、在保持體上合成寡聚核苷酸的情況。另外，將分析對象供給于保持體上時，可以使用例如噴墨法和別針法(pinmethod)等。此外，可以利用電泳或層析法等分離方法將含有分析對象的混合物分離后再供于保持體。特別優選基于以電泳或層析法進行分離所得到的圖樣(pattem)將分離后的成分供給于保持體。這樣，對于通過各種分離手段進行了分離的分析對象，可以對應其分離圖樣來分別進行解析。具體地說，可以利用印跡法直接將電泳圖樣轉印在保持體上。此時優選保持體為透液性的。另外，可以通過將每恒定量的由液相色譜法得到的洗脫液以點狀或氣流狀滴加在保持體上來將各種洗脫餾分對應于其分離圖樣進行保持。此外，分析對象為肽或蛋白質等高分子化合物時，可考慮通過質譜分析能夠進行分析的分子量或獲得的信息內容，用各種分解酶適當地將分析對象低分子化后供給于保持體上。例如，可利用胰蛋白酶等蛋白酶等對蛋白質進行處理。除了可以對裂解圖樣(fragmentationpattern)進行解析外，還可以提高質譜分析的精度，簡化蛋白質的鑒定或蛋白質的序列確定。并且，優選將這樣片斷化的蛋白質通過電泳或液相色譜法分離后供給于保持體。此外，作為電泳，可舉出瓊脂糖凝膠電泳、改性瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺電泳、SDS聚丙烯酰胺電泳、等電點電泳和二維電泳等。另外，作為液相色譜法，優選采用使用了微毛細管或者納米毛細管的液相色譜法。這樣將分析對象供給于保持體上后，分析對象被保持于保持體。最簡單的是可以通過使供給分析對象時所用的水等介質蒸發并干燥從而將分析對象保持在保持體上。并且，在通過保持體或者保持體表面的官能團與分析對象間的共價鍵進行保持時，可以通過與分析對象一起或者分別將必要的試劑供給于保持體上進行反應來將分析對象保持在保持體上。此外，可根據保持形態提供必要的條件。將分析對象供給于保持體上之后或者保持在保持體上之后，在保持體上可以對分析對象實施化學修飾。實施化學修飾前的分析對象也稱為分析對象的前體。修飾的種類和方法沒有特別限定。例如，分析對象為蛋白質、肽等時，可舉出與l-氟-2，4-二硝基苯(FNDB)或5-二甲氨基萘-l-磺酰氯(丹磺酰氯)的反應、利用埃德曼試劑(異硫氰酸苯酯)和酸酑進行的埃德曼法。'作為本發明中的分析對象，可舉出埃德曼反應或者其類似反應的反應產物和反應中間體。例如，利用埃德曼法的衍變法，用所謂的階梯序列法可以確定蛋白質等的N末端氨基酸序列。即，在異硫氰酸苯酯(PITC)中加入百分之幾的異氰酸酯(ITC)、熒光素異硫氰酸酯(FITC)和異硫氰酸甲酯(MITC)等任一物質，進行偶聯，來改變針對N末端氨基酸殘基的修飾基團，從而抑制其后利用氟乙酸等進行的N末端氨基殘基的切斷反應，或者通過調整切斷反應時間來抑制N末端氨基酸殘基的切斷反應，從而在保持體的分析區域上主要殘存有(l)作為這樣的分解反應產物的一方的經切下的N末端氨基酸殘基的衍生物、(2)作為這樣的分解反應產物的另一方的N末端氨基酸殘基被切去了的片斷(埃德曼反應生成物)、和(3)雖然發生偶聯但未被切斷的未切斷蛋白質或肽的修飾體(偶聯體)。在此，上述(2)為埃德曼反應或其類似反應的反應生成物(by-product)，上述(3)為埃德曼反應或其類似反應的反應中間體。這些之中，(2)和(3)僅N末端氨基酸殘基部分不同，所以可以通過在質譜分析工序中對這些片斷的質量的差進行測量、比較來確定N末端氨基酸殘基。進而，可通過反復進行必要次數的這樣的反應工序和質譜分析工序來確定N末端氨基酸序列?；谝陨蟽热荩鳛閷㈦幕虻鞍踪|保持于保持體上的操作和這樣的保持體的典型例，可舉出以下例子。即，用胰蛋白酶等蛋白酶將蛋白質分解后，釆用微毛細管或納米毛細管液相色譜法進行分離，將洗脫液以多個位點(spot)的方式排列在保持體上并進行滴加、干燥，利用上述那樣的埃德曼法的衍變法對各位點進行反應，其后進行清洗、干燥。由此得到保持體，該保持體以按照對應于經液相色譜法得到的分離圖樣進行分配的1個或2個以上的洗脫液位點(分析用的單元)的方式具有利用胰蛋白酶對蛋白質進行分解而得到的1種或2種以上的片斷。另外，同時通過應用埃德曼法的衍變法，可以得到在各洗脫液位點保持有片斷和未切斷偶聯體的保持體，所述片斷為位點中含有的肽或蛋白質的N末端氨基酸殘基被切去了的埃德曼反應生成物，對于所述未切斷偶聯體來說，其雖然發生偶聯但N末端未被切斷。此外，將分析對象間接保持于保持體上時，首先，.準備保持有用于間接保持分析對象的間隔物的保持體。如上所述，間隔物例如為蛋白質或核酸等。將這樣的間隔物供給于保持體上進行保持時，可以適當使用上述那樣的方法。另外，在對分析對象進行保持時，向保持有這樣的間隔物的保持體供給含有分析對象的試樣，產生希望的相互作用，通過間隔物將分析對象保持在保持體上。(分析工序)對保持有分析對象的保持體實施分析工序。本分析工序中優選釆用質譜分析法。質譜分析工序中的電離方法沒有特別的限制，但從將保持體直接用于電離的方面考慮，優選采用不使用基質的激光解吸電離(LDI)、使用基質的基質輔助激光解吸電離(MALDI)。其中，對于肽或蛋白質等優選采用MALDI。作為用于MALDI的激光，可以使用N2、Nd-YAG、CWCO、TEA-C02、氬等。另外，作為用于MALDI的基質，沒有特別限定，可以使用煙酸、2-吡嗪羧酸、芥子酸、2,5-二羥基苯甲酸、5-甲氧基水楊酸、a-氰基-4-羥基肉桂酸、3-羥基甲基吡啶甲酸、二氨基萘、2-(4-羥基苯偶氮基彈甲酸、1,8,9-蒽三酚、琥珀酸、5-(三氟甲基)尿嘧啶、甘油等。相對于分析對象，基質的添加量等沒有特別限定，可以以現有公知的范圍適當設定。此外，本質譜分析方法中的質譜分析工序可以是利用磁場偏光型、四極型、離子阱型、飛行時間型、傅利葉變換離子回旋型、串聯型等各種質譜儀進行的分析。其中，在采用LDI和MALDI進行分析時，優選使用飛行時間型分析器的質譜分析工序。質譜分析工序中，可以對存在于保持體上的分析用單元中的1種或2種以上的分析對象的質量進行分析。例如，在分析用單元中存在埃德曼法的產物時，也即存在作為埃德曼反應產物的末端氨基酸殘基的衍生物(ATZ衍生物或PTH衍生物)、作為埃德曼反應生成物的殘余片斷、以及異氰酸酯系偶聯劑偶聯在N末端但并未被切斷的未切斷的蛋白質或肽的修飾體時，利用LDI法或MALDI法可以容易地測定作為埃德曼反應生成物的殘余片斷和未切斷物的分子量，由此可以鑒定整體的分子量以及N末端氨基酸。此外，對于在分析工序中實施的分析方法，除質譜分析外，還可以使用各種分析方法。并且，在利用熒光試劑或顯色試劑等對分析對象進行了標記的情況下，可以采用對保持體上的這樣的熒光或顯色等進行檢測的方法。實施例以下舉出實施例具體說明本發明，但這些實施例并不對本發明構成限定。(實施例1)作為保持體，準備耐蝕性導電性塑料膜和導電性硅酮橡膠(均為三菱樹脂株式會社制造)這2種膜(厚度分別為8(Him和150|im)。此外，這些膜的物性示于下表。[表l〗<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>厚度方向電阻負荷1.89MPa;體積電阻電阻值X測定電極面積/片材厚度準備與MALDI-TOF質譜分析裝置(ABIVoyagerDEProMALDITOF型質譜儀)的金屬制樣品板相同大小的導電性塑料膜，在該導電性塑料膜上涂布0.5pmol的血管緊張素(angiotensin，MW1293),然后不使用粘結劑將其貼覆在上述金屬制樣品板上，設定激光強度為1100、1000、700和600進行質譜分析。此外，基質使用芥子酸。在所設定的任一激光強度下都能檢測到分子量為1294的離子。其中，在激光強度為1000時檢測出最穩定的離子。另一方面，同樣制備與金屬制樣品板相同大小的導電性硅酮制膜，在該膜上分別涂布0.5pmol、0.25pmok50fmoi、lOfmol、lfmol、0.5fmol的血管緊張素，不使用粘結劑將該膜貼覆在金屬制樣品板上，設定激光強度為1000，使用芥子酸作為基質，用MALDI-TOF質譜分析裝置同樣地進行質譜分析。結果以任一樣品涂布量都能檢測出分子量為1294的離子，但在50fmol以上的濃度可以檢測出穩定的離子。(實施例2)本實施例中，制備與MALDI-TOF質譜裝置(ABIVoyagerDEProMALDITOF型質譜儀)的金屬制樣品板相同大小的導電性聚氯乙烯板(含有導電性碳)(TAKIRON制，TNDCV930)(厚度1.5mm;厚度方向體積電阻率(lQ'm)(JISK7194):104;洛氏硬度(JISK7112):88;比重(JISK7202):1.35)，在其上涂布lpmol、lOOfmol禾nlOfmol的血管緊張素(angiotensin,MW1293)以及lpmol、lOOfmol禾HlOfinol的強啡肽(Dynorphin)，然后將其分別用作樣品板，設定激光強度為1000進行質譜分析。此外，基質使用芥子酸。除血管緊張素為lOftnol的情況外，對于任一蛋白質以任一用量都能檢測出具有各自分子量的離子，其中各蛋白質為lpmol時檢測出最穩定的離子。(實施例3)本實施例中使用碳化硅(SiC)板作為樣品板。即，將該陶瓷板制成與MALDI-TOF質譜分析裝置(ABIVoyagerDE-STRMALDITOF型質譜儀)的金屬制樣品板相同的大小，涂布lpmol的血管緊張素(angiotensin，MW1293),然后將其分別用作樣品板并設定激光強度為2142來進行質譜分析。此外，基質使用(x-氰基-4-羥基肉桂酸。利用SiC板，背景噪音也可以良好地降低，并可以檢測出分子量離子。(實施例4)本實施例中，使用VGI石墨和Pyrocarb(均為揖斐電株式會社制造)的板作為樣品板。gP，將這些石墨板分別制成與MALDI-TOF質譜分析裝置(ABIVoyagerDE-STRMALDITOF型質譜儀)的金屬制樣品板相同的大小，涂布0.5pmol/VL的血管緊張素(angiotensin，MW1293)，涂布量為lpL，然后將其分別用作樣品板，針對VGI設定激光強度為2044、針對Pyrocarb設定激光強度為2010，進行質譜分析。此外，基質使用a-氰基-4-羥基肉桂酸。任一板都可檢出分子量離子，背景噪音也良好。(實施例5)本實施例中，在實施例1中使用的導電性塑料膜上進行埃德曼反應，進行氨基酸序列分析。將200pmo1的溶菌酶點樣于導電性塑料膜上，用作肽測序儀(ABI491CLC肽測序儀)的樣品保持膜。分析4殘基時可以充分進行分析。由上可知，實施例1中使用的導電性塑料膜對于埃德曼法中所用的埃德曼試劑和三氟乙酸酐等酸酐等具有充分的耐蝕性，同時具有能夠對抗清洗等的程度的保持蛋白質的能力。此外，將10pmol血管緊張素在相同的導電性塑料膜上進行點樣，與上述同樣地對5殘基進行分析，可以充分進行分析。由此可知，實施例l中使用的導電性塑料膜即使對于較低分子量的肽也具有充分的保持能力。本申請以2005年10月13日提出的日本專利申請第2005-299195號為優先權基礎，將其全部內容以引用的方式包含在本說明書中。工業實用性本發明可在分析化學領域例如蛋白質測序儀和質譜或熒光分析等中應用。權利要求1.一種分析用保持體，其用于保持分析對象，該保持體為具有非金屬性基質的導電性材料。2.如權利要求1所述的保持體，其中，所述導電性材料為導電性高分子材料。3.如權利要求2所述的保持體，其中，所述導電性高分子材料為導電性材料分散保持在有機高分子基質中而成的復合導電性高分子材料。4.如權利要求1所述的保持體，其中，所述導電性材料為導電性陶瓷材料。5.如權利要求4所述的保持體，其中，所述導電性陶瓷材料為具有表面處理層的石墨材料，所述表面處理層是利用玻璃態碳或熱分解碳形成的。6.如權利要求15任一項所述的保持體，其中，所述保持體對選自由乙酸、三氟乙酸和乙酸酐組成的組中的酸具有耐蝕性。7.如權利要求16任一項所述的保持體，其中，所述保持體是透液性的或非透液性的。8.如權利要求17任一項所述的保持體，其中，所述保持體為膜狀、板狀和微量滴定板狀中的任一形狀。9.如權利要求18任一項所述的保持體，其中，所述保持體以選自多核苷酸、寡聚核苷酸、蛋白質、肽、糖蛋白質和多糖類中的l種或2種以上的分子或這些物質的衍生物為分析對象。10.如權利要求19任一項所述的保持體，其中，該保持體為質譜分析用的樣品板或其一部分。11.如權利要求10所述的保持體，其中，該保持體用于基質輔助激光解吸電離質譜分析。12.如權利要求ll所述的保持體，其中，該保持體用于飛行時間質譜分析。13.如權利要求112任一項所述的保持體，其中，該保持體對埃德曼反應具有耐蝕性。14.如權利要求13所述的保持體，其中，該保持體用于保持在保持體上進行的埃德曼反應或者其類似反應的反應產物和反應中間體。15.如權利要求114任一項所述的保持體，其中，該保持體用于氨基酸序列分析。16.—種保持體，其為用于保持分析對象的分析用保持體，該保持體為具有非金屬性基質的導電性材料，并對埃德曼反應具有耐蝕性，同時能夠保持埃德曼反應產生的埃德曼反應生成物。17.—種保持體，其保持有1種或2種以上的分析對象，所述保持體含有分散保持在非金屬制基質中的導電性高分子材料。18.如權利要求17所述的保持體，其中，該保持體中排列有2個以上的分析用區域，該分析用區域保持所述1種或2種以上的分析對象。19.如權利要求18所述的保持體，其中，所述分析用區域各自具有固有的位置信息。20.如權利要求1719任一項所述的保持體，其中，所述分析對象選自氨基酸、肽和蛋白質。21.如權利要求1720任一項所述的保持體，其中，在所述分析用區域保持有N末端氨基酸殘基不同的蛋白質或肽。22.如權利要求1721任一項所述的保持體，其中，在所述分析用區域保持有埃德曼反應或者其類似反應的反應產物和反應中間體。23.如權利要求1722任一項所述的保持體，其中，通過電泳或液相色譜法將所述分析對象供給至所述保持體進行保持。24.—種質譜分析方法，其具有使用分析對象的保持體的激光解吸電離工序，所述分析對象的保持體為具有非金屬制基質的導電性材料。25.如權利要求24所述的方法，其中，所述激光解吸電離工序為基質輔助激光電離工序。26.如權利要求24或25所述的方法，該方法具有飛行時間質譜分析工序。27.如權利要求2426任一項所述的方法，其中，所述電離工序為使用權利要求1723任一項所述的分析對象的保持體的工序。28.—種方法，其為蛋白質或肽的分析方法，該方法具有如下工序(a)將蛋白質或肽供給至保持體進行保持的工序，該保持體為具有非金屬制基質的導電性材料；(b)對上述保持體上的蛋白質或肽的部分末端氨基酸殘基進行化學修飾，同時進行切斷的工序；和(c)對上述保持體上的由上述(b)工序得到的末端氨基酸殘基發生欠缺的片斷和在上述(b)工序中進行了修飾但并未切斷的上述蛋白質或肽進行質譜分析的工序。29.如權利要求28所述的方法，其中，所述(b)工序為利用埃德曼反應或其類似反應來進行的工序。30.如權利要求28或29所述的方法，其中，對所述蛋白質或肽的N末端氨基酸殘基依次反復實施適當次數的所述(b)工序和所述(c)工序。31.如權利要求2830任一項所述的方法，其中，所述保持工序是將通過電泳分離的或通過液相色譜法洗脫的蛋白質或肽供給至所述保持體進行保持的工序。全文摘要本發明涉及分析用保持體及其利用。所述分析用保持體為含有具有非金屬制基質的導電性材料的分析對象保持體。該分析用保持體由于含有導電性材料，因而作為需要向保持體施加電壓等從而進行分析對象的供給、保持或分析時的保持體是有用的。例如，本發明的分析用保持體可以替代MALDI-TOFMS等質譜分析用的金屬制樣品板或用作樣品板的一部分。文檔編號G01N27/64GK101283270SQ20068003783公開日2008年10月8日申請日期2006年10月3日優先權日2005年10月13日發明者森山昭彥,穴原精二郎申請人:揖斐電株式會社
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