国产自产21区,亚洲97,免费毛片网,国产啪视频,青青青国产在线观看,国产毛片一区二区三区精品

專利名稱：一種微囊藻毒素的提取純化方法
技術領域：
本發明涉及從微囊藻中提取純化毒素的方法。
目前，毒素純品研制的主要途徑是采用聯用多步純化技術，涉及色譜技術，制備或半制備型液相色譜、快速色譜，這二項技術可濃縮和分離純化微囊藻毒素，其不足之處在于，純度不高，無法滿足標準樣品的要求；制備或半制備型分子排阻色譜、離子交換色譜，薄層色譜，這三項技術的不足之處在于，其只適于微克級微囊藻毒素的制備，且耗時長，產率低。
為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案，該方案按下列步驟順序進行A、取微囊藻干粉，加入其重量30-40倍的5％乙酸溶液，攪拌40分鐘，6000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液；B、濾渣中加入其重量3-5倍的100％甲醇，攪拌40分鐘，6000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液；C、重復兩次步驟B；D、合并步驟B和步驟C三次提取的上清液，蒸發濃縮；E、將步驟D的濃縮液與步驟A的上清液混合，依次過1微米，0.45微米兩個微濾器；再將混合液過截留分子量為6000的中空纖維超濾器；F、先、后用100％甲醇和純水沖洗C18柱，將經過步驟E處理的混合液過C18柱，再用20％甲醇清洗，然后以90％甲醇10毫升洗脫下毒素，蒸發濃縮，得到粗毒素干粉；G、將粗毒素干粉溶于其重量10-20倍的60％甲醇中，取10微升加入制備型高效液相色譜，以標樣峰值的保留時間來收集微囊藻毒素；H、兩種毒素分別均勻點在薄層層析板的下端，將層析板放入距毒素點滴10-15毫米展開溶劑中進行展開；I、兩小時后將層析板取出晾干，用紫外燈照射，取下中間一條色帶的硅膠；J、將硅膠放入洗脫液中浸泡、攪拌5-15分鐘；K、浸泡液過濾、去殘渣，將過濾液用其重量8-12倍的純水稀釋，過PS-II柱，濾去C18；L、先以10-20毫升純水沖洗PS-II柱，再以8-12毫升100％甲醇洗脫，洗脫液蒸發干燥，即得含量大于90％的微囊藻毒素。
步驟H所述的展開溶劑為體積比是CHCl3∶CH3OH∶H2O＝6∶4∶1的混合液。
步驟J所述的洗脫液為50mM pH＝3.0的磷酸緩沖溶液占洗脫液的20％、甲醇占洗脫液的80％。
本發明與現有技術相比，具有以下優點和效果具有效率高，投資少，安全性高，純度高，對環境無污染等優點，適于毫克級微囊藻毒素的制備，易于工業化生產。
權利要求
1.一種微囊藻毒素的提取純化方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行A、取微囊藻干粉，加入其重量30-40倍的5％乙酸溶液，攪拌40分鐘，用6000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液；B、濾渣中加入其重量3-5倍的100％甲醇，攪拌40分鐘，用6000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液；C、重復兩次步驟B；D、合并步驟B和步驟C三次提取的上清液，蒸發濃縮；E、將步驟D的濃縮液與步驟A的上清液混合，依次過1微米，0.45微米兩個微濾器；再將混合液過截留分子量為6000的中空纖維超濾器；F、先、后用100％甲醇和純水沖洗C18柱，將經過步驟E處理的混合液過C18柱，再用20％甲醇清洗，然后以90％甲醇10毫升洗脫下毒素，蒸發濃縮，得到粗毒素干粉；G、將粗毒素干粉溶于粗毒素干粉重量10-20倍的60％甲醇中，取10微升加入制備型高效液相色譜，以標樣峰值的保留時間來收集微囊藻毒素；H、兩種毒素分別均勻點在薄層層析板的下端，將層析板放入距毒素點滴10-15毫米展開溶劑中進行展開；I、兩小時后將層析板取出晾干，用紫外燈照射，取下中間一條色帶的硅膠；J、將硅膠放入洗脫液中浸泡、攪拌5-15分鐘；K、浸泡液過濾、去殘渣，將過濾液用其重量8-12倍的純水稀釋，過PS-II柱，濾去C18；L、先以10-20毫升純水沖洗PS-II柱，再以8-12毫升100％甲醇洗脫，洗脫液蒸發干燥，即得含量大于90％的微囊藻毒素。
2.根據權利要求1所述的一種微囊藻毒素的提取純化方法，其特征在于，所述的展開溶劑為體積比是CHCl3∶CH3OH∶H2O＝6∶4∶1的混合液。
3.根據權利要求1所述的一種微囊藻毒素的提取純化方法，其特征在于，所述的洗脫液為50mM pH＝3.0的磷酸緩沖溶液占洗脫液的20％、甲醇占洗脫液的80％。
全文摘要
本發明公開了一種微囊藻毒素的提取純化方法，該方法用乙酸溶液和甲醇浸泡微囊藻，經除雜質、粗毒素的制備、毒素的分離、薄層層析技術等步驟提取和純化微囊藻毒素。本發明具有效率高，投資少，安全性高，純度高，對環境無污染等優點，適于毫克級微囊藻毒素的制備，易于工業化生產，所得微囊藻毒素的純度經HPLC－UV/DAD檢測≥90％，可做標準樣品。
文檔編號G01N1/28GK1401660SQ0213909
公開日2003年3月12日 申請日期2002年9月24日 優先權日2002年9月24日
發明者宋立榮, 沈強, 陳偉, 甘南琴, 何振榮, 劉永定, 雷臘梅 申請人:中國科學院水生生物研究所