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一種藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了相應(yīng)的提高，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中紫草茸、木香的鑒別方法進(jìn)行了優(yōu)化，并在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蔻的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測(cè)定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進(jìn)一步確保了產(chǎn)品質(zhì)量安全、有效、均一、穩(wěn)定、質(zhì)量可控。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藏藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，特別涉及一種藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]風(fēng)濕一詞起源于古希臘，公元前4世紀(jì)，《希波克拉底全集》有關(guān)人體解剖一文中認(rèn)為:人體的體液由于濕冷而下注于四肢、內(nèi)臟引起疾病，即為風(fēng)濕。我國(guó)《黃帝內(nèi)經(jīng)》也把風(fēng)寒濕三期雜合稱(chēng)為痹。
[0003]藏醫(yī)對(duì)于風(fēng)濕研究比較早。藏醫(yī)認(rèn)為，隆、赤巴、血、培根所致的痛風(fēng)癥，脈象短而實(shí)緊像血熱癥一樣脈象緩慢，尿象不定，呈熱證，確診無(wú)誤的癥狀是尿有焦角味，發(fā)病時(shí)關(guān)節(jié)干痛。濕痹是關(guān)節(jié)腔內(nèi)熱邪與黃水積聚，滲入關(guān)節(jié)腔內(nèi)或遍及肉、骨、脈、筋等處，關(guān)節(jié)如粉碎樣疼痛的一種疾病。藏醫(yī)學(xué)上用放血、瀉下、服藥三種方法來(lái)進(jìn)行治療。藏民們長(zhǎng)期生活在高原的寒冷環(huán)境中患風(fēng)濕類(lèi)疾病在所難免，藏民們?cè)陂L(zhǎng)期與疾病作斗爭(zhēng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了塞隆骨對(duì)于風(fēng)濕類(lèi)疾病有良效。藏醫(yī)們用塞隆骨加上其他藥材，在藏醫(yī)“干黃水，調(diào)節(jié)培根、隆等紊亂”的理論指導(dǎo)下，配制成了風(fēng)濕塞隆膠囊。
[0004]風(fēng)濕塞隆膠囊收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS-10788 (ZD-0788)-20020風(fēng)濕塞隆膠囊對(duì)風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕引起的關(guān)節(jié)炎、頸肩痛、腰背痛、足跟痛關(guān)節(jié)腫脹手指關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)腫痛、肢帶肌疼痛，強(qiáng)直性脊柱炎均有確切療效，是一級(jí)新藥組方、風(fēng)濕骨病良藥。
[0005]然而，現(xiàn)有風(fēng)濕塞隆膠囊的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)僅采用TLC薄層鑒別兩味藥材紫草茸與木香、HPLC測(cè)定一個(gè)藥效成分沒(méi)食子酸的含量，而且所選的鑒定項(xiàng)目量太少?zèng)]有代表性，且不能有效的控制其他主要成分的質(zhì)量。因此現(xiàn)有質(zhì)量檢測(cè)方法不能全面、準(zhǔn)確的控制本品質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0007]發(fā)明概述
[0008]本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了相應(yīng)的提高，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中紫草茸、木香的鑒別方法進(jìn)行了優(yōu)化，并在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蘧的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測(cè)定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進(jìn)一步確保了產(chǎn)品質(zhì)量安全、有效、均一、穩(wěn)定、質(zhì)量可控。
[0009]術(shù)語(yǔ)說(shuō)明:
[0010]風(fēng)濕塞隆膠囊是國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分)記載的藥品名稱(chēng)。
[0011]風(fēng)濕塞隆制劑包括風(fēng)濕塞隆膠囊及用風(fēng)濕塞隆膠囊原料藥配方制備的其他制劑。
[0012]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:[0013]一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香馬兜鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厴6.1重量份、石斛
6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子5.3重量份、余甘子6.3重量份的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定中的一種或幾種:
[0014]鑒別:
[0015](I)紫草茸的鑒別
[0016]取風(fēng)濕塞隆固體制劑5?15g,加醋酸乙酯10?20mL,超聲處理20?40分鐘,濾過(guò)，濾液濃縮至I?2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L,分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以體積比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)；
[0017](2)木香的鑒別
[0018]取風(fēng)濕塞隆固體制劑2?5g，加二氯甲烷10?20mL，超聲處理20?40分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；取木香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5?8:1?2的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0019](3)刺柏的鑒別
[0020]取風(fēng)濕塞隆固體制劑5?15g,加水50?150mL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油,揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對(duì)照藥材0.5?lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2?5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比7?9:3?I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
[0021](4)藏茜草的鑒別
[0022]取風(fēng)濕塞隆固體制劑5?IOg,加甲醇10?20mL,超聲處理20?40分鐘,濾過(guò),濾液濃縮至約I?2mL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2?5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比2?6:1?2的沸程為60?90°C石油醚-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0023](5)綠絨蒿的鑒別[0024]取風(fēng)濕塞隆固體制劑5?10g，加體積比1%鹽酸溶液20?30mL，超聲處理30?40分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至pH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10?8:4?5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0025](6) 丁香的鑒別
[0026]取風(fēng)濕塞隆固體制劑5?10g，加沸程為60_90°C石油醚50?80mL超聲，超聲處理30?40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至I?2mL作為供試品溶液；另取丁香藥材Ig,同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8?9:2?I的石油醚(60?90°C )-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0027](7)豆蘧的鑒別
[0028]取風(fēng)濕塞隆固體制劑10?20g,加水80?IOOmL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油,揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2?3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8?9:2?I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0029]含量測(cè)定
[0030](I)總黃酮的含量測(cè)定
[0031]對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得；
[0032]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取上述對(duì)照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號(hào)為I至6號(hào)；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比8-10%硝酸招溶液ImL,搖勻,放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，以I號(hào)為空白；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0033]測(cè)定法:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉lg，精密稱(chēng)定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL，置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計(jì)算，即得；
[0034]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不得少于25mg/g ；
[0035](2)印度獐牙菜的含量測(cè)定
[0036]照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定；
[0037]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:70-75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；
[0038]對(duì)照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0039]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉約lg，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，回流提取I小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)铀s20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0040]測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得;
[0041]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計(jì)，不得少于0.35mg/g ；
[0042](3)馬兜鈴酸A的檢查
[0043]照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定；
[0044]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40-45:55-60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
[0045]對(duì)照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0046]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉約10g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘?jiān)淤|(zhì)量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調(diào)節(jié)pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0047]測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得;
[0048]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中馬兜鈴酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0049]優(yōu)選的，一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度獐牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏菌草10.6重量份、紫草鸞10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱療9.5重量份、木香馬5?鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺庵6.1重量份、石斛6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子5.3重量份、余甘子6.3重量份的風(fēng)濕塞隆膠囊的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定中的一種或幾種:
[0050]鑒別:
[0051](1)紫草茸的鑒別
[0052]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯20mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)；
[0053](2)木香的鑒別
[0054]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；取木香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8: I的二氯甲烷環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以I %香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0055](3)刺柏的鑒別
[0056]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0057](4)藏茜草的鑒別
[0058]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約ImL,作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為4:1的沸程為60~90°C石油醚丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0059](5)綠絨蒿的鑒別
[0060]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
[0061](6) 丁香的鑒別
[0062]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加沸程為60_90°C的石油醚50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0063](7)豆蘧的鑒別
[0064]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
[0065]含量測(cè)定
[0066](I)總黃酮的含量測(cè)定
[0067]對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得；
[0068]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取上述對(duì)照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號(hào)為I至6號(hào)；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液ImL,搖勻,放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號(hào)為空白；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0069]測(cè)定法:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物lg，精密稱(chēng)定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計(jì)算，即得；
[0070]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不得少于25mg/g。
[0071](2)印度獐牙菜的含量測(cè)定
[0072]照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定；
[0073]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；[0074]對(duì)照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0075]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物約lg，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，回流提取I小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)铀s20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0076]測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得;
[0077]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計(jì)，不得少于0.35mg/g。
[0078](3)馬兜鈴酸A的檢查
[0079]照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定；
[0080]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
[0081]對(duì)照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0082]供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物約10g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘?jiān)淤|(zhì)量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調(diào)節(jié)pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
[0083]測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得;
[0084]本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中馬兜鈴酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0085]本發(fā)明重量份和體積份的關(guān)系為g/mL或kg/L的關(guān)系。
[0086]本發(fā)明的有益效果:
[0087]風(fēng)濕塞隆膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下只有紫草茸、木香的薄層鑒別項(xiàng)及沒(méi)食子酸的含量測(cè)定項(xiàng)，不能有效的控制其他主要成分的質(zhì)量。本發(fā)明對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了相應(yīng)的提高，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中紫草茸、木香的鑒別方法進(jìn)行了優(yōu)化，并在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了刺柏、丁香、綠絨蒿、藏茜草、豆蘧的鑒別，增加了總黃酮、印度獐牙菜的含量測(cè)定方法，馬兜鈴酸A的檢查方法，進(jìn)一步確保了產(chǎn)品的安全性、均一性、穩(wěn)定性，使產(chǎn)品質(zhì)量更有保證，進(jìn)而確保產(chǎn)品的臨床療效和廣大患者的身體健康。同時(shí)本法還可用于風(fēng)濕塞隆的其他制劑，如風(fēng)濕塞隆顆粒、風(fēng)濕塞隆丸、風(fēng)濕塞隆片等。
[0088]下面的實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。[0089]所檢測(cè)的風(fēng)濕塞隆膠囊為青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。
[0090]實(shí)驗(yàn)例1:鑒別實(shí)驗(yàn)
[0091]1、紫草茸的鑒別
[0092]( I)供試品溶液制備方法研究:
[0093]甲醇超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0094]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0095]石油醚提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0096](2)薄層條件的研究:
[0097]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用甲苯-氯仿-丙酮-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展開(kāi)效果，檢視方法為日光下檢視。
[0098]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸系統(tǒng)，比較了不同比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展開(kāi)效果，檢視方法為日光下檢視。
[0099]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸系統(tǒng)，比較了不同比例(4:1:1)、(4:2:1)、(4:0.5:1)的展開(kāi)效果,檢視方法為置紫外光燈(365nm)下檢視。
[0100]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用甲苯-二氯甲烷-丙酮系統(tǒng)，比較了不同比例(4:5:0.5)、(5:5:0.5) (6:5:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液,檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0101]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比6:5:0.5的二甲苯-二氯甲烷-甲酸、體積比1:1沸程為60-90°C的石油醚-乙酸乙酯、體積比1:1的二甲苯-丙酮等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%的香草醛硫酸乙醇溶液、質(zhì)量體積比為5%硫酸乙醇溶液等顯色劑。
[0102]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出試驗(yàn)條件為:
[0103]供試品溶液制備方法:乙酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯20mL,超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。
[0104]展開(kāi)系統(tǒng):體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸
[0105]檢視方法:日光下檢視。
[0106]具體試驗(yàn)方法為:
[0107]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5?15g，加醋酸乙酯10?20mL，超聲處理20?40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至I?2mL，作為供試品溶液。另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5?10 μ L,分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以體積比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯_ 二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0108]結(jié)果分析:紫草茸TLC結(jié)果顯示，展開(kāi)劑以體積比為4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸條件下有較好的展開(kāi)效果，體積分?jǐn)?shù)比5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸條件下展開(kāi)效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中紫草茸的鑒別方法。
[0109]2、木香的鑒別
[0110](I)供試品溶液制備方法研究:
[0111]甲醇超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0112]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0113]石油醚提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超聲處理30min,濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0114]二氯甲烷提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加二氯甲烷30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)佣燃淄?mL溶解，作為供試品溶液。
[0115]提取揮發(fā)油:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0116](2)薄層條件的研究:
[0117]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用正己烷-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(5:1)、(5:2),(5:3)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0118]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:2)、(6:1)、(6:3)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%香草醛硫酸溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0119]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用乙酸乙酯-環(huán)己烷系統(tǒng)，比較不同體積比例(5:1 )、(6:1 )、(4:1)下層的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比1%香草醛硫酸溶液，檢視方法為日光下檢視。
[0120]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用二氯甲烷-環(huán)己烷系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:1)、(5:1),(4:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0121]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比5:1的氯仿-正己烷、體積比5:1的環(huán)己烷-醋酸乙酯、體積比5:2的二甲苯-環(huán)己烷等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%硫酸乙醇溶液、質(zhì)量體積比為1%的硫酸溶液、質(zhì)量體積比為1%香草醛硫酸溶液等顯色劑。
[0122]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出實(shí)驗(yàn)條件為:
[0123]供試品溶液制備方法:二氯甲烷超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。
[0124]展開(kāi)系統(tǒng):二氯甲烷-環(huán)己烷。
[0125]顯色劑:質(zhì)量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液。
[0126]檢視方法:105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0127]具體試驗(yàn)方案為:
[0128]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物2?5g，加二氯甲烷10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至I?5mL,作為供試品溶液；另取木香對(duì)照藥材0.5g,同法制成對(duì)照藥材溶液；另取按處方比例配制的缺木香的陰性對(duì)照樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取木香對(duì)照藥材溶液I?5 μ L，供試品溶液3?8 μ L，陰性對(duì)照溶液3?8 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5?8:1?3的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以質(zhì)量體積比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0129]結(jié)果分析:檀香TLC結(jié)果顯示，展開(kāi)劑以體積比為5?8:1?3的二氯甲烷-環(huán)己烷條件下有較好的展開(kāi)效果，在體積比為8:1的二氯甲烷-環(huán)己烷條件下展開(kāi)效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中木香藥材的鑒別方法。
[0130]3、藏茜草的鑒別
[0131](I)供試品溶液制備方法研究:
[0132]甲醇超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0133]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0134]正丁醇提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加正丁醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0135]甲醇超聲，調(diào)pH值，二氯甲烷提取:取本品內(nèi)容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)芋w積比為1%鹽酸20mL使溶解，濾過(guò)，濾液加氨水調(diào)至堿性，用二氯甲烷振搖提取2次，每次20mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。
[0136]石油醚(60_90°C)回流提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加石油醚(60_90°C)30mL,回流提取30min，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。
[0137](2)薄層條件的研究:
[0138]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚(60-90°C)-甲酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同比例(15:5:1)、( 4:1:1)、( 15:10:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為5%香草醛硫酸溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0139]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚(60-90 °C )-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(5:1)、(5:2)的展開(kāi)效果,檢視方法為紫外光燈(365nm)下檢視。
[0140]采用硅膠GF254板，展開(kāi)劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開(kāi)效果，檢視方法為紫外光燈(254nm)下檢視，然后再噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0141]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比4:1的二甲苯-醋酸乙酯、體積比4:1的環(huán)己烷醋酸乙酯、體積比9:1的二甲苯-甲醇等展開(kāi)系統(tǒng)。
[0142]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出實(shí)驗(yàn)條件為:
[0143]供試品溶液制備方法:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加甲醇30mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液。
[0144]展開(kāi)系統(tǒng):體積比4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮[0145]檢視方法:置365nm紫外光燈下檢視。
[0146]具體試驗(yàn)方案為:
[0147]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5?15g，加甲醇10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液。取藏茜草對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取按處方比例配制的缺藏茜草的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液2?8 μ L,供試品及陰性對(duì)照溶液各5?15 μ L,分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，以體積比2?6:1?2的石油醚(60?90°C)-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0148]結(jié)果分析:藏茜草TLC結(jié)果顯示，展開(kāi)劑以體積比2?6:1?2的二甲苯-乙醇條件下有較好的展開(kāi)效果，在體積比為4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮條件下展開(kāi)效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖3。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中藏茜草藥材的鑒別方法。
[0149]4、刺柏的鑒別
[0150](I)供試品溶液制備方法研究:
[0151]體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加體積分?jǐn)?shù)95%乙醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)芋w積分?jǐn)?shù)為95%醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0152]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0153]石油醚(60?90°C)提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加石油醚(60?90°C)30mL，超聲處理30min,濾過(guò),濾液濃縮至ImL,作為供試品溶液。
[0154]提取揮發(fā)油:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0155](2)薄層條件的研究:
[0156]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0157]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上層溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，日光下檢視。
[0158]采用硅膠GF254板，展開(kāi)劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開(kāi)效果，檢視方法為紫外光燈(254nm)下檢視，然后再噴以質(zhì)量體積比5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0159]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0160]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、4:1環(huán)己烷-醋酸乙酯、1:1 二甲苯-醋酸乙酯等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質(zhì)量體積比為5%磷鑰酸乙醇溶液等顯色劑。
[0161]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出試驗(yàn)條件為:
[0162]供試品溶液制備方法:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作為供試品溶液；
[0163]展開(kāi)劑:石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
[0164]展開(kāi)劑:體積比為8.5:1.5。
[0165]檢視方法:噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0166]具體試驗(yàn)方案為:
[0167]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5~10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取刺柏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取按處方比例配制的刺柏的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0168]結(jié)果分析:刺柏TLC結(jié)·果顯示，以體積比為8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑條件下有較好的展開(kāi)效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯條件下效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖4。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中刺柏的鑒別方法。
[0169]5、綠絨蒿的鑒別
[0170](I)供試品溶液制備方法研究:
[0171]甲醇超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0172]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0173]石油醚提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物IOg,加石油醚30mL,超聲處理30min,濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0174]酸液煎煮，調(diào)pH，二氯甲烷提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL,超聲處理30min,濾過(guò),濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至pHIO,再用二氯甲燒等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。
[0175](2)薄層條件的研究::
[0176]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積體積比例(8:2)、(8:1),(8.5:1.5)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積比為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0177]采用硅膠GF254板，展開(kāi)劑用醋酸乙酯-甲醇-水系統(tǒng)，比較了不同體積比例(5:1:0.5),(5:0.5:0.5),(5:1.5:0.5)的展開(kāi)效果，檢視方法為置254nm紫外光燈下檢視。
[0178]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加兩滴氨水溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(10:4:0.1),(10:2:0.5),(10:8:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用稀碘化鉍鉀溶液，檢視方法日光下檢視。
[0179]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比10:1:0.5三氯甲烷-甲醇-水、體積比10:1.5:0.5的二甲苯-甲酸乙酯-二氯甲烷等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質(zhì)量體積比為1%的香草醛硫酸乙醇溶液、質(zhì)量體積比為％硫酸乙醇溶液等顯色劑。
[0180]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出試驗(yàn)條件為:
[0181]供試品溶液制備方法:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至pHIO，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。
[0182]展開(kāi)系統(tǒng):體積比10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水系統(tǒng)。
[0183]顯色劑:稀碘化鉍鉀溶液。
[0184]檢視方法:日光下檢視。
[0185]具體試驗(yàn)方案為:
[0186]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5?10g，加體積比1%鹽酸溶液30?40mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至PH10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液。另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8?10:4?6:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下見(jiàn)識(shí)。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0187]結(jié)果分析:綠絨蒿TLC結(jié)果顯示，展開(kāi)劑以體積比為8?10:4?6:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水條件下有較好的展開(kāi)效果，在體積比為10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加兩滴氨水條件下展開(kāi)效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖5。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中綠絨蒿藥材的鑒別方法。
[0188]6、丁香的鑒別
[0189](I)供試品溶液制備方法研究:
[0190]甲醇超聲提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0191]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。
[0192]石油醚提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g,加石油醚30mL,超聲處理30min,濾過(guò),濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。
[0193]提取揮發(fā)油:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；[0194](2)薄層條件的研究:
[0195]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚(60?90°C)-乙酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:1.5)、(8.5:1.5),(9:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0196]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用二氯甲烷-甲醇-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:0.7:0.2),(8:1:0.2)、(8:0.5:0.2)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積比為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0197]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用醋酸乙酯-冰醋酸-甲醇系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:3:1),(8:2:1),(7:1:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積比分?jǐn)?shù)10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0198]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比5:5的二甲苯-甲酸乙酯、體積比9:1:1的醋酸乙酯-甲酸-水等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質(zhì)量體積比為1%的香草醛硫酸溶液等顯色劑。
[0199]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出試驗(yàn)條件為:
[0200]供試品溶液制備方法:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加石油醚(60_90°C) 50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液。展開(kāi)系統(tǒng):三氯甲烷-甲醇-水-甲酸的下層溶液
[0201 ] 顯色劑:體積分?jǐn)?shù)10%硫酸乙醇溶液。
[0202]檢視方法:105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0203]具體試驗(yàn)方案為:
[0204]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5?10g，加石油醚(60_90°C) 10?50mL，超聲處理20?40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取丁香對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取按處方比例配制的缺丁香的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2?8 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為9?1:1?2的沸程為60?90°C的石油醚-乙酸乙酯的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0205]結(jié)果分析:丁香TLC結(jié)果顯示，以體積比為9?1:1?2的石油醚(60?90°C )_乙酸乙酯的下層溶液為展開(kāi)劑，有較好的展開(kāi)效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚(60?900C)-乙酸乙酯的下層溶液條件下展開(kāi)效果最好。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖6。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中丁香藥材的鑒別方法。
[0206]7、豆蘧的鑒別
[0207]( I)供試品溶液制備方法研究:
[0208]體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加體積分?jǐn)?shù)95%乙醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)芋w積分?jǐn)?shù)為95%醇2mL溶解，作為供試品溶液。
[0209]醋酸乙酯提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。[0210]石油醚(60~90°C)提取:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加石油醚(60~90°C )30mL,超聲處理30min,濾過(guò),濾液濃縮至ImL,作為供試品溶液。
[0211]提取揮發(fā)油:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；
[0212](2)薄層條件的研究:
[0213]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系統(tǒng)，比較了不同體積比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0214]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上層溶液系統(tǒng)，比較了不同體積比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展開(kāi)效果，顯色劑選用質(zhì)量體積比為1%三氯化鐵乙醇溶液，日光下檢視。
[0215]采用硅膠GF254板，展開(kāi)劑用二甲苯-丙酮系統(tǒng)，比較了不同體積比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展開(kāi)效果，檢視方法為紫外光燈(25411111)下檢視，然后再噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0216]采用硅膠G板，展開(kāi)劑用石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)，比較了不同體積比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展開(kāi)效果，顯色劑選用體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液，檢視方法為105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0217]本實(shí)驗(yàn)還選用了體積比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、體積比4:1的環(huán)己烷-醋酸乙酯、體積比1:1的二甲苯-醋酸乙酯等展開(kāi)系統(tǒng)；質(zhì)量體積比為1%三氯化鋁乙醇溶液、質(zhì)量體積比為5%磷鑰酸乙醇溶液等顯色劑。
`[0218]通過(guò)上述系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，選出試驗(yàn)條件為:
[0219]供試品溶液制備方法:取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作為供試品溶液；
[0220]展開(kāi)劑:石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
[0221]展開(kāi)劑:體積比為8.5:1.5。
[0222]檢視方法:噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。
[0223]具體試驗(yàn)方案為:
[0224]取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10~20g，置IOOmL圓底燒瓶中，加水50mL，煎煮lh，用揮發(fā)油測(cè)定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測(cè)定器中開(kāi)始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取豆蘧對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。另取按處方比例配制的豆蘧的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑點(diǎn)顯色清晰。。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
[0225]結(jié)果分析:豆蘧TLC結(jié)果顯示，以體積比為8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑條件下有較好的展開(kāi)效果，在體積比為8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯條件下效果最好，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖7。此方法可以作為風(fēng)濕塞隆膠囊中豆蘧的鑒別方法。
[0226]實(shí)驗(yàn)例2:馬兜鈴酸A的檢查實(shí)驗(yàn)
[0227]1.儀器、試藥和供試樣品
[0228]儀器:安捷倫1200型高效液相色譜儀；島津AUW220D電子天平。
[0229]對(duì)照品:馬兜鈴酸A對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，批號(hào):110746-200806。
[0230]樣品:風(fēng)濕塞隆膠囊，0.3g/粒(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司)，批號(hào):20110601,20110602,20110603ο
[0231]2.檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
[0232]取馬兜鈴酸A對(duì)照品溶液，于19(T400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，馬兜鈴酸A在315nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故根據(jù)紫外吸收?qǐng)D譜選定315nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
[0233]3.流動(dòng)相的選擇
[0234]分別研究了甲醇-水體系、甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液體系流動(dòng)相條件下，馬兜鈴酸A色譜峰的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液體系為流動(dòng)相，馬兜鈴酸A色譜峰的峰形較好，甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液在體積份數(shù)比為40:60時(shí)，馬兜鈴酸A能夠達(dá)到較好的色譜分離效果。
[0235]4.對(duì)照品溶液的制備
[0236]取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得。
[0237]5.供試品溶液的制備
[0238]按含量測(cè)定項(xiàng)下方法對(duì)供試品溶液進(jìn)行檢測(cè)。按供試品溶液的制備項(xiàng)下的方法，分別考察了不同提取方法、不同提取溶劑、不同提取時(shí)間條件下，馬兜鈴酸A的提取效果。以每克藥品中馬兜鈴酸A的含量為指標(biāo)確定提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表1、表2和表3。
[0239]表1提取方法考察試驗(yàn)結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花`21.1重量份、豆蘧`28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆葉10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香馬兜鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厴`6.1重量份、石斛`6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子`5.3重量份、余甘子6.3重量份的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定中的一種或幾種: 鑒別: (1)紫草茸的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑5~15g,加醋酸乙酯10~20mL,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò)，濾液濃縮至I~2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜 法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5~`10 μ L,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比4~6:4~6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)； (2)木香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑2~5g，加二氯甲烷10~20mL，超聲處理20~40分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；取木香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5~10 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5~8:1~2的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位 置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (3)刺柏的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑5~15g,加水50~150mL,按水蒸氣蒸懼法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對(duì)照藥材0.5~lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2~5 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比7~9:3~I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)藏茜草的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑5~IOg,加甲醇10~20mL,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液濃縮至約I~2mL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2~5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比2~6:1~2的沸程為60~90°C石油醚-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (5)綠絨蒿的鑒別取風(fēng)濕塞隆固體制劑5~10g，加體積比1%鹽酸溶液20~30mL，超聲處理30~40分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10~8:4~5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑占.(6)丁香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑5~10g，加沸程為60-90°C石油醚50~80mL超聲，超聲處理30~40分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至I~2mL作為供試品溶液；另取丁香藥材Ig,同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚(60~90°C)_乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比為1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (7)豆蘧的鑒別 取風(fēng)濕塞隆固體制劑10~20g，加水80~IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2~3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 含量測(cè)定· (I)總黃酮的含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取上述對(duì)照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號(hào)為I至6號(hào)；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻，放置6分鐘，加重量體積份數(shù)比8-10%硝酸鋁溶液lmL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，以I號(hào)為空白；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 測(cè)定法:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉lg，精密稱(chēng)定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5.0mL"起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計(jì)算，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不得少于25mg/g; (2)印度獐牙菜的含量測(cè)定 照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:70-75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ； 對(duì)照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉約lg，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，回流提取I小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)铀s20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計(jì)，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國(guó)藥典》201·0年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40-45:55-60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ； 對(duì)照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑細(xì)粉約10g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘?jiān)淤|(zhì)量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調(diào)節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆制劑中馬兜鈴酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10μ g/g。
2.如權(quán)利要求1所述的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中的制劑是指取上述權(quán)利要求I的原料藥，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型。
3.如權(quán)利要求1或2所述的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定方法中的一種或幾種: 鑒別: (I)紫草茸的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加醋酸乙酯20mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)； (2)木香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物3g，加二氯甲烷15mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；取木香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1Oy L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8: 1的二氯甲烷-環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (3)刺柏的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加水100mL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比.8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)藏茜草的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物5g，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約lmL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為4:1的沸程為60~90°C石油醚-丙酮為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (5)綠絨蒿的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加體積比1%鹽酸溶液30mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至PH10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》.2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比為10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (6)丁香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加沸程為60-90°C的石油醚50mL超聲，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至ImL作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (7)豆蘧的鑒別 取風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物10g，加水IOOmL,按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比·8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑占.含量測(cè)定 (1)總黃酮的含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取上述對(duì)照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分別置25mL量瓶中，編號(hào)為I至6號(hào)；各加水至5.0mL,加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液ImL,混勻，放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液ImL,搖勻，放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號(hào)為空白；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 測(cè)定法:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物lg，精密稱(chēng)定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL，·置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/mL)，計(jì)算，即得；本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量測(cè)定 照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ； 對(duì)照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物約lg，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，回流提取I小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)铀s20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計(jì)，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ； 對(duì)照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊內(nèi)容物約10g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25mL，低溫濃縮至干，殘?jiān)淤|(zhì)量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調(diào)節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆膠囊中馬兜鈴酸A (C17H11N07)的含量不得高于10 μ g/g。
4.如權(quán)利要求1或2所述的風(fēng)濕塞隆制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè) 定方法中的一種或幾種: 鑒別: (1)紫草茸的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒10g，加醋酸乙酯20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取紫草茸對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5: 5: 0.5: 0.1 二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，分別置日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)； (2)木香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒3g，加二氯甲烷15ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；取木香對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各IOy L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8: I 二氯甲烷-環(huán)己烷為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (3)刺柏的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒10g，加水100ml，按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取刺柏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (4)藏茜草的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒5g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約1ml，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以4:160~90°C石油醚-丙酮為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出，晾干,置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (5)綠絨蒿的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒10g，加體積比1%鹽酸溶液30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液用1%氫氧化鈉調(diào)堿至PH為10，再用二氯甲烷等體積萃取3次，合并二氯甲烷液，蒸干，加甲醇至2ml溶解，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下見(jiàn)識(shí)；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； (6)丁香的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒10g，W 60-90°C石油醚50ml超聲，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至Iml作為供試品溶液；另取丁香藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上兩種溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8:2的60~90°C石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比1%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相 應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (7)豆蘧的鑒別 取風(fēng)濕塞隆顆粒10g，加水100ml，按水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油作為供試品；取豆蘧對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積比I %硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 含量測(cè)定: (I)總黃酮的含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取上述對(duì)照品液0.0ml、1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml,分別置25ml量瓶中，編號(hào)為I至6號(hào)；各加水至5.0ml，加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液Iml,混勻,放置6分鐘,加重量體積份數(shù)比10%硝酸招溶液Iml,搖勻，放置6分鐘,加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以I號(hào)為空白；照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒lg，精密稱(chēng)定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5.0ml”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量(μ g/ml)，計(jì)算，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒中總黃酮的含量按蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量測(cè)定 照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25:75的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm ;理論板數(shù)按獐牙菜苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ； 對(duì)照品溶液的制備:取獐牙菜苦苷對(duì)照品適量，加乙醇制成每Iml含45μ g的溶液，即得; 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒lg，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，回流提取I小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml，減壓濃縮至干，殘?jiān)铀s20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘?jiān)右掖既芙獠⒍ㄈ葜?ml容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計(jì)，不得少于0.35mg/g ； (3)馬兜鈴酸A的檢查 照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比40:60的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ； 對(duì)照品溶液的制備:取馬兜鈴酸A對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每Iml含500ng的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒10g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘?jiān)淤|(zhì)量體積份數(shù)比0.5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20ml,萃取后堿液使用體積份數(shù)比5%鹽酸調(diào)節(jié)pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至Iml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法:分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得； 本發(fā)明藏藥組合物風(fēng)濕塞隆顆粒中馬兜鈴酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10 μ g/g。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103852555SQ201210523974
【公開(kāi)日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月7日
【發(fā)明者】鄭亭亭, 江玉娟, 任松鵬, 宋洋, 單玉剛 申請(qǐng)人:山東阿如拉藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司