專利名稱：一種玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種蛋白質的檢測方法，尤指是玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法。
背景技術：
玻璃酸(Hyaluronic acid，簡稱HA)，是由(1 — 3) _2_乙酰氨基_2_脫氧-β _D_葡萄糖-(1 — 4) -0- β -D-葡糖醛酸雙糖重復單位所組成的直鏈多聚糖，分子式為(C14H21NO11) η,依據組織來源不同，分子量變化范圍為2 X IO5 7 X 106，雙糖單位數為300 11000對。
權利要求
1.一種玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟(1)標準曲線的制備稱取牛血清白蛋白對照品，加氫氧化鈉試劑溶解定容，配制成 200yg/ml的牛血清白蛋白儲備液；將牛血清白蛋白儲備液稀釋，配制成2 μ g/ml、4 μ g/ ml、8y g/ml、10y g/ml、20y g/ml的標準液；移取一定體積各標準液，置于試管中，兩個空白管中移取標準液等體積的氫氧化鈉試劑，于上述各管中加入標準液等體積的試劑E，立即在旋渦振蕩器混合，室溫放置5-15min，加入標準液3倍體積的試劑F，立即在旋渦振蕩器混合后，在40-60°C水浴放置5-15min，以空白管為對照，測750nm下的吸光度，得出直線回歸方程；(2)樣品溶液制備稱取玻璃酸鈉中間體樣品用標準液等體積的氫氧化鈉試劑溶解后，加入標準液等體積的試劑E，立即在旋渦振蕩器混合，室溫放置5-15min，加入標準液3 倍體積的試劑F，立即在旋渦振蕩器混合后，在40-60°C水浴放置5-15min，以空白管為對照，測750nm下的吸光度；(3)由直線回歸方程，按下式計算玻璃酸鈉中間樣品中蛋白質含量，---χ 100%fF χ 1000000式中，C表示樣品試管溶液中蛋白質濃度，W表示樣品試管中玻璃酸鈉中間樣品質量，所述氫氧化鈉試劑的濃度為4. 3mg/ml ；所述試劑E是將9. Omg/ml硫酸銅溶液，15. Omg/ml酒石酸鉀納溶液和含碳酸鈉為 100mg/ml、氫氧化鈉為20mg/ml的溶液的體積比為1 1 3混合物；所述試劑F是10倍稀釋的福林酚。
2.如權利要求1所述的玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中Iml的氫氧化鈉試劑中，加入玻璃酸鈉中間體樣品量為10mg。
3.如權利要求1所述的玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法，其特征在于，步驟(1)和步驟 (2)中，室溫放置的時間為IOmin。
4.如權利要求1所述的玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法，其特征在于，步驟(1)和步驟 (2)中，水浴溫度為500C 0
5.如權利要求4所述的玻璃酸鈉中蛋白質的檢測方法，其特征在于，步驟(1)和步驟 (2)中，水浴放置時間為IOmin0
全文摘要
本發明涉及一種玻璃酸鈉中的蛋白質的檢測方法，步驟為，利用牛血清白蛋白標準液制作直線回歸方程；制備樣品溶液，測量其吸光度值；由直線回歸方程計算蛋白質的含量。直線回歸方程制作的方法為配制的2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的標準液，用堿性銅試劑和福林酚試劑顯色后，測750nm下的吸光度。利用本發明的方法檢測玻璃酸鈉中的蛋白質含量，大大縮短了檢測時間，降低了檢測成本，特別適合實驗室對玻璃酸鈉中的蛋白質含量進行的檢測。
文檔編號G01N21/78GK102495053SQ201110401130
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月6日 優先權日2011年12月6日
發明者薛亮 申請人:上海景峰制藥有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
