一種基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法
【專利摘要】一種基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法。其特征是先合成的熒光銀納米簇原液稀釋400倍,取990μL作為探針溶液。分別向探針溶液中加入10μL含不同濃度半胱胺的血清樣品,反應5分鐘。半胱胺濃度范圍是5-120μM。用熒光檢測儀測定混合反應后的銀納米簇溶液與空白對照組的熒光強度比,做出熒光強度比與半胱胺濃度的線性關系圖。再向探針溶液中加入10μL含未知濃度半胱胺的血清溶液,反應5分鐘后,測得反應后的銀納米簇溶液與空白對照組的熒光強度比。根據(jù)步驟2)中的關系圖計算得出血清樣品中半胱胺的濃度。本發(fā)明對半胱胺分子有著很好的專一識別能力,操作簡單,反應迅速,樣品需求量少,并且檢測靈敏度較高。
【專利說明】一種基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法
【【技術領域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種基于熒光銀納米簇檢測血清中半胱胺的分析方法。
【技術背景】
[0002]半胱胺(Cysteamine,CS) HSCH2CH2NH2,又稱P —巰基乙胺,易溶于水及醇,相當于半胱氨酸的脫羧產物,是乙酰輔酶A的組成部分,是一種天然存在于動物、植物和人體的生物活性物質。半胱胺分子的巰基和氨基富有活性,在生物體內承擔著重要的生理學功能。
[0003]半胱胺可以降低生長抑制素含量,提高生長激素水平,促進動物生長。半胱胺可被用于飼料添加以及臨床應用。因此發(fā)展一種簡單、快速、精確、特異、靈敏的測定血清半胱胺的濃度的方法是必要的。
[0004]當前測定血清中半胱胺的方法主要以高效液相色譜法和電化學方法為主。高效液相色譜法靈敏,準確度高,但是設備昂貴。電化學方法相對而言靈敏度低,且需制備電極,操作較為復雜。因此發(fā)展一種操作簡便,靈敏度高,且不依賴昂貴設備的新方法是非常有意義的。
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【發(fā)明內容】
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[0005]本發(fā)明的目的:在于提供一種新型的基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,以克服現(xiàn)有的檢測半胱胺的方法中靈敏度不夠高,檢測所需時間過長,或需要復雜的步驟及昂貴的大型儀器,難以實現(xiàn)快速、精確、特異、高靈敏的測定的缺陷。
[0006]本發(fā)明的思路:硫辛酸修飾的銀納米簇,具有熒光性,最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長分別為430nm和640nm。該熒光可被半胱胺分子猝滅,因此通過其熒光在猝滅前后的變化可以確定半胱胺的濃度。
[0007]本發(fā)明的具體技術方案是:一種新型的基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,首先合成硫辛酸修飾的銀納米簇。合成的銀納米簇采用Chem.Mater.2010,22,4364 - 4371所述的合成方法,略有修改。所合成的銀納米簇大小為l_3nm,最大激發(fā)波長為430nm,最大發(fā)射波長為640nm,熒光量子效率為1.7%。合成具體操作方法為:51.5mg硫辛酸粉末溶解于有19mL超純水中的小燒瓶中,4.8mg硼氫化鈉固體加入燒瓶中,硫辛酸與NaBH4的摩爾比為2:1,攪拌反應15min。加入lmL25mM的硝酸銀溶液,繼續(xù)攪拌5min,加入過量的硼氫化鈉95mg,,繼續(xù)攪拌反應120min。反應中硼氫化鈉、硫辛酸、硝酸銀的摩爾比為為100:10:1。合成的熒光銀納米簇溶液避光4°C保存。其檢測方法依次包括以下步驟:
[0008]1)合成的熒光銀納米簇原液稀釋400倍,取990 U L作為探針溶液。分別向探針溶液中加入10 U L含不同濃度半胱胺的血清樣品,反應5分鐘。半胱胺濃度范圍是5-120 u M0用熒光檢測儀測定混合反應后的銀納米簇溶液與空白對照組的熒光強度比,做出熒光強度比與半胱胺濃度的線性關系圖。
[0009]2)合成的熒光銀納米簇原液稀釋400倍,取990 ii L作為探針溶液。加入1OyL含未知濃度半胱胺的血清溶液,反應5分鐘后,測得反應后的銀納米簇溶液與空白對照組的熒光強度比。根據(jù)步驟2)中的關系圖計算得出血清樣品中半胱胺的濃度。
[0010]本發(fā)明對半胱胺分子有著很好的專一識別能力,操作簡單,反應迅速,樣品需求量少,并且檢測靈敏度較高。
【【專利附圖】
【附圖說明】】
[0011]圖1:熒光銀納米簇溶液的激發(fā)以及發(fā)射圖。
[0012]圖2:稀釋10倍的熒光銀納米簇溶液加入ImM半胱胺水溶液后熒光強度的變化。
[0013]圖3:銀納米簇溶液分別500 PM待測物的半胱胺,半胱氨酸,谷胱甘肽,縱坐標為加入待測物之后的熒光F和加入之前的熒光Ftl的比值。
[0014]圖4:加入不同濃度半胱胺血清樣品后銀納米簇溶液的熒光強度變化。
[0015]圖5:加入不同濃度半胱胺之后的熒光和加入之前的熒光的比值F/匕與半胱胺濃度的線性關系曲線。
【【具體實施方式】】
[0016]以下實例將結合附圖對本發(fā)明做進一步闡述,以便為更好的理解本發(fā)明提供依據(jù)。
[0017]實施例1專一性試驗
[0018]分別配置500 PM的半胱胺、半胱氨酸、谷胱甘肽水溶液,各取0.5mL分別加入到
0.5mL稀釋10倍的熒光銀納米簇溶液,混勻反應5min。如圖3可見只有加入半胱胺溶液,銀納米簇溶液的熒光才會消失。半胱氨酸和谷胱甘肽幾乎對銀納米簇的熒光沒有影響。這說明半胱氨酸,谷胱甘肽這些生物體中常見的半胱胺類似物不會對測定造成干擾,因此本方法的專一性比較好。
[0019]實施例2檢測范圍及線性關系的測定
[0020]分別配制0、5、10、20、40、60、80、100、120iiM的半胱胺牛血清溶液,分別取IOuL加入到990 u L稀釋400倍的銀納米簇溶液中,混勻反應5min,熒光檢測儀測其反應后的熒光強度F,加入不含半胱胺的牛血清反應后的熒光強度為匕。具體熒光檢測設置的參數(shù)為激發(fā)430nm,掃描速度1200nm/min,激發(fā)寬度10nm,發(fā)射寬度20nm。做出F/匕與半胱胺濃度的關系圖,如圖5所示。可知半胱胺濃度為5 — 120UM時,線性關系較好,線性回歸方程為 F/F0=-0.0067c+l.0064,c 為半胱胺濃度,R2 為 0.9986。
[0021]本方法可用于檢測實際血清樣品中半胱胺的濃度,回收率如表1所示。
[0022]表1`
[0023]
【權利要求】
1.一種基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,其特征在于合成的硫辛酸修飾的銀納米簇的熒光可被半胱胺分子猝滅,因此通比較過猝滅前后的熒光變化來測定半胱胺的濃度;測定半胱胺濃度通過以下步驟來實現(xiàn): 步驟1:向熒光銀納米簇溶液中加入含有已知濃度半胱胺的血清溶液,用熒光檢測儀測定混合反應后的溶液與空白對照組的熒光強度比,做出熒光強度比與半胱胺濃度的關系圖; 步驟2:向熒光銀納米簇溶液加入半胱胺濃度待測的血清溶液,測得其與空白對照組的熒光強度比,根據(jù)步驟I中的關系圖計算得出待測的血清溶液中半胱胺溶液的濃度。
2.如權利要求1中所述基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,其特征在于在半胱胺濃度測定中,熒光銀納米簇溶液為原液稀釋400倍,體積為990 u L0
3.如權利要求1中所述基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,其特征在于,在半胱胺濃度測定中,待測的血清溶液中半胱胺濃度的適用范圍為5—120 ii M,體積為10 u L0
4.如權利要求1中所述基于熒光銀納米簇的檢測血清中半胱胺的方法,其特征在于在半胱胺濃度測定中,待測的血清溶液與熒光銀納米簇溶液反應時間為5分鐘,反應溫度為室溫。
【文檔編號】G01N21/64GK103630521SQ201310652621
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權日:2013年12月5日
【發(fā)明者】蘇磊, 薛峰, 舒桐, 張學記 申請人:北京科技大學