一種半夏藥材的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種藥材的檢測方法，具體涉及一種半夏藥材的生物堿含量、農藥殘留量的檢測方法。其特征在于該方法包括如下測定，生物堿的測定：取待測樣品用氯仿萃取作為供試品溶液，取鹽酸麻黃堿制成對照品溶液，紫外分析測定吸光值進行比較計算；農藥殘留量的測定：首先用乙腈保護制備對照品溶液，用丙酮超聲處理、GPC凝膠滲透色譜凈化、環乙烷-乙酸乙酯洗脫制備供試品溶液，再采用氣相色譜-質譜聯用法同時測定半夏藥材中多種農藥殘留，最后進行濃度計算。本發明解決了傳統理化特性的鑒別方法的操作復雜和局限性的技術問題，并且檢測方法準確度高，操作簡便，成本低廉，具有良好的應用前景和經濟效益。
【專利說明】一種半夏藥材的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥材質量檢測領域，具體涉及一種半夏藥材的質量檢測方法。
【背景技術】
[0002] 半夏藥材是來源于天南星科植物半夏的干燥塊莖，呈類球形，有的稍偏斜少數為 長遠球形，直徑1-1. 5cm ;表面呈白色或淺黃色。頂端有凹陷的莖痕，周圍密布麻點狀根痕； 下面鈍圓，較光滑；質堅實，斷面潔白，富粉性，粉末嗅之嗆鼻；氣微，味辛辣、麻舌而刺喉。 半夏具有燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結之功效。主要用于治療濕痰冷飲，嘔吐，反胃，咳喘 痰多，胸膈脹滿，痰厥頭痛，頭暈不眠，外消癰腫等癥，是我國的傳統大宗藥物。半夏含多種 化學成分，主要含有機酸、生物堿、半夏蛋白、揮發油、氨基酸、淀粉等。現代研究表明半夏含 有的成分具有廣泛的生理活性作用，其中生物堿的含量與半夏的鎮吐、止咳功效密切相關， 因此所含生物堿含量的多少常作為半夏藥材質量控制的重要指標。
[0003] 近幾年半夏的市場需求量持續增加，野生資源逐年減少，人工栽培發展緩慢，使得 半夏資源蘊藏量和產量都在大幅下降。導致市場上出現了很多偽品，其中不少偽品的農藥 殘留量超標爆表，給半夏藥材的質量、用藥的安全性及有效性帶來了很大的沖擊，已成為制 約半夏系列藥材開發的瓶頸。
[0004] 目前，正品半夏的有效檢測方法是傳統的形態特征和理化特性的鑒別方法，具有 一定的局限性，不足以從整體上控制半夏的質量，作為一味臨床常用中藥，其真偽優劣受其 理化指標、農藥殘留量多等諸多因素的影響，因此有必要建立一種科學的質量檢測方法對 半夏的質量進行評價。
【發明內容】
[0005] 為此，本發明所要解決的技術問題在于現有技術中半夏藥材檢測方法復雜，質量 難以調控的問題，進而提供一種準確度高，簡單、快速的檢測半夏藥材的方法。
[0006] 為解決上述技術問題，本發明是通過如下技術方案實現的：
[0007] 本發明提供了一種半夏藥材的檢測方法，包括總生物堿的含量測定步驟以及農藥 殘留量的測定步驟，其中：
[0008] A :所述總生物堿含量的測定包括如下步驟：
[0009] (1)稱取100-1KTC干燥至恒重的鹽酸麻黃堿2. 10mg，置于100mL容量瓶，加水 至刻度并搖勻，得濃度為每lml含鹽酸麻黃堿21. 0 μ g的溶液；分別精密量取上述溶液1、 2、3、4、5mL，各加水至5mL，并依次精密加入pH值5. 40的緩沖液5mL、體積分數0· 05%的溴 麝香草酚藍標準液lmL、以及氯仿10mL，振搖并靜置至分層穩定，分別取各樣品的氯仿層備 用，作為標準樣品；
[0010] 另精密取5mL去離子水，依次精密加入pH值5. 40的緩沖液5mL、體積分數0. 05% 的溴麝香草酚藍標準液lmL、以及氯仿10mL，振搖并靜置至分層穩定，取氯仿層備用，作為 空白對照樣品；
[0011] 取上述各標準樣品及空白對照樣品，于414nm波長下進行紫外分光光度檢測，以 鹽酸麻黃堿濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準回歸方程；
[0012] (2)精密稱取干燥至恒重的待測藥材粉末0. 3g，加濃氨水0. 5mL，氯仿10mL，冷浸 2?4小時后，冰浴超聲提取1?2小時，過濾收集含總生物堿的濾液；另取10mL氯仿分3 次分別為4、3、3mL對過濾得到的殘渣進行洗滌，過濾合并濾液，并于80°C下回收氯仿層并 蒸干，得到供試品提取物，備用；
[0013] 取分液漏斗依次精密加入pH為5. 40的緩沖濟液5mL、體積分數為0. 05 %的溴麝 香草酚藍濟液lmL、以及水5mL混勻；并分別精密量取10mL氯仿分3次分別為4、3、3mL依 次將所述備用供試品提取物轉入所述分液漏斗，振搖并靜置至分層穩定，取氯仿層作為供 試品；
[0014] 以步驟（1)中的所述空白對照樣品為對照，于414nm波長下進行紫外分光光度檢 測，測定其吸光度，并計算所述供試品的總生物堿含量；
[0015] B :所述農藥殘留量的測定包括如下步驟：
[0016] (1)精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每1ml含100 μ g三苯基磷酸酯的溶 液，作為內標貯備液；
[0017] 分別精密量取各農藥對照品貯備溶液1ml及所述內標貯備液1ml，加丙酮定容至 100ml，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不 同濃度的溶液，作為混合對照品溶液；
[0018] 另取核糖酸內酯適量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸內酯的溶液，另取山 梨醇適量，加水溶解制成每lml含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內酯、山梨 醇溶液各lml混勻，加乙腈定容至10ml，作為分析保護劑；
[0019] (2)精密稱取待測藥材細粉10g，并加入氯化鈉 lg混勻，精密加入丙酮100ml，冰 浴超聲處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有lg無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30 分鐘；隨后精密量取上述溶液60ml減壓濃縮至近干，并加入體積比為1 :1的環已烷-乙酸 乙酯溶液溶解樣品并定容至l〇ml，過濾后取濾液經GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1 : 1的環已烷-乙酸乙酯溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干；
[0020] 向上述樣品中加入體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并轉移至 石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗 脫，收集洗脫液，氮吹至近干，隨后加入所述內標貯備液5μ 1，加乙腈定容至lml，作為供試 品溶液；
[0021] (3)精密量取上述各濃度混合對照品溶液及供試品溶液各400 μ L，并分別加入所 述分析保護劑1〇〇 μ L混勻，隨后分別精密吸取1 μ L，進行氣相色譜-質譜聯用儀測定；其 中，
[0022] 所述氣相色譜分析條件為：取規格為30mX0. 25mmX0. 25um的彈性石英毛細管柱 DB17ms，以高純氦氣為載氣，柱流速1. 3ml/分鐘，進樣量1 μ 1，采用高壓不分流進樣，設置 進樣口溫度為230°C，升溫程序具體為：初始溫度60°C，以30°C /分鐘升至120°C、以10°C / 分鐘升至200°C、以2°C /分鐘升至230°C、以30°C /分鐘升至300°C，并保持7分鐘；
[0023] 所述EI源質譜測定的條件為：設置電子能量70eV，離子源溫度230°C，接口溫度 250。。。
[0024] 其中，所述農藥殘留量的測定中，所述GPC凝膠滲透色譜凈化步驟的條件具體為： 填料為Bio-Beads S-X3200?400目，凈化柱為2. 5mmX 40cm，具體洗脫參數為凈化去雜 900s，目標物收集1200s，柱子清洗300s。
[0025] 所述農藥殘留量的測定中，所述農藥對照品包括敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四 氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化樂果、二嗪磷、五 氯硝基苯、久效磷、地蟲硫磷、磷胺I、樂果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏劑、克 菌丹、磷胺II、甲基對硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜靈、三唑酮、毒死蜱、馬拉 硫磷、殺螟硫磷、對硫磷、二甲戊靈、順式環氧七氯、反式環氧七氯、三唑醇Α、三唑醇Β、反式 氯丹、順式硫丹、順式氯丹、反式硫丹、PP' -DDE、PP' -DDD、OP' -DDT、PP' -DDT、狄氏劑、殺撲 磷、異狄氏劑、乙硫磷、三苯基磷酸酯、聯苯菊酯、硫丹硫酸酯、異菌脲、甲氰菊酯、三氯殺螨 醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯殺螨砜、伏殺硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、 溴氰菊酯。
[0026] 所述總生物堿含量的測定中，所述緩沖液為pH為5. 40的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖 液。
[0027] 進一步的，所述總生物堿含量的測定中，所述待測藥材的粒徑為180-2000 μ m。
[0028] 更進一步的，所述農藥殘留量的測定中，所述待測藥材的粒徑為180-2000 μ m。
[0029] 本發明所述方法通過對半夏藥材所含的總生物堿含量的測定以及對半夏藥材農 藥殘留量的檢測，進行半夏藥材真偽優劣的判定標準。并通過紫外分光光度計檢測法測定 總生物堿的含量，所述方法不僅準確且簡單易行。本發明所述方法通過氣相色譜-質譜聯 用的方式檢測藥材的殘留農藥量，不僅檢測的準確度高，方法簡單、快速，而且通過對檢測 條件的特定篩選，可一次性將半夏藥材中常見的農藥種類進行一次性的有效檢測，所述方 法準確率及實用效果均較好。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0030] 為了使本發明的內容更容易被清楚的理解，下面根據本發明的具體實驗例并結合 附圖，對本發明作進一步詳細的說明，其中：
[0031] 圖1是本發明說明書中農藥標準品氣相色譜圖（全掃描）；
[0032] 圖2是本發明說明書中農藥標準品氣相色譜圖（0-10分鐘掃描）；
[0033] 圖3是本發明說明書中農藥標準品氣相色譜圖（10-20分鐘全掃描）；
[0034] 圖4是本發明說明書中農藥標準品氣相色譜圖（20-40分鐘全掃描）。
【具體實施方式】
[0035] 實施例1總生物堿的測定
[0036] 1儀器與試藥
[0037] 1. 1儀器UV-1601型可見紫外分光光度計（日本島津）；KQS0B超聲波清洗機（昆 山市超聲儀器有限公司）；梅特勒-托利多Delter320型pH計。
[0038] 1. 2試劑鹽酸麻黃堿對照品（中國食品藥品檢定研究院批號0714-2006);溴麝香 草酚藍標準液，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH = 5. 40)。其他試劑均為分析純。
[0039] 1. 3供試藥材
[0040] 藥材產地如下：甘肅天水野生（未剝皮）、甘肅天水野生半夏、甘肅天水1、甘肅天 水2、甘肅天水3、甘肅西和1、甘肅西和2、甘肅西和3、甘肅武都、甘肅徽縣、云南、貴州、江 西、湖北。
[0041] 2.實驗方法
[0042] 2. 1對照品溶液制備及線性關系考察稱取105°C干燥至恒重的鹽酸麻黃堿2. 10mg 置于100mL容量瓶，加水至刻度，搖勻，得濃度為每lml含鹽酸麻黃堿21. Oyg溶液。分別 精密量取上述濟液1、2、3、4和5mL的溶液，各加水至5mL，加入pH = 5. 40緩沖液5mL，再 依次精密加入0. 05%溴麝香草酚藍標準液lmL，氯仿10mL，振搖lmin，放置分層，靜置1小 時，分別取氯仿層備用。另精密取5mL去離子水以同樣的方法操作制備空白對照液。在波 氏414nm處測定氯仿液，以鹽酸麻黃堿濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，進行回歸得回歸方 程為 A = 0· 087C-0. 0967，r = 0· 9990(n = 3)。表明鹽酸麻黃堿溶液在 2. 10 ?10. 50μ g/ mL呈良好的線性關系。
[0043] 2. 2供試液的制備精密稱取干燥至恒重（過三篩的）粉末0· 160g，加濃氨水 0. 5mL，氯仿10mL，冷浸3小時后，冰浴超聲提取1小時，濾過，殘渣以10mL氯仿分3次（4、 3、3mL)洗滌濾過，合并濾液，80°C下回收氯仿，并蒸干，取分液漏斗依次精密加入pH = 5. 40 緩沖溶液5mL0. 05%溴麝香草酚藍濟液mL，水5mL，精密量取氯仿10mL分3次（4、3、3mL)將 樣品提取物轉入分液漏斗振搖lmin，靜置1小時后，分取氯仿層在波長414nm處進行測定吸 光度。
[0044] 2. 3計算取供試液及空白對照照液，在波長414nm分別測定其吸光度，并按含量 (%)= CX 10-6/(WX稀釋因子）X 100%，稀釋因子=1/10,計算含量，結果見表1所示。
[0045] 表1總生物堿測定結果（％ )
[0046]
[0047]
【權利要求】
1. 一種半夏藥材的檢測方法，其特征在于，該方法包括如下總生物堿的含量測定步驟 以及農藥殘留量的測定步驟，其中， A :所述總生物堿含量的測定包括如下步驟： (1) 稱取100-1KTC干燥至恒重的鹽酸麻黃堿2. 10mg，置于lOOmL容量瓶，加水至刻度 并搖勻，得濃度為每lml含鹽酸麻黃堿21. 0 μ g的溶液；分別精密量取上述溶液1、2、3、4、 5mL，各加水至5mL，并依次精密加入pH值5. 40的緩沖液5mL、體積分數0. 05 %的溴麝香草 酚藍標準液lmL、以及氯仿10mL，振搖并靜置至分層穩定，分別取各樣品的氯仿層備用，作 為標準樣品； 另精密取5mL去離子水，依次精密加入pH值5. 40的緩沖液5mL、體積分數0. 05%的溴 麝香草酚藍標準液lmL、以及氯仿10mL，振搖并靜置至分層穩定，取氯仿層備用，作為空白 對照樣品； 取上述各標準樣品及空白對照樣品，于414nm波長下進行紫外分光光度檢測，以鹽酸 麻黃堿濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準回歸方程； (2) 精密稱取干燥至恒重的待測藥材粉末0. 3g，加濃氨水0. 5mL，氯仿10mL，冷浸2? 4小時后，冰浴超聲提取1?2小時，過濾收集含總生物堿的濾液；另取10mL氯仿分3次分 別為4、3、3mL對過濾得到的殘渣進行洗滌，過濾合并濾液，并于80°C下回收氯仿層并蒸干， 得到供試品提取物，備用； 取分液漏斗依次精密加入pH為5. 40的緩沖濟液5mL、體積分數為0. 05 %的溴麝香草 酚藍濟液lmL、以及水5mL混勻；并分別精密量取10mL氯仿分3次分別為4、3、3mL依次將所 述備用供試品提取物轉入所述分液漏斗，振搖并靜置至分層穩定，取氯仿層作為供試品； 以步驟（1)中的所述空白對照樣品為對照，于414nm波長下進行紫外分光光度檢測，測 定其吸光度，并計算所述供試品的總生物堿含量； B :所述農藥殘留量的測定包括如下步驟： (1) 精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每lml含100 μ g三苯基磷酸酯的溶液，作 為內標貯備液； 分別精密量取各農藥對照品貯備溶液lml及所述內標貯備液lml，加丙酮定容至 100ml，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不 同濃度的溶液，作為混合對照品溶液； 另取核糖酸內酯適量，加乙腈溶解制成每lml含20mg核糖酸內酯的溶液，另取山梨醇 適量，加水溶解制成每lml含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內酯、山梨醇溶 液各lml混勻，加乙腈定容至10ml，作為分析保護劑； (2) 精密稱取待測藥材細粉10g，并加入氯化鈉 lg混勻，精密加入丙酮100ml，冰浴超聲 處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有lg無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30分鐘； 隨后精密量取上述溶液60ml減壓濃縮至近干，并加入體積比為1 :1的環已烷-乙酸乙酯溶 液溶解樣品并定容至l〇ml，過濾后取濾液經GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1 :1的環 已烷-乙酸乙酯溶液為流動相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干； 向上述樣品中加入體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并轉移至石墨 碳-氨基混合固相萃取小柱上，以體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脫，收集 洗脫液，氮吹至近干，隨后加入所述內標貯備液5μ 1，加乙腈定容至lml，作為供試品溶液； (3)精密量取上述各濃度混合對照品溶液及供試品溶液各400 μ L，并分別加入所述分 析保護劑1〇〇 μ L混勻，隨后分別精密吸取1 μ L，進行氣相色譜-質譜聯用儀測定；其中， 所述氣相色譜分析條件為：取規格為30mX0. 25mmX0. 25um的彈性石英毛細管柱 DB17ms，以高純氦氣為載氣，柱流速1. 3ml/分鐘，進樣量1 μ 1，采用高壓不分流進樣，設置 進樣口溫度為230°C，升溫程序具體為：初始溫度60°C，以30°C /分鐘升至120°C、以10°C / 分鐘升至200°C、以2°C /分鐘升至230°C、以30°C /分鐘升至300°C，并保持7分鐘； 所述EI源質譜測定的條件為：設置電子能量70eV，離子源溫度230°C，接口溫度 250。。。
2. 根據權利要求1所述的半夏藥材的檢測方法，其特征在于，所述農藥殘留量的測定 中，所述GPC凝膠滲透色譜凈化步驟的條件具體為：填料為Bio-Beads S-X3200?400目， 凈化柱為2. 5mmX 40cm，具體洗脫參數為凈化去雜900s，目標物收集1200s，柱子清洗300s。
3. 根據權利要求1或2所述的半夏藥材的檢測方法，其特征在于，所述農藥殘留量的測 定中，所述農藥對照品包括敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α -六六六、 β_六六六、六六六、δ-六六六、氧化樂果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地蟲硫磷、磷 胺I、樂果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏劑、克菌丹、磷胺II、甲基對硫磷、甲 基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜靈、三唑酮、毒死蜱、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對硫磷、二甲 戊靈、順式環氧七氯、反式環氧七氯、三唑醇Α、三唑醇Β、反式氯丹、順式硫丹、順式氯丹、反 式硫丹、PP' _DDE、PP' -DDD、0P' -DDT、PP' -DDT、狄氏劑、殺撲磷、異狄氏劑、乙硫磷、三苯基磷 酸酯、聯苯菊酯、硫丹硫酸酯、異菌脲、甲氰菊酯、三氯殺螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯殺 螨砜、伏殺硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
4. 根據權利要求1-3任一所述的半夏藥材的檢測方法，其特征在于，所述總生物堿含 量的測定中，所述緩沖液為pH為5. 40的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
5. 根據權利要求1-4任一所述的半夏藥材的檢測方法，其特征在于，所述總生物堿含 量的測定中，所述待測藥材的粒徑為180-2000 μ m。
6. 根據權利要求1-4任一所述的半夏藥材的檢測方法，其特征在于，所述農藥殘留量 的測定中，所述待測藥材的粒徑為180-2000 μ m。
【文檔編號】G01N30/02GK104267111SQ201410375377
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】宋平順, 李波, 韓斌, 陳杰, 李登鵬, 趙建邦, 李士博, 李冬華, 張明童 申請人:甘肅中天藥業有限責任公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
