膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法
【專利摘要】膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法，它涉及甘膽酸測定試劑盒【技術領域】，它的制備方法為：生產設備準備；生產：生產前準備；生產線清場；生產操作者穿戴防護用品；測定所用純化水電導率；名稱正確、批號為指定使用者、原料物態正常；預稱；預稱容器上有下列內容的標簽；核對稱取的原料量；將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上；產品配制；分裝；組裝。它適用于批量包裝甘膽酸液體雙試劑生產全過程，采用親水性納米膠乳顆粒，試劑更穩定；采用高純度特異性單克隆甘膽酸抗體，準確性高，可以區分膽酸和其它結合膽汁酸，測定血清中真正的甘膽酸水平，適合臨床孕婦產前健康普查，標本量很大，經濟和社會效益明顯。
【專利說明】膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及甘膽酸測定試劑盒【技術領域】，具體涉及一種膠乳增強免疫比濁法甘膽 酸測定試劑盒的制備方法。
【背景技術】：
[0002] 甘膽酸（cholyglycine，CG)是膽酸和甘氨酸結合而成的結合膽酸。是主要膽酸之 一，膽酸（CA)和鶴去氧膽酸（CDCA)總稱膽汁酸。在血清中主要W蛋白結合形式存在。肝臟 是膽汁酸合成的唯一器官。CG在肝細胞合成，經膽管排入膽囊膽存，餐后膽囊收縮，隨同膽 汁排入小腸，參與脂肪的消化吸收，95%的膽酸由小腸粘膜重吸收入血，經口靜脈輸送至肝 臟由肝細胞攝取。正常情況下，肝臟能有效攝取口靜脈血中99%W上的CG重新泌入膽汁， 僅有1% CG溢入體循環。當肝細胞受損時，肝細胞不能有效攝取經腸肝循環達肝臟的CG， 致使血中CG含量增高；膽汁齡滯時，肝臟排泄膽酸發生障礙而返流入血循環中，也可使血 中CG含量增高。臨床證明；肝損傷的生化指標中CG比谷丙轉氨酶，膽紅素等試驗更敏感。
[0003] 1、甘膽酸是評價肝細胞功能及其肝膽系統循環功能的敏感指標，其診斷價值優于 現有常規肝功能實驗，可W在臨床上起到決定性作用。
[0004] 正常成人無論是空腹還是餐后，其甘膽酸濃度均穩定在低水平，而在急性肝炎、肝 硬化、慢性遷延性（活動性）肝炎、肝癌、膽囊炎W及膽汗癒滯患者甘膽酸濃度均有不同程 度的增高，升高的陽性率均在80% W上；尤其當彌漫性肝實質損害時，其濃度高低與肝臟 病變范圍及程度密切相關，可作為肝硬化早期診斷的一項靈敏指標。究其原因是由于在肝 硬化患者血清白蛋白水平降低，n體分流W及對甘膽酸清除率的降低，從而導致肝硬化患 者血中甘膽酸值增高。
[0005] 2、妊娠期肝內膽汁齡積癥（IC巧是妊娠期特有的并發癥，常發生于妊娠中晚期， 臨床上W皮膚瘦癢及肝內膽汁齡積為指標特征。由于ICP可引起早產、胎兒窘迫、死胎、新 生兒死亡及產后出血，故被列為高危妊娠而逐漸引起人們的重視。
[0006] 血清甘膽酸測定是診斷孕產婦ICP最敏感最特異的唯一指標，并且可對妊娠期肝 內不同膽汁齡積程度進行動態跟蹤。因此建議將血清甘膽酸測定作為孕婦產前檢查的常規 項目。
[0007] 3、由于小腸在甘膽酸代謝過程中（肝腸循環）有著非常重要的作用，因此腸道功 能的變化可引起甘膽酸結果異常。是現有所有診斷指標中唯一反映腸道功能的指標。
[0008] 綜上所述，研制出一種高效的甘膽酸試劑盒是十分必要的。
【發明內容】
：
[0009] 本發明的目的是提供一種膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法，它 適用于批量包裝甘膽酸液體雙試劑生產全過程，采用親水性納米膠乳顆粒，試劑更穩定；采 用高純度特異性單克隆甘膽酸抗體，準確性高，可W區分膽酸和其它結合膽汁酸，測定血清 中真正的甘膽酸水平，適合臨床孕婦產前健康普查，標本量很大，經濟和社會效益明顯。
[0010] 為了解決【背景技術】所存在的問題，本發明是采用W下技術方案：它的制備方法 為：
[0011] 1、生產設備準備：混合容器：容積大于試劑生產體積的高密度聚己帰桶4只；攬拌 器：攬拌涂四氣己帰的慢速電動攬拌器；稱量設備；精度±0. OOOl克的天平1臺；聚己帰容 器：預稱原料用，有密封蓋，2只；原料稱量用勺、伊；PH計，定標緩沖液，具有溫度補償功能 的PH計和相應的定標液；儀器，日立7060全自動生化分析儀；過濾設備，孔徑5 y m專用； 標簽；用于原材料稱量，標明原料名稱、重量等；標牌；用于標示；1-混合容器；2-整批待檢 產品容器。
[0012] 所述的標牌內容：產品代碼、產品名稱、批號、生產日期、過濾日期和操作者簽名。
[0013] 2、生產；生產前準備；所有生產設備必須清潔；生產線清場；生產場地僅放置本批 量包裝試劑生產用品；生產操作者穿戴防護用品：清潔工作服、戴口罩、防護眼鏡、乳膠手 套或一次性手套和發罩；核對各種生產運行單；測定所用純化水電導率，應小于2. Oy s/ cm ;原料包裝的核對：名稱正確、批號為指定使用者、原料物態正常；預稱；所有原料都 必須預稱，并由第二人核對；預稱容器上有下列內容的標簽；容器號、原料代碼、批號、容 器和蓋的皮重、原料凈重、預稱者簽名/日期、核對者簽名/日期；按規定的計算量稱取 Trisl2. 114g，甘膽酸抗體乳膠顆粒息濁液2. 5ml并密封容器蓋；核對稱取的原料量；總重 量（原料+容器）=原料凈重+皮重；將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上。
[0014] 3、產品配制；混合容器和攬棒的準備；混合容器和攬棒用自來水沖洗5次；混合容 器和攬棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒干密封裝袋備用；將電動攬拌機裝配到混合容 器上；在混合容器上標簽，標明產品代碼、批號、名稱、生產量、日期和操作者；在混合容器 A、B中加入生產總量90 %的純化水；在混合容器A中加入Trisl2. 1 Hg,攬拌至完全溶解； 補純化水至生產總量比，然后用Imol/L的化OH溶液調PH值至7. 2(2(TC );用專用濾器將 上述混合溶液過濾入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘膽酸抗體乳膠顆粒息濁液 2. 5ml，攬拌至完全混合，然后補純化水至生產總量250ml ;用專用濾器將上述混合溶液過 濾入另一混合容器D中；從混合容器C中取出1份80ml樣品，從容器D中取出1份20ml樣 品，作下列過程試劑：
[00巧]a)空白吸光度（37°C，600nm) :< 1. 2A ;
[0016] b)從混合容器中抽樣進行半成品抽樣全檢；
[0017] 如不符合規格，報告給生產車間技術人員；如符合規格，將測定數據記錄在半成品 檢驗報告單中，并將大包裝產品密封后送入2-8C冷庫。
[0018] 4、分裝；生產環境；分裝過程在十萬級凈化區內進行，溫度IOC -26 C，濕度 45% -65% ;分裝前清場，領取經檢測合格的半成品試劑，核對領取的試劑批號是否與計劃 單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現混濁、沉淀或顏色變化應停止分裝；領取物料： 根據生產計劃領取要求型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工具、設備；分裝過程：
[0019] 4.1根據分裝機型分裝：
[0020] 4. 1. 1稱瓶重：按計劃數量準備瓶，稱量每十個試劑瓶的重量，要求用于分裝同一 批號試劑的瓶子重量相差不超過0. 5g，擺瓶；
[0021] 4. 1. 2分裝；使用蠕動粟進行分裝，過程中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示 裝量；
[0022] 4. I. 3逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進入下一工序；分裝后貼標簽：將 檢查并經過核實的標簽貼在試劑瓶上；檢查；檢查分裝瓶數、試劑裝量、漏液情況、貼簽情 況、記錄填寫情況；清場；對生產現場進行清場，并填寫記錄。
[0023] 5、組裝；領料；根據生產計劃領取組裝膜島素雙試劑所需的說明書、紙盒、封簽、 合格證等物料，紙盒在組裝前應先折好成型；半成品檢查；將半成品逐瓶檢查；組裝；將裝 好的試劑盒合上蓋子，貼上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離；組裝完成 后，QA進行成品取樣，每個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質量的檢查、再由QC進行內在 質量的檢查；清場，并填寫生產記錄；做好半成品、成品的入、出庫手續；如半成品不能及時 組裝出庫，應按半成品膽存要求膽存。
[0024] 通過H批產品的試生產，W上工藝能夠滿足產品生產需求。
[0025] 本發明的原理為；采用的技術原理是利用抗原抗體反應原理測定甘膽酸的含量。 標本中的甘膽酸與試劑中相應的甘膽酸抗體膠乳顆粒特異性反應，結合成抗原抗體復合 物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的甘膽酸含量成正比，測定該 濁度，與甘膽酸標準曲線比較，即能得出標本中甘膽酸含量。免疫比濁測定中抗原濃度與吸 光度之間的線性主要取決于抗體活性、反應體系和抗體抗原的比例H個方面，所W反應體 系的研究包括樣本及試劑的上樣量、稀釋倍數，反應時間，測定波長等等反應條件的摸索。
[0026] 本發明適用于批量包裝甘膽酸液體雙試劑生產全過程，采用親水性納米膠乳顆 粒，試劑更穩定；采用高純度特異性單克隆甘膽酸抗體，準確性高，可W區分膽酸和其它結 合膽汁酸，測定血清中真正的甘膽酸水平，適合臨床孕婦產前健康普查，標本量很大，經濟 和社會效益明顯。
【具體實施方式】：
[0027] 本【具體實施方式】采用W下技術方案；它的制備方法為：
[0028] 1、生產設備準備：混合容器；容積大于試劑生產體積的高密度聚己帰桶4只；攬拌 器：攬拌涂四氣己帰的慢速電動攬拌器；稱量設備：精度±0. OOOl克的天平1臺；聚己帰容 器：預稱原料用，有密封蓋，2只；原料稱量用勺、伊；PH計，定標緩沖液，具有溫度補償功能 的PH計和相應的定標液；儀器，日立7060全自動生化分析儀；過濾設備，孔徑5 U m專用； 標簽；用于原材料稱量，標明原料名稱、重量等；標牌；用于標示；1-混合容器；2-整批待檢 產品容器。
[0029] 所述的標牌內容：產品代碼、產品名稱、批號、生產日期、過濾日期和操作者簽名。
[0030] 2、生產；生產前準備；所有生產設備必須清潔；生產線清場；生產場地僅放置本批 量包裝試劑生產用品；生產操作者穿戴防護用品：清潔工作服、戴口罩、防護眼鏡、乳膠手 套或一次性手套和發罩；核對各種生產運行單；測定所用純化水電導率，應小于2. Oy s/ cm ;原料包裝的核對：名稱正確、批號為指定使用者、原料物態正常；預稱；所有原料都 必須預稱，并由第二人核對；預稱容器上有下列內容的標簽：容器號、原料代碼、批號、容 器和蓋的皮重、原料凈重、預稱者簽名/日期、核對者簽名/日期；按規定的計算量稱取 Trisl2. 114g，甘膽酸抗體乳膠顆粒息濁液2. 5ml并密封容器蓋；核對稱取的原料量；總重 量（原料+容器）=原料凈重+皮重；將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上。
[0031] 3、產品配制；混合容器和攬棒的準備；混合容器和攬棒用自來水沖洗5次；混合容 器和攬棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒干密封裝袋備用；將電動攬拌機裝配到混合容 器上；在混合容器上標簽，標明產品代碼、批號、名稱、生產量、日期和操作者；在混合容器 A、B中加入生產總量90 %的純化水；在混合容器A中加入Trisl2. 114g，攬拌至完全溶解； 補純化水至生產總量比，然后用Imol/L的化OH溶液調PH值至7. 2 (2(TC );用專用濾器將 上述混合溶液過濾入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘膽酸抗體乳膠顆粒息濁液 2. 5ml，攬拌至完全混合，然后補純化水至生產總量250ml ;用專用濾器將上述混合溶液過 濾入另一混合容器D中；從混合容器C中取出1份80ml樣品，從容器D中取出1份20ml樣 品，作下列過程試劑：
[0032] a)空白吸光度（37°C，600nm) :< 1. 2A ;
[0033] b)從混合容器中抽樣進行半成品抽樣全檢；
[0034] 如不符合規格，報告給生產車間技術人員；如符合規格，將測定數據記錄在半成品 檢驗報告單中，并將大包裝產品密封后送入2-8C冷庫。
[00巧]4、分裝；生產環境；分裝過程在十萬級凈化區內進行，溫度IOC -26 C，濕度 45% -65% ;分裝前清場，領取經檢測合格的半成品試劑，核對領取的試劑批號是否與計劃 單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現混濁、沉淀或顏色變化應停止分裝；領取物料： 根據生產計劃領取要求型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工具、設備；分裝過程：
[0036] 4. 1根據分裝機型分裝：
[0037] 4. 1. 1稱瓶重：按計劃數量準備瓶，稱量每十個試劑瓶的重量，要求用于分裝同一 批號試劑的瓶子重量相差不超過0. 5g，擺瓶；
[0038] 4. 1. 2分裝；使用蠕動粟進行分裝，過程中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示 裝量；
[0039] 4. 1. 3逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進入下一工序；分裝后貼標簽：將 檢查并經過核實的標簽貼在試劑瓶上；檢查；檢查分裝瓶數、試劑裝量、漏液情況、貼簽情 況、記錄填寫情況；清場；對生產現場進行清場，并填寫記錄。
[0040] 5、組裝；領料；根據生產計劃領取組裝膜島素雙試劑所需的說明書、紙盒、封簽、 合格證等物料，紙盒在組裝前應先折好成型；半成品檢查；將半成品逐瓶檢查；組裝；將裝 好的試劑盒合上蓋子，貼上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離；組裝完成 后，QA進行成品取樣，每個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質量的檢查、再由QC進行內在 質量的檢查；清場，并填寫生產記錄；做好半成品、成品的入、出庫手續；如半成品不能及時 組裝出庫，應按半成品膽存要求膽存。
[0041] 通過H批產品的試生產，W上工藝能夠滿足產品生產需求。
[0042] 本【具體實施方式】的原理為；采用的技術原理是利用抗原抗體反應原理測定甘膽酸 的含量。標本中的甘膽酸與試劑中相應的甘膽酸抗體膠乳顆粒特異性反應，結合成抗原抗 體復合物，形成一定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的甘膽酸含量成正比， 測定該濁度，與甘膽酸標準曲線比較，即能得出標本中甘膽酸含量。免疫比濁測定中抗原濃 度與吸光度之間的線性主要取決于抗體活性、反應體系和抗體抗原的比例H個方面，所W 反應體系的研究包括樣本及試劑的上樣量、稀釋倍數，反應時間，測定波長等等反應條件的 摸索。
[0043] 本【具體實施方式】適用于批量包裝甘膽酸液體雙試劑生產全過程，采用親水性納米 膠乳顆粒，試劑更穩定；采用高純度特異性單克隆甘膽酸抗體，準確性高，可W區分膽酸和 其它結合膽汁酸，測定血清中真正的甘膽酸水平，適合臨床孕婦產前健康普查，標本量很 大，經濟和社會效益明顯。
[0044] 實施例：
[0045] 1、樣本要求：血清采血后應及時分離，不溶血血清。樣品2-8C可穩定7天，-2(TC 可穩定一個月（冷凍樣品只可復溶一次，不可反復凍溶）
[0046] 2、波長；膠乳增強免疫比濁法原理是光線通過免疫濁度試劑時光線偏折而散射， 從而使透射光減弱。該就決定了主波長和吸光度呈反比，所W波長的選擇決定了靈敏度的 大小。
[0047] 本【具體實施方式】的甘膽酸測定試劑盒在600nm波長下檢測數據與甘膽酸試劑盒 相關性最高，全自動生化分析儀可W方便檢測，故選擇600nm為本產品的測試波長。
[0048] 3、樣品試劑比：
[0049] 試劑量的多少決定反應體積中有效抗體的濃度，而樣本試劑比會影響試劑的線性 范圍。
[0050]
【權利要求】
1.膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法，其特征在于它的制備方法為： (1) 、生產設備準備：混合容器：容積大于試劑生產體積的高密度聚乙烯桶4只；攪拌 器：攪拌涂四氟乙烯的慢速電動攪拌器；稱量設備：精度±0. 0001克的天平1臺；聚乙烯容 器：預稱原料用，有密封蓋，2只；原料稱量用勺、鏟；PH計，定標緩沖液，具有溫度補償功能 的PH計和相應的定標液；儀器，日立7060全自動生化分析儀；過濾設備，孔徑5 μ m專用； 標簽：用于原材料稱量，標明原料名稱、重量等；標牌：用于標示； (2) 、生產：生產前準備：所有生產設備必須清潔；生產線清場：生產場地僅放置本批 量包裝試劑生產用品；生產操作者穿戴防護用品：清潔工作服、戴口罩、防護眼鏡、乳膠手 套或一次性手套和發罩；核對各種生產運行單；測定所用純化水電導率，應小于2. 0μ s/ cm ;原料包裝的核對：名稱正確、批號為指定使用者、原料物態正常；預稱：所有原料都 必須預稱，并由第二人核對；預稱容器上有下列內容的標簽：容器號、原料代碼、批號、容 器和蓋的皮重、原料凈重、預稱者簽名/日期、核對者簽名/日期；按規定的計算量稱取 Trisl2. 114g，甘膽酸抗體乳膠顆粒懸濁液2. 5ml并密封容器蓋；核對稱取的原料量：總重 量=原料凈重+皮重；將原料容器上的資料記錄到原料記錄單上； (3) 、產品配制：混合容器和攪棒的準備；混合容器和攪棒用自來水沖洗5次；混合容器 和攪棒再用去離子水沖洗3次；干燥箱燒干密封裝袋備用；將電動攪拌機裝配到混合容器 上；在混合容器上標簽，標明產品代碼、批號、名稱、生產量、日期和操作者；在混合容器A、B 中加入生產總量90%的純化水；在混合容器A中加入Trisl2. 114g，攪拌至完全溶解；補純 化水至生產總量1L，然后用lmol/L的NaOH溶液調PH值至7. 2 ;用專用濾器將上述混合溶 液過濾入另一混合容器C中；在混合容器B中加入甘膽酸抗體乳膠顆粒懸濁液2. 5ml，攪拌 至完全混合，然后補純化水至生產總量250ml ;用專用濾器將上述混合溶液過濾入另一混 合容器D中；從混合容器C中取出1份80ml樣品，從容器D中取出1份20ml樣品，作下列 過程試劑： (a) 空白吸光度：< 1.2A; (b) 從混合容器中抽樣進行半成品抽樣全檢； 如不符合規格，報告給生產車間技術人員；如符合規格，將測定數據記錄在半成品檢驗 報告單中，并將大包裝產品密封后送入2-8°C冷庫； (4) 、分裝：生產環境：分裝過程在十萬級凈化區內進行，溫度10°C -26 °C，濕度 45% -65% ;分裝前清場，領取經檢測合格的半成品試劑，核對領取的試劑批號是否與計劃 單一致，檢查試劑外觀是否正常，如試劑出現混濁、沉淀或顏色變化應停止分裝；領取物料： 根據生產計劃領取要求型號的試劑瓶、配套瓶蓋、標簽，準備分裝工具、設備；分裝過程： (4. 1)根據分裝機型分裝： (4. 1. 1)稱瓶重：按計劃數量準備瓶，稱量每十個試劑瓶的重量，要求用于分裝同一批 號試劑的瓶子重量相差不超過〇. 5g，擺瓶； (4. 1. 2)分裝：使用蠕動泵進行分裝，過程中注意防止交叉污染，且裝量不低于標示裝 量； (4. 1. 3)逐瓶進行檢查蓋子效果，如有漏液，不得進入下一工序；分裝后貼標簽：將檢 查并經過核實的標簽貼在試劑瓶上；檢查：檢查分裝瓶數、試劑裝量、漏液情況、貼簽情況、 記錄填寫情況；清場：對生產現場進行清場，并填寫記錄； (5)、組裝：領料：根據生產計劃領取組裝胰島素雙試劑所需的說明書、紙盒、封簽、合 格證等物料，紙盒在組裝前應先折好成型；半成品檢查：將半成品逐瓶檢查；組裝；將裝好 的試劑盒合上蓋子，貼上封簽、合格證，貼的位置要貼正，左右、上下等分距離；組裝完成后， QA進行成品取樣，每個批號成品試劑取1盒，先進行包裝質量的檢查、再由QC進行內在質量 的檢查；清場，并填寫生產記錄；做好半成品、成品的入、出庫手續；如半成品不能及時組裝 出庫，應按半成品貯存要求貯存。
2.根據權利要求1所述的膠乳增強免疫比濁法甘膽酸測定試劑盒的制備方法，其特征 在于它的原理為：采用的技術原理是利用抗原抗體反應原理測定甘膽酸的含量，標本中的 甘膽酸與試劑中相應的甘膽酸抗體膠乳顆粒特異性反應，結合成抗原抗體復合物，形成一 定的濁度，濁度的高低在足量抗體存在時與標本中的甘膽酸含量成正比，測定該濁度，與甘 膽酸標準曲線比較，即能得出標本中甘膽酸含量；免疫比濁測定中抗原濃度與吸光度之間 的線性主要取決于抗體活性、反應體系和抗體抗原的比例三個方面，所以反應體系的研究 包括樣本及試劑的上樣量、稀釋倍數，反應時間，測定波長反應條件的摸索。
【文檔編號】G01N33/531GK104237497SQ201310226684
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月6日 優先權日:2013年6月6日
【發明者】石麗萍 申請人:紹興圣康生物科技有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
