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專利名稱：一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于魚類外周神經(jīng)的染色領(lǐng)域，特別涉及一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法。
背景技術(shù)：
神經(jīng)系統(tǒng)對魚類的生命活動很重要，它由腦、腦神經(jīng)、脊髓與脊神經(jīng)構(gòu)成，腦和脊髓為中樞神經(jīng)，腦神經(jīng)與脊神經(jīng)為外周神經(jīng)；魚類外周神經(jīng)系統(tǒng)分布的研究可以為魚類起源與進(jìn)化及生理功能的研究提供重要依據(jù)。有關(guān)魚類外周神經(jīng)分布的研究方法報(bào)道國內(nèi)尚未見到，國外相關(guān)報(bào)道主要集中在以下幾個(gè)方面蘇木素神經(jīng)染色法，該方法染色效果不佳；軟骨、硬骨、神經(jīng)三重染色法，主要過程首先用阿利新藍(lán)將軟骨染為藍(lán)色，其次用茜素紅將硬骨染為紅色，最后外周神經(jīng)經(jīng)蘇丹黑染色后，顯黑色，染色效果良好，但該染色過程較為煩瑣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，該方法操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時(shí)間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器。本發(fā)明的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，包括(1)用IOvol %福爾馬林固定魚體標(biāo)本48 Mh，將固定好的魚體標(biāo)本沖洗 12-24h ；(2)將上述魚體放入容器中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置l_2h ；(3)向上述溶液中滴加濃度為3 4Vol% H2O2溶液，將容器置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進(jìn)行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30 40min ；(5)將魚體浸入30wt% _50wt%蘇丹黑溶液中進(jìn)行神經(jīng)染色，染色時(shí)間為8_12h ；(6)對魚體進(jìn)行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 l_2min ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經(jīng)的染色。所述步驟(1)中的10vol%福爾馬林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀釋而得。所述步驟(1)中的魚體標(biāo)本為魚類仔稚幼魚標(biāo)本。所述步驟O)中的容器為塑料或玻璃方形盒。所述步驟(3)中每100ml KOH滴加4-6滴H2O2。所述步驟(5)中的神經(jīng)染色在搖床中進(jìn)行，染色效果更佳。所述步驟(5)中的30wt% -50wt%蘇丹黑溶液配制工藝為蘇丹黑粉末溶解于 70vol%酒精中，至飽和狀態(tài)；用70vol%酒精稀釋至30wt% -50wt%。在0. 5wt% KOH溶液中緩慢加入甘油，直至魚體標(biāo)本樣品沉入底部，放置1 后，輕輕去除頭部表皮，在體視鏡下清晰可見外周神經(jīng)分布，外周神經(jīng)經(jīng)過處理后染為黑色。有益效果(1)本發(fā)明操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時(shí)間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器；(2)在本發(fā)明的操作中，KOH易溶于水和甘油，而且其化學(xué)性質(zhì)類似NaOH，有強(qiáng)堿性，能破壞細(xì)胞組織；H2O2其水溶液俗稱雙氧水，外觀為無色透明液體，是一種強(qiáng)氧化劑； KOH和H2A結(jié)合使用能夠使魚體骨骼軟化，消除肌肉組織，褪去表皮色素，使魚體透明，便于觀察魚體外周神經(jīng)染色情況；根據(jù)KOH易溶于甘油的特點(diǎn)，染色后魚體放入KOH和甘油的混合液，不僅使魚體透明便于神經(jīng)染色觀察，而且能夠保持魚體水分含量，隔絕空氣，便于樣品長期保存；(3)本發(fā)明操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定，可用于一般魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)分布的研究， 其適用范圍較廣。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1(1)用IOvol %福爾馬林(由37Vol%甲醛溶液稀釋而得)固定中華鱘仔魚標(biāo)本 (全長6. 2cm) 48h，將固定好的魚體標(biāo)本沖洗12h ；(2)將上述魚體放入玻璃方形盒中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置 lh；(3)向上述溶液中滴加濃度為3vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 將玻璃方形盒置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進(jìn)行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30min ；(5)將魚體浸入30wt%蘇丹黑溶液(蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至飽和狀態(tài)；用70vOl%酒精稀釋)中進(jìn)行神經(jīng)染色，染色時(shí)間為他；(6)對魚體進(jìn)行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 Imin ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經(jīng)的染色。實(shí)施例2(1)用IOvol %福爾馬林(由40vol%甲醛溶液稀釋而得)固定魚體標(biāo)本MhJf 固定好的魚體標(biāo)本沖洗24h ；(2)將上述魚體放入塑料中，加入0. 5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置濁；(3)向上述溶液中滴加濃度為4vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 將塑料置于白熾燈下過夜，以加速褪去魚表皮色素；(4)對魚體進(jìn)行酒精脫水處理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各40min ；(5)將魚體浸入50wt%蘇丹黑溶液(蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至飽和狀態(tài)；用70Vol%酒精稀釋)中在搖床中進(jìn)行神經(jīng)染色，染色時(shí)間為12h ；(6)對魚體進(jìn)行酒精水化處理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 2min ；(7)將魚體置于0. 5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經(jīng)的染色。
權(quán)利要求
1.一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，包括(1)用IOvol%福爾馬林固定魚體標(biāo)本48 Mh，將固定好的魚體標(biāo)本沖洗12-24h ；(2)將上述魚體放入容器中，加入0.5wt% KOH溶液直至將魚體淹沒，放置1- ；(3)向上述溶液中滴加濃度為3 4Vol%H2O2溶液，將容器置于白熾燈下過夜；(4)對魚體進(jìn)行酒精脫水處理，依次放入30vol%,50vol %、70vol %酒精中，各30 40min ；(5)將魚體浸入30wt%-50wt%蘇丹黑溶液中進(jìn)行神經(jīng)染色，染色時(shí)間為8-12h ；(6)對魚體進(jìn)行酒精水化處理，依次放入70VO1%、60VO1%、50to1%酒精，各Hmin；(7)將魚體置于0.5wt% KOH溶液中過夜，即完成對外周神經(jīng)的染色。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟(1)中的IOvol %福爾馬林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀釋而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟(1)中的魚體標(biāo)本為魚類仔稚幼魚標(biāo)本。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟O)中的容器為塑料或玻璃方形盒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟(3)中每IOOml KOH滴加4-6滴H2O2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟(5)中的神經(jīng)染色在搖床中進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，其特征在于所述步驟(5)中的30wt% -50wt%蘇丹黑溶液配制工藝為蘇丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中， 至飽和狀態(tài)；用70vol%酒精稀釋至30wt% -50wt%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)的染色方法，包括將魚體標(biāo)本浸入0.5wt％KOH溶液和3～4vol％H2O2溶液中，進(jìn)行酒精脫水處理后再浸入30wt％-50wt％蘇丹黑溶液中進(jìn)行神經(jīng)染色，進(jìn)行酒精水化處理后置于0.5wt％KOH即可。本發(fā)明操作簡單、所需試劑少，大大縮短了染色時(shí)間，也無須昂貴的試劑和特殊的儀器，操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定，可用于一般魚類仔稚幼魚外周神經(jīng)分布的研究，其適用范圍較廣。
文檔編號G01N1/30GK102519774SQ20111036253
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者宋煒, 馬凌波 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所