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一種脂連素的檢測標(biāo)的物及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種脂連素的檢測標(biāo)的物及制備方法，其標(biāo)的物靈敏度高，使用量小，并且其制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，其標(biāo)的物的使用能提高免疫比濁法檢測精度，進(jìn)而使免疫比濁法能夠大范圍推廣使用。其特征在于：標(biāo)的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復(fù)合物，復(fù)合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構(gòu)成，復(fù)合物的脂連素抗原結(jié)合位點(diǎn)暴露。
【專利說明】一種脂連素的檢測標(biāo)的物及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及體液標(biāo)志蛋白檢測試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及脂連素檢測試劑，具體為一種脂連素的檢測標(biāo)的物及制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]在臨床上，體液標(biāo)志蛋白的檢測方法主要采用免疫學(xué)方法，以酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)、放身寸免疫測定(Rad1 immunoassay,RIA)、免疫比濁法和膠體金比色法這幾種方法為主。ELISA方法定結(jié)果的準(zhǔn)確性高，標(biāo)本處理數(shù)量適中，但操作繁瑣且時間長，難以進(jìn)行質(zhì)量控制，自動化程度低，不適宜大范圍推廣使用；RIA方法設(shè)計(jì)放射性的原因難以推廣；膠體金比色法其膠體金生產(chǎn)工藝復(fù)雜、成本高，也難以大范圍推廣使用；免疫比濁法穩(wěn)定性好、生產(chǎn)工藝簡單，但其靈敏度低，抗體使用量大，新型檢測標(biāo)的物生產(chǎn)成本高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對上述問題，本發(fā)明提供了一種脂連素的檢測標(biāo)的物及制備方法，其標(biāo)的物靈敏度高，使用量小，并且其制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，其標(biāo)的物的使用能提高免疫比濁法檢測精度，進(jìn)而使免疫比濁法能夠大范圍推廣使用。
[0004]其技術(shù)方案是這樣的，一種脂連素的檢測標(biāo)的物，其特征在于:所述標(biāo)的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復(fù)合物，所述復(fù)合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構(gòu)成，所述復(fù)合物的脂連素抗原結(jié)合位點(diǎn)暴露。
[0005]本發(fā)明還提供了一種制備上述脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其特征在于:其包括以下步驟:
A、聚苯乙烯乳液的制備:將聚苯乙烯乳膠顆粒溶解于甘氨酸氯化鈉緩沖液中；
B、標(biāo)的物的制備:將脂連素抗體加入聚苯乙烯乳液中，并置于4°C水浴搖動；
C、將牛血清白蛋白加入步驟B形成的溶液中；
D、離心:對步驟C所得溶液進(jìn)行離心操作，收集沉淀；
E、洗滌:對步驟D收集的沉淀進(jìn)行洗滌；
F、超聲:將經(jīng)步驟E洗滌的沉淀加入緩沖液，超聲處理；
G、儲存:步驟F所得溶液2-8°C儲存。
[0006]
其進(jìn)一步特征在于:
所述甘氨酸氯化鈉緩沖液:甘氨酸濃度為100 mmol/1，氯化鈉濃度為100 mmol/1，溶劑為水；
所述搖動條件為:75轉(zhuǎn)/分鐘，時間為I小時；
步驟F中所述緩沖液組成為:100 mmol/1甘氨酸，100 mmol/1氯化鈉，0.075 %疊氮化鈉，溶劑為水； 所述超聲條件為:45kHz，20秒。
[0007]采用本發(fā)明后，其有益效果在于:新的標(biāo)的物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構(gòu)成，脂連素抗體結(jié)合聚苯乙烯乳膠顆粒后，脂連素抗體構(gòu)象改變，暴露其抗原結(jié)合位點(diǎn)，提高與抗原的特異性結(jié)合能力，從而提高標(biāo)的物的靈敏度，降低抗體使用量；由于新標(biāo)的物的組成為脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒，原材料成本低，并且新標(biāo)的物制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，進(jìn)而使免疫比濁法在提高檢測精度的同時能夠大范圍推廣使用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1為本發(fā)明脂連素檢測標(biāo)的物制備方法步驟A的反應(yīng)過程示意圖；
圖2為本發(fā)明脂連素檢測標(biāo)的物制備方法步驟B的反應(yīng)過程示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0009]一種制備脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其包括以下步驟:
A、聚苯乙烯乳液的制備:將聚苯乙烯乳膠顆粒溶解于甘氨酸氯化鈉緩沖液中；
B、標(biāo)的物的制備:將脂連素抗體加入聚苯乙烯乳液中，并置于4°C水浴搖動；
C、將牛血清白蛋白加入步驟B形成的溶液中；
D、離心:對步驟C所得溶液進(jìn)行離心操作，收集沉淀；
E、洗滌:對步驟D收集的沉淀進(jìn)行洗滌；
F、超聲:將經(jīng)步驟E洗滌的沉淀加入緩沖液，超聲處理；
G、儲存:步驟F所得溶液2-8°C儲存。
[0010]甘氨酸氯化鈉緩沖液:甘氨酸濃度為100 mmol/1，氯化鈉濃度為100 mmol/1，溶劑為水；
搖動條件為:75轉(zhuǎn)/分鐘，時間為I小時；
步驟F中緩沖液組成為:100 mmol/1甘氨酸，100 mmol/1氯化鈉，0.075 %疊氮化鈉，溶劑為水；
超聲條件為:45kHz，20秒。
[0011]通過上述方法制備的脂連素的檢測標(biāo)的物，標(biāo)的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復(fù)合物，復(fù)合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構(gòu)成，復(fù)合物的脂連素抗原結(jié)合位點(diǎn)暴露。
[0012]步驟B中，脂連素抗體與聚苯乙烯乳膠顆粒通過分子間作用力結(jié)合形成乳膠脂連素抗體復(fù)合物；步驟C中牛血清白蛋白與未結(jié)合脂連素抗體的聚苯乙烯乳膠顆粒結(jié)合。
【權(quán)利要求】
1.一種脂連素的檢測標(biāo)的物，其特征在于:所述標(biāo)的物為聚苯乙烯乳膠脂連素抗體復(fù)合物，所述復(fù)合物由脂連素抗體和聚苯乙烯乳膠顆粒通過物理吸附連接構(gòu)成，所述復(fù)合物的脂連素抗原結(jié)合位點(diǎn)暴露。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其特征在于:其包括以下步驟: A、聚苯乙烯乳液的制備:將聚苯乙烯乳膠顆粒溶解于甘氨酸氯化鈉緩沖液中； B、標(biāo)的物的制備:將脂連素抗體加入聚苯乙烯乳液中，并置于4°C水浴搖動； C、將牛血清白蛋白加入步驟B形成的溶液中； D、離心:對步驟C所得溶液進(jìn)行離心操作，收集沉淀； E、洗滌:對步驟D收集的沉淀進(jìn)行洗滌； F、超聲:將經(jīng)步驟E洗滌的沉淀加入緩沖液，超聲處理； G、儲存:步驟F所得溶液2-8°C儲存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備脂連素檢的測標(biāo)的物的方法，其特征在于:所述甘氨酸氯化鈉緩沖液:甘氨酸濃度為100 mmol/1，氯化鈉濃度為100 mmol/1，溶劑為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其特征在于:所述搖動條件為:75轉(zhuǎn)/分鐘，時間為I小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其特征在于:步驟F中所述緩沖液組成為:100 mmol/1甘氨酸，100 mmol/1氯化鈉，0.075 %疊氮化鈉，溶劑為水。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備脂連素的檢測標(biāo)的物的方法，其特征在于:所述超聲條件為:45kHz，20秒。
【文檔編號】G01N33/68GK104049086SQ201310080139
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2013年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月13日
【發(fā)明者】成天宏 申請人:無錫凱瑞生物科技有限公司