国产自产21区,亚洲97,免费毛片网,国产啪视频,青青青国产在线观看,国产毛片一区二区三区精品

基于刻蝕納米銀三角的快速熒光檢測過氧化氫的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，包括：將可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，通過檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測，所述選定液相環(huán)境為適于過氧化氫刻蝕納米銀三角的液相反應(yīng)環(huán)境。本發(fā)明具有抗干擾性強(qiáng)，操作簡便，快速靈敏，檢測限低，成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，適用于對(duì)復(fù)雜基質(zhì)進(jìn)行快速、高靈敏度的檢測，且無需復(fù)雜前處理。
【專利說明】基于刻蝕納米銀三角的快速熒光檢測過氧化氫的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種過氧化氫的檢測方法，特別是一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]過氧化氫(Hydrogen peroxide)化學(xué)式為H2O2,其水溶液俗稱雙氧水。外觀為無色透明液體，是一種強(qiáng)氧化劑，其水溶液適用于傷口消毒及環(huán)境、食品消毒。過氧化氫不僅是一些高選擇性氧化酶反應(yīng)的副產(chǎn)物，而且是食品、制藥、臨床、環(huán)境和工業(yè)分析中一種重要的中間體，研究低濃度過氧化氫的檢測方法在食品、醫(yī)藥的檢測中具有重要意義。因此，方便、快速、準(zhǔn)確地檢測過氧化氫含量的方法顯得尤為重要。
[0003]目前國內(nèi)外有文獻(xiàn)報(bào)道了許多過氧化氫的檢測方法，如光譜法、化學(xué)發(fā)光法和電化學(xué)法等，但普遍存在靈敏度不高、穩(wěn)定性不足或樣品基質(zhì)干擾性強(qiáng)等缺點(diǎn)，從而限制了它們的實(shí)際應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的主要目的在于提出一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其能實(shí)現(xiàn)對(duì)過氧化氫進(jìn)行快速、靈敏的檢測，成本低廉，易于操作，從而克服了現(xiàn)有技術(shù)中的不足。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
[0006]一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，包括:將可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，通過檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測，所述選定液相環(huán)境為適于過氧化氫刻蝕納米銀三角的液相反應(yīng)環(huán)境。
[0007]進(jìn)一步的，所述納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物的制備方法可以包括:將納米銀三角溶液與牛血清蛋白溶液混合反應(yīng)，再加入熒光染料溶液，充分反應(yīng)后形成所述納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物。
[0008]其中，所述納米銀三角的粒徑優(yōu)選為30_50nm。
[0009]所述熒光染料可選自但不限于異硫氰酸熒光素或四甲基羅丹明-5-異硫氰酸酯。
[0010]作為較為典型的實(shí)施方案之一，所述基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法具體可以包括如下步驟:
[0011](I)將牛血清蛋白溶液加入納米銀三角溶液，混合均勻后，靜置過夜；
[0012](2)將熒光染料溶液加入至步驟(I)最終所獲混合溶液中，混合均勻后，靜置4h以上;
[0013](3)將步驟(2)最終所獲混合溶液以不小于8000rpm的速度離心20min以上，沉淀以濃度為0.015M的檸檬酸三鈉溶液重懸后，備用；
[0014](4)取可能含有過氧化氫的樣品與步驟(3)最終所獲重懸溶液混合均勻，并在室溫下靜置20min以上，并檢測所獲混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測。
[0015]進(jìn)一步的，所述基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法包括:
[0016]1、取一系列不同濃度的過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，并檢測由每一標(biāo)準(zhǔn)樣品最終所形成的混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，以及，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度與混合反應(yīng)體系熒光強(qiáng)度的對(duì)應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線.
[0017]I1、取可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，并檢測最終所形成的混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，再與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，從而測得樣品中所含過氧化氫的濃度。
[0018]進(jìn)一步的，所述熒光強(qiáng)度為在所述熒光染料的發(fā)射波長下檢測到的熒光強(qiáng)度。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明至少具有如下優(yōu)點(diǎn):該基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法依據(jù)過氧化氫刻蝕納米銀三角，而納米銀三角上標(biāo)記有熒光染料，得到熒光強(qiáng)度不同的混合溶液，可以通過測定光熒光強(qiáng)度定量分析結(jié)果，檢測簡便快速，靈敏度高，成本低廉。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明中記載的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0021]圖1是本發(fā)明基于銀納米三角刻蝕的過氧化氫熒光檢測方法的原理圖；
[0022]圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中所建立的過氧化氫濃度-熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0023]圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中納米銀三角-牛血清白蛋白-異硫氰酸熒光素復(fù)合物透射電鏡圖；
[0024]圖4是本發(fā)明實(shí)施例1中納米銀三角-牛血清白蛋白-異硫氰酸熒光素復(fù)合物與濃度為100 μ M的過氧化氫溶液孵育后的透射電鏡圖。

【具體實(shí)施方式】
[0025]如前所述，鑒于現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供了一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其通過在銀納米三角表面吸附牛血清蛋白后與異硫氰酸熒光素、四甲基羅丹明-5-異硫氰酸酯等熒光分子偶聯(lián)，得到銀納米三角-牛血清白蛋白-熒光染料復(fù)合物，在過氧化氫刻蝕銀納米三角后，納米復(fù)合物的熒光信號(hào)增強(qiáng)，而依據(jù)不同數(shù)量的過氧化氫對(duì)納米銀三角的刻蝕程度不同，使顯示的熒光強(qiáng)度不同，從而實(shí)現(xiàn)定量檢測過氧化氫的含量，該檢測方法操作簡便，不易受到樣品基質(zhì)的干擾，因而也不需要沉淀去除蛋白等較繁瑣耗時(shí)的樣品前處理，這為檢測復(fù)雜基質(zhì)，包含食品，例如牛奶等液態(tài)飲料中低濃度過氧化氫的含量提供了快速、高靈敏的檢測方法。
[0026]本發(fā)明的方法包括:將可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，通過檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測，所述選定液相環(huán)境為適于過氧化氫刻蝕納米銀三角的液相反應(yīng)環(huán)境。
[0027]例如，作為較為具體的實(shí)施方案之一，該方法可以包括如下步驟:
[0028](I)將牛血清蛋白溶液加入至納米銀三角溶液中，使牛血清蛋白的終濃度為
0.5mg/mL,混合均勻，靜置過夜。
[0029](2)按照熒光染料與牛血清蛋白的質(zhì)量比為1:3至1:6，將熒光染料溶液加入至步驟(I)最終所獲的混合溶液，混合均勻，靜置4h ；
[0030](3)將步驟(2)最終所獲的混合溶液在8000rpm離心20min，沉淀以濃度為0.015M的朽1檬酸三鈉溶液重懸，同時(shí)濃縮10倍。
[0031](4)取可能含有過氧化氫的測試樣品與步驟(3)中所獲重懸溶液按照1:1的體積比混合均勻，并在室溫下靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測。
[0032]而在一更為具體的實(shí)施案例中，該方法可以包括
[0033](I)納米銀三角的制備。40mL水溶液體系，包括400μ?，0.01Μ硝酸銀溶液，600 μ L, 0.1M檸檬酸三鈉溶液，96yL，30wt% H2O2室溫下強(qiáng)力攪拌1min。然后，快速注入400 μ L，0.1M硼氫化鈉溶液。
[0034](2)取40mL納米銀三角溶液。將200 μ L牛血清蛋白溶液(10mg/mL)加入到納米銀三角膠體溶液中，混合均勻，靜置過夜。再將300yL熒光染料(lmg/mL)加入到上述混合溶液中，混合均勻，靜置4h。混合溶液8000rpm離心20min，用0.015M檸檬酸三鈉溶液重懸，同時(shí)濃縮10倍。
[0035](3)吸取不同濃度(如:0、0.025、5、30、50、100μΜ)過氧化氫lOOuL，加入到(I)中所述的重懸液中，振蕩混勻，靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度。
[0036]進(jìn)一步的，在前述步驟(I)中，所述納米銀三角膠體溶液體積可以為10?100mL。
[0037]前述步驟⑴中所使用的牛血清蛋白溶液體積還可以為50?500 μ L，濃度還可以為 I ?lOmg/mL。
[0038]前述步驟(I)中所使用的熒光染料溶液體積還可以為30?300μ L，濃度還可以為I ?lOmg/mL。
[0039]更為具體的，該實(shí)施方案中的方法還可以為:
[0040](I)制備10?10mL納米銀三角膠體溶液。將50?500 μ L牛血清蛋白溶液(I?10mg/mL)加入到納米銀三角膠體溶液中，混合均勻，靜置過夜。再將30?300 μ L熒光物質(zhì)(I?10mg/mL)加入到上述混合溶液中，混合均勻，靜置4h。混合溶液8000rpm離心20min,用0.015M檸檬酸三鈉溶液重懸，同時(shí)濃縮10倍。
[0041](2)吸取不同濃度(如:0、0.025、5、30、50、100μΜ)過氧化氫lOOuL，加入到(I)中所述的重懸液中，振蕩混勻，靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度。
[0042]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0043]實(shí)施例1該過氧化氫的檢測方法原理如下式所示:
[0044]2Ag+H202 — 2Ag++20r
[0045]該方法具體如下:
[0046](I)納米銀三角-牛血清蛋白(BSA)-異硫氰酸熒光素(FITC)復(fù)合物的制備。取40mL納米銀三角溶液，將200 μ L牛血清蛋白溶液(10mg/mL)加入到納米銀三角膠體溶液中，混合均勻，靜置過夜。再將300 μ L異硫氰酸熒光素(lmg/mL)加入到上述混合溶液中，混合均勻，靜置4h。混合溶液8000rpm離心20min，用0.015M檸檬酸三鈉溶液重懸，同時(shí)濃縮10倍。
[0047](2)過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。吸取不同濃度(如:0、0.025、5、30、50、100μΜ)過氧化氫溶液10uL,加入到步驟(I)中所述的重懸液中，振蕩混勻，靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的突光強(qiáng)度(激發(fā)波長494nm,發(fā)射波長518nm)。以過氧化氫濃度為橫坐標(biāo),突光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示,檢測線性范圍為0.025-100 μ M,檢測靈敏度可達(dá)到 8ηΜ。
[0048]另外，請(qǐng)參閱圖3、4系納米銀三角-牛血清白蛋白-異硫氰酸熒光素復(fù)合物在與濃度為100 μ M的過氧化氫溶液孵育前、后的透射電鏡圖。
[0049](3)鮮奶樣品中過氧化氫的檢測。將鮮奶稀釋20倍，取溶液100μ L，加入到步驟(I)中所述的重懸液中，振蕩混勻，靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長494nm，發(fā)射波長518nm)。參照標(biāo)準(zhǔn)曲線可以計(jì)算出牛奶樣品中過氧化氫的濃度。
[0050]實(shí)施例2該方法具體如下:
[0051](I)納米銀三角-牛血清蛋白-四甲基羅丹明-5-異硫氰酸酯復(fù)合物的制備。取40mL納米銀三角膠體溶液。將200 μ L牛血清蛋白溶液(10mg/mL)加入到納米銀三角膠體溶液中，混合均勻，靜置過夜。再將300μ L四甲基羅丹明-5-異硫氰酸酯(lmg/mL)加入到上述混合溶液中，混合均勻，靜置4h。混合溶液8000rpm離心20min，用0.015M檸檬酸三鈉溶液重懸，同時(shí)濃縮10倍。
[0052](2)吸取不同濃度(如:0、0.025、5、30、50、100μΜ)過氧化氫溶液lOOuL，加入到步驟(I)中所述的重懸液中，振蕩混勻，靜置20min，檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長576nm)。過氧化氫的檢測結(jié)果，亦可得出與實(shí)施例1相近之標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0053](3)鮮奶樣品中過氧化氫的檢測:與實(shí)例I中方法相似。
[0054]應(yīng)當(dāng)理解，以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的內(nèi)容，除此之外，本發(fā)明還有其他實(shí)施方式，但凡本領(lǐng)域技術(shù)人員因發(fā)明所涉及之技術(shù)啟示，而采用等同替換或等效形式形成的技術(shù)方案均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于包括:將可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，通過檢測混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測，所述選定液相環(huán)境為適于過氧化氫刻蝕納米銀三角的液相反應(yīng)環(huán)境。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于所述納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物的制備方法包括:將納米銀三角溶液與牛血清蛋白溶液混合反應(yīng)，再加入熒光染料溶液，充分反應(yīng)后形成所述納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于所述納米銀三角的粒徑為30-50 nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于所述熒光染料包括異硫氰酸熒光素或四甲基羅丹明-5-異硫氰酸酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將牛血清蛋白溶液加入納米銀三角溶液，混合均勻后，靜置過夜； (2)將熒光染料溶液加入至步驟(I)最終所獲混合溶液中，混合均勻后，靜置4h以上； (3)將步驟(2)最終所獲混合溶液以不小于8000rpm的速度離心20 min以上，沉淀以濃度為0.015 M的檸檬酸三鈉溶液重懸后，備用； (4)取可能含有過氧化氫的樣品與步驟(3)最終所獲重懸溶液混合均勻，并在室溫下靜置20 min以上，并檢測所獲混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中所含過氧化氫的檢測。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于包括: 1、取一系列不同濃度的過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，并檢測由每一標(biāo)準(zhǔn)樣品最終所形成的混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，以及，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度與混合反應(yīng)體系熒光強(qiáng)度的對(duì)應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線； I1、取可能含有過氧化氫的樣品與納米銀三角-牛血清蛋白-熒光染料復(fù)合物在選定液相環(huán)境中混合反應(yīng)，并檢測最終所形成的混合反應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，再與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，從而測得樣品中所含過氧化氫的濃度。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的基于刻蝕納米銀三角的熒光檢測過氧化氫的方法，其特征在于所述熒光強(qiáng)度為在所述熒光染料的發(fā)射波長下檢測到的熒光強(qiáng)度。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104165876SQ201410418331
【公開日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】彭池方, 劉春麗, 段小慧, 宋珊珊 申請(qǐng)人:江南大學(xué)