超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，所述的9種脂溶性維生素分別為：維生素A、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素；所述試劑盒包括如下試劑：洗脫液A、洗脫液B、洗脫液C、標準品母液、稀釋液1、稀釋液2、萃取液、質控品QC(L)、QC(M)、QC(H)。本發明試劑盒與現有技術相比具有如下優勢：本發明試劑盒適用于超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析方法；該方法可以節省樣品、節約時間、節約成本。
【專利說明】超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試 劑盒
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種超高效液相色譜技術測定血清中9種脂溶性維生素的方法，屬于 分析檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 脂溶性維生素泛指可溶于脂肪及脂溶劑的一類維生素。本發明主要針對其中對人 體正常生長代謝及機能調節至關重要的9種維生素進行分析，包括維生素 A、α -生育酚、 生育酚、生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素。
[0003] 其中，維生素 Α對于良好的視力、胚胎和嬰兒的正常發育、免疫系統的功能、生長、 骨骼的形成、繁殖及傷口的愈合都是必不可少的；α-生育酚、 Y-生育酚、δ-生育酚是維 生素 Ε的三種常見形式，它們是高度活躍的自由基清除劑，保護脂質膜不被氧化，α -生育 酚阻抑了蛋白酶C的活性，Υ -生育酚作為活性氮氧化物，是一種對抗在體內引發疾病的 化合物的強大后衛；胡蘿卜素中比較重要的β_胡蘿卜素可以轉換成維生素 Α，胡蘿卜的攝 入有助于消除動脈硬化、癌癥、眼疾等疾病的發生；蕃茄紅素是目前被發現的最強抗氧化劑 之一，它可以有效防治因衰老、免疫力下降引起的各種疾病；輔酶Q10是一種強還原劑，能 防止脂質過氧化；葉黃素是一種性能優異的抗氧化劑，可抵御氧自由基在人體內造成細胞 與器官損傷，另外對于保護視力、降低白內障的發生率、延緩動脈硬化、抗癌等都有非常重 要的意義。
[0004] 上述這些脂溶性維生素與人體正常生長發育，代謝功能都息息相關，其在血清中 含量的檢測對考察這些物質在體內的代謝途徑、探查疾病機理以及考察某些藥物的作用效 果等等都有著指導意義。目前尚未見同時檢測這9種物質的方法及試劑盒的相關報道。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是提供一種能夠利用超高效液相色譜技術同時測定 血清中9種脂溶性維生素的試劑盒。
[0006] 為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：
[0007] -種超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，所述的9種 脂溶性維生素分別為：維生素 A、α -生育酚、Υ -生育酚、δ -生育酚、α -胡蘿卜素 、β -胡 蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素；
[0008] 所述試劑盒包括如下試劑：
[0009] (1)洗脫液：
[0010] 洗脫液A :0· 1% ν/ν三氟乙酸水溶液；
[0011] 洗脫液Β:乙醇；
[0012] 洗脫液C :0· 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液；
[0013] (2)標準品母液：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜 素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標準品的乙醇溶液；
[0014] (3)稀釋液：
[0015] 稀釋液1 :空白血清基質溶液；
[0016] 稀釋液2:乙醇；
[0017] ⑷萃取液：正己烷；
[0018] (5)質控品：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、 β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標準品的空白血清基質溶液，分高中低三個濃 度分別為 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
[0019] 其中，標準品母液為含有7. 04μ g/mL維生素 Α、14. 58μ g/mLa -生育酚、8μ g/ mLY-生育酚、4yg/mLS-生育酚、4yg/mLa-胡蘿卜素、6.85yg/mLP-胡蘿卜素、 9. 8 μ g/mL輔酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺紅素和1. 96 μ g/mL葉黃素標準品的乙醇溶液。
[0020] 表1 9種脂溶性維生素質控品對應濃度（單位μ g/mL)
[0021]
【權利要求】
1. 超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑盒，其特征在于， 所述的9種脂溶性維生素分別為：維生素 A、α -生育酚、Y -生育酚、δ -生育酚、α -胡 蘿卜素、β-胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素； 所述試劑盒包括如下試劑： ⑴洗脫液： 洗脫液A :0. 1 % ν/ν三氟乙酸水溶液； 洗脫液Β:乙醇； 洗脫液C :0. 1% ν/ν三氟乙酸甲醇溶液； (2) 標準品母液：含有維生素 A、α-生育酚、生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、 胡蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標準品的乙醇溶液； (3) 稀釋液： 稀釋液1 :空白血清基質溶液； 稀釋液2 :乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)質控品：含有維生素 A、α-生育酚、Υ-生育酚、δ-生育酚、α-胡蘿卜素、β-胡 蘿卜素、輔酶Q10、番茄紅素和葉黃素標準品的空白血清基質溶液，分高中低三個濃度分別 為 QC (L)、QC (Μ)、QC (Η)。
2. 根據權利要求1所述的超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析 試劑盒，其特征在于，標準品母液為含有7. 04 μ g/mL維生素 Α、14. 58 μ g/mL α -生育酚、 8 μ g/mL γ -生育酚、4 μ g/mL δ -生育酚、4 μ g/mL α -胡蘿卜素、6· 85 μ g/mL β -胡蘿卜素、 9. 8 μ g/mL輔酶Q10、3. 6 μ g/mL番爺紅素和1. 96 μ g/mL葉黃素標準品的乙醇溶液。
3. 根據權利要求1所述的超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，所述的空白血清基質溶液為40mg/mL牛血清蛋白的水溶液。
4. 根據權利要求1所述的超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，QC(L)，QC(M)，QC(H)中9種脂溶性維生素的濃度見表1 ; 表1 9種脂溶性維生素質控品對應濃度（單位μ g/mL)
5. 根據權利要求1所述的超高效液相色譜法檢測血清中9種脂溶性維生素的分析試劑 盒，其特征在于，所述的血清為人或動物的血清。
6. 權利要求1?5中任意一項所述的試劑盒的制備方法，其特征在于： (1) 洗脫液： 洗脫液A :配制0. 1% v/v三氟乙酸水溶液； 洗脫液B:乙醇； 洗脫液C :配制0. 1% v/v三氟乙酸甲醇溶液； (2) 標準品母液： 分別稱取維生素 A 8. 8mg、δ -生育酚l〇mg、γ -生育酚10mg、α -生育酚9. llmg，分別 加入lmL含有0. 4g/L 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的乙醇溶液，另稱取α -胡蘿卜素 l〇mg、 β-胡蘿卜素17. 12mg、蕃茄紅素10mg、輔酶Q105mg、葉黃素20mg分別定容于2mL、10mL、 lmL、lmL、10mL正己烷中，分別得到各自標準品母液；分別從維生素 A、α -生育酚、γ -生育 酚、S -生育酚母液中移取40 μ L、80 μ L、40 μ L、20 μ L標準品母液用乙醇定容至1000 μ L 得到校正液Α，分別從α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、蕃茄紅素、輔酶Q10、葉黃素母液中移取 40 μ L、200 μ L、20 μ L、100 μ L、50 μ L標準品母液用正己烷定容至1000 μ L得到校正液Β，分 別取A、Β各20 μ L用乙醇定容至1000 μ L，得到9種維生素標準品混合母液C，即得； (3) 稀釋液： 稀釋液1 :將4g牛血清蛋白用水定容至100mL制得； 稀釋液2:乙醇； ⑷萃取液：正己烷； (5)質控品：取標準品母液40 μ L、100 μ L、400 μ L分別用空白血清基質溶液定容至 1000 μ L 得到。
7. 權利要求1?5中任意一項所述的試劑盒在利用超高效液相色譜技術測定血清中9 種脂溶性維生素中的應用。
【文檔編號】G01N30/02GK104155385SQ201410440135
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年9月1日 優先權日:2014年9月1日
【發明者】徐鳳仙, 于嘉屏 申請人:上海迪安醫學檢驗所有限公司
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