一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備方法，包括：濾紙在第一相浸液中浸潤后，在30-50℃熱風干燥，得到酶試劑層；濾紙在第二相浸液中浸潤后，在30-50℃熱風干燥，得到顯色劑層；將海綿棒在抗抗壞血酸浸潤液中浸潤，40-60℃熱風烘干，得到抗抗壞血酸海綿棒；依次將顯色劑層、酶試劑層切割成的試紙塊，壓在上蓋顯色孔下，抗抗壞血酸海綿棒一端上，即得。本發明解決了現有試紙只能冷藏保存，常溫狀態不穩定；GHB脫氫酶和抗壞血酸有交叉反應，使存在抗壞血酸的樣品產生假陽性反應，得出錯誤結果；很多飲料本身有顏色，會干擾檢測結果等問題。
【專利說明】-種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制 備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于檢測4-羥基丁酸試紙的制備領域，特別涉及一種抗抗壞血酸和色素 干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備方法。
【背景技術】
[0002] GHB全名Gamma-Hydroxybutyrate (伽馬-輕基丁酸及其鈉鹽）是一種麻醉藥品。 60年代初醫學上利用GHB作為麻醉劑，后來發現GHB的不良副作用，便停止使用，只利用作 為安眠藥之用。90年代不法分子開始使用GHB作為娛樂，犯罪之用。GHB是白色粉狀，溶于 水后無色，液體狀稱為G水。GHB無氣味，味微咸。GHB的服后反應跟酒精相似。小劑量會令 人放松、個人防線放開、精神赳振及有類似輕微喝醉的興奮感覺。中份量會令人頭昏眼花、 眼睛不能對準焦點、心情愉悅、能投入音樂、跳舞及談話。沒有時間觀念，及不停點頭。服用 過量（0D)會令人無意識地不停點頭或陷入無意識狀態，極度眩暈，沒有方向感及嘔吐。嚴 重過量會中毒，中毒者會全無意識、身體抽搐，嘔吐及吸呼嚴重下降。于服用后10-20分鐘 會開始有反應，主要藥效反應可維持1-3小時，剩余反應約會維持2-4小時甚至更久。如果 GHB混合其他藥物或酒精，很容易會導致服用者" 0D "，更甚者更會昏迷及死亡。
[0003] 由于GHB為無色無味的藥物，而且會混合水來服用，因此服用者根本沒有可能知 道自己所服用的份量為多少，亦因為這個原因所以很容易會發生服用過量的意外。就算是 輕度的服用過量亦會令服用者失去意識甚至進入昏迷，或死亡。GHB確是一種非常危險的毒 品。就2000年1月美國所發表的報告，單在1月份美國已有60個服用GHB后死亡的個案， 由此可以知道它的危險性。不論在生理或心理上GHB都會令使用者上癮的。
[0004] 由于其上述特性，不法分子用它來作為迷幻藥，迷奸青年女性，搶劫財物，被害人 清醒后難以回憶起之前發生的一切。社會危害很大。《Reliable, Sensitive, Rapid and Quantitative Enzyme-Based Assay for Gamma-Hydroxybutyric Acid (GHB)》（Dawn T. Bravo等著）中介紹了 GHB脫氫酶的制備及檢測ghb的試紙的制備，但是，該方法存在一 些嚴重的問題：試紙只能冷藏保存，常溫狀態不穩定；GHB脫氫酶和抗壞血酸有交叉反應， 使存在抗壞血酸的樣品產生假陽性反應，得出錯誤結果；很多飲料本身有顏色，會干擾檢測 結果。而本發明涉及一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸的檢測裝置制備方法，解決 了這些問題。本發明的出現解決了上述問題，使檢測結果更準確可靠。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是提供一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢 測試紙的制備方法，該方法可以抗檢測液中的色素，維生素 C等的影響，能夠常溫保存，專 一性和靈敏度好。可以用于預防約會強奸，迷奸，及警方偵破案件時現場篩查鑒定。
[0006] 本發明的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備方法，包括：
[0007] (1)濾紙在第一相浸液中浸潤后，在30-50°C熱風干燥，得到酶試劑層；
[0008] (2)濾紙在第二相浸液中浸潤后，在30-50°C熱風干燥，得到顯色劑層；
[0009] (3)將海綿棒在抗抗壞血酸浸潤液中浸潤，40_60°C熱風烘干，得到抗抗壞血酸海 綿棒；
[0010] (4)依次將顯色劑層、酶試劑層切割成的試紙塊，壓在上蓋顯色孔下，抗抗壞血酸 海綿棒一端上，得到抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙，其中顯色劑層在上， 酶試劑層在下。
[0011] 所述步驟（1)中濾紙為濾紙whatman23sl。
[0012] 所述步驟⑴中第一相浸液配制過程具體為：每配制總體積為l〇〇ml的浸液，在 pH = 8. 8-10. 8,濃度為40mm〇l/L-80mm〇l/L Tris-鹽酸緩沖液中，分別溶入穩定劑和保護 劑 0. l-10g，NAD+ 輔酶 10. 1-2. 0g，黃遞酶 200-20000iu，4-羥基丁酸脫氫酶 2000-100000iu。
[0013] 所述穩定劑和保護劑為天然或人工聚合高分子膠體。
[0014] 所述聚合高分子膠體為肝素、右旋糖酐，海藻糖、PEG10000、牛血清蛋白中的一種 或幾種。所述步驟（2)中濾紙為whatman593。
[0015] 所述步驟（2)中第二相浸液為：每100ml溶劑中溶入0. 1-0. 5g氯化硝基四氮唑 藍。
[0016] 所述溶劑為甲醇或乙醇。
[0017] 所述步驟（3)中抗抗壞血酸浸潤液為：每配制100ml的浸潤液，在pH = 8. 8-10. 8， 濃度為40mmol/L-80mmol/L Tris-鹽酸緩沖液中溶入抗壞血酸氧化酶20-50mg，2, 6-二氯 酚靛酚鈉50-200mg。
[0018] 所述步驟⑷中試紙塊為0. 3X0. 3-0. 8X0. 8cm。
[0019] 本發明中將待測樣品加在海綿棒另一端的加樣孔處，使樣品在向顯色孔擴散過程 中去除夾雜其中的色素和抗壞血酸，消除二者的干擾，使結果更可靠。
[0020] 本發明的原理：
[0021] 反應原理：
[0022]
【權利要求】
1. 一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備方法，包括： (1) 濾紙在第一相浸液中浸潤后，在30-50°C熱風干燥，得到酶試劑層； (2) 濾紙在第二相浸液中浸潤后，在30-50°C熱風干燥，得到顯色劑層； (3) 將海綿棒在抗抗壞血酸浸潤液中浸潤，40-60°C熱風烘干，得到抗抗壞血酸海綿 棒； (4) 依次將顯色劑層、酶試劑層切割成的試紙塊，壓在上蓋顯色孔下，抗抗壞血酸海綿 棒一端上，得到抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙。
2. 根據權利要求1所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制 備方法，其特征在于：所述步驟（1)中第一相浸液配制過程具體為：每配制總體積為l〇〇ml 的浸液，在pH = 8. 8-10. 8,濃度為40mmol/L-80mmol/L的Tris-鹽酸緩沖液中，分別溶入 穩定劑和保護劑〇. l-l〇g，NAD+輔酶10. 1-2. 0g，黃遞酶200-20000iu，4-羥基丁酸脫氫酶 2000-100000iu〇
3. 根據權利要求2所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述穩定劑和保護劑為聚合高分子膠體。
4. 根據權利要求3所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述聚合高分子膠體為肝素、右旋糖酐，海藻糖、PEG10000、牛血清蛋白 中的一種或幾種。
5. 根據權利要求1所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述步驟（2)中第二相浸液為：每100ml溶劑中溶入0. 1-0. 5g氯化硝基 四氮唑藍。
6. 根據權利要求5所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述溶劑為甲醇或乙醇。
7. 根據權利要求1所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述步驟（3)中抗抗壞血酸浸潤液為：每配制100ml的浸潤液，在pH = 8. 8-10. 8,濃度為40mmol/L-80mmol/L Tris-鹽酸緩沖液中溶入抗壞血酸氧化酶20_50mg， 2, 6-二氯酚靛酚鈉50-200mg。
8. 根據權利要求1所述的一種抗抗壞血酸和色素干擾的4-羥基丁酸檢測試紙的制備 方法，其特征在于：所述步驟（4)中試紙塊為0. 3X0. 3-0. 8X0. 8cm。
【文檔編號】G01N21/78GK104111253SQ201410279116
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年6月20日 優先權日:2014年6月20日
【發明者】王福進, 管利豐, 張懿 申請人:武漢高豐生物科技有限公司, 上海高豐醫療電器有限公司
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