国产自产21区,亚洲97,免费毛片网,国产啪视频,青青青国产在线观看,国产毛片一区二区三区精品

專利名稱：葉黃素酯皂化程度快速測定方法
技術領域：
本發明屬于生物化學技術領域，涉及一種測定葉黃素酯皂化程度的方法，特別涉及一種葉黃素酯皂化程度快速測定方法。
背景技術：
葉黃素是類胡蘿卜素的一種，廣泛存在于自然界的植物中。由于這種天然色素具有色澤鮮艷、著色力強、安全無毒、富含營養等特點，越來越受到人們的重視，廣泛應用于食品、化妝品、禽類飼料等領域。著色劑類(葉黃素)飼料添加劑就是利用金盞花中富含的天然葉黃素，將金盞花浸膏中的葉黃素酯類衍生物轉化為游離葉黃素供禽類吸收。目前采用的工藝大都是先將浸膏加堿皂化，然后用吸咐劑吸收混合，但在皂化過程中葉黃素酯皂化程度的測定卻是難點，葉黃素酯皂化程度測定一般采用HPLC (高效液相色譜)法，此方法雖然比較準確，但對測定條件要求很高，設備昂貴，標準品不易保存，測定耗時長，在實際生產中指導意義不大。如何快速簡便的測定葉黃素酯是否完全皂化是生產中的一項技術難題。

發明內容
本發明的目的是提供一種葉黃素酯皂化程度快速測定方法，不僅結果準確，而且對測定條件要求較低，測定時間短。本發明所采用的技術方案是:一種葉黃素酯皂化程度快速測定方法，利用葉黃素酯和葉黃素在不同溶劑中的溶解性，采用薄層層析法快速簡便的測定葉黃素酯皂化程度，該快速測定方法的具體步驟為:
a)取金盞花浸膏皂化過程中生成的皂化液溶于四氫呋喃中，制成樣液；
清洗玻璃板，干燥；
將硅膠研磨成粘稠狀的硅膠糊；
b)將硅膠糊均勻涂布在干燥后的玻璃板上，烘干，制成層析板；
c)用微量進樣器抽取樣液，在層析板的娃膠鋪層表面點樣，冷風吹干；
d)將石油醚和乙酸乙酯配成展開劑，將點樣后的層析板放入注有展開劑的層析缸中，展開劑液面低于樣點，層析板上的樣液不能滲入展開劑中，于暗處展開，當展開劑到達層析板頂部時，取出層析板暗處風干；
e)若風干層析板上的樣斑沒有展開，則說明金盞花浸膏完全皂化，停止金盞花浸膏的皂化；若風干層析板上的樣斑展開，則說明金盞花浸膏未完全皂化，繼續皂化金盞花浸膏，并按上述步驟重復檢測金盞花浸膏的皂化進程，直至風干層析板上的樣斑不再展開，停止阜化。本發明快速測定方法利用葉黃素酯和葉黃素分子在溶劑中溶解性的不同，以四氫呋喃為溶解劑，以石油醚和乙酸乙酯的混合液為展開劑，采用薄層層析法快速簡便的測定葉黃素酯皂化程度。經過HPLC (高效液相色譜)法對比，測定結果準確，解決了 HPLC法對測定條件要求很高，測定耗時長的缺點，在實際生產中應用效果顯著。


圖1是完全皂化的葉黃素酯樣斑用展開劑處理后的狀態圖。圖2是未完全皂化的葉黃素酯樣斑用展開劑處理后的狀態圖。圖3是未皂化樣斑色譜圖。圖4是完全皂化樣斑色譜圖。
具體實施例方式由于葉黃素在葉黃素浸膏中是以葉黃素酯的形式存在，因此金盞花浸膏中的葉黃素在分離純化前首先要進行皂化，使葉黃素單體從葉黃素酯中分離出來，而皂化效果的好壞可以用皂化程度表示，游離態的葉黃素分子極易溶于極性有機溶劑中，溶于(mg/L):丙酮800，乙睛100，苯600，氯仿6000，環己烷50，環己酮4000，二氯甲烷800，二甲基甲酞胺1000，乙醇300，乙酸乙酯800，乙醚2000，己烷20，異丙醇400，甲醇200，叔丁酸甲醋2000，四氫呋喃8000，甲苯5000，葉黃素分子在四氫呋喃中溶解性最好，在石油醚和乙酸乙酯中溶解性較差，而葉黃素酯在石油醚和乙酸乙酯中溶解性很好，在四氫呋喃中溶解性較差。本發明就是利用葉黃素酯和葉黃素在不同溶劑中的溶解性，采用薄層層析法快速簡便的測定葉黃素酯皂化程度，具體步驟為:
a)取金盞花浸膏皂化過程中生成的皂化液1.0Og溶于IOml四氫呋喃中，制成樣液；
選用平整光滑的玻璃板(規格為IOcmX20cm)，用洗液洗凈，干燥；
稱取7 g硅膠，加適量0.1 mo I.Γ1硼酸溶液于研缽中充分研磨，形成粘稠狀的硅膠糊，當該硅膠糊發出脂肪光澤時 ，停止研磨；
b)將硅膠糊均勻涂布在干燥后的玻璃板上，硅膠糊的鋪層厚度為0.4 _ ;將鋪層后的玻璃板置于100°C烘箱中烘干，制成層析板，置于干燥器中備用；
c)用微量進樣器抽取樣液，在距離層析板底邊2cm的水平線上輕輕接觸鋪層表面，在鋪層表面點樣，點樣的樣液量不超過300 μ L，吹風機冷風吹干；
點樣的液體量超過300 μ L,易出現拖尾或擴散。d)按體積比4: 1，將沸程為60 90°C的石油醚和乙酸乙酯配成展開劑，所用試劑均為分析純；將點樣后的層析板放入注有展開劑的層析缸中，展開劑液面低于樣點1cm，層析板上的樣液不能滲入展開劑中，于暗處展開，當展開劑達到層析板頂部時，取出層析板，暗處風干；
e)若風干層析板上的樣斑沒有展開，則說明金盞花浸膏完全皂化，停止金盞花浸膏的皂化；若風干層析板上的樣斑展開，則說明金盞花浸膏未完全皂化，繼續皂化金盞花浸膏，并按上述步驟重復檢測金盞花浸膏的皂化進程，直至風干層析板上的樣斑不再展開，停止皂化。
實施例取金盞花浸膏皂化過程中生成的皂化液1.0Og溶于IOml四氫呋喃中，制成樣液；用洗液洗凈平整光滑的玻璃板(規格為IOcmX 20cm)，干燥；稱取7 g硅膠，加適量0.1mol.L-1硼酸溶液于研缽中充分研磨，形成粘稠狀的硅膠糊，當該硅膠糊發出脂肪光澤時，停止研磨，將硅膠糊均勻涂布在干燥后的玻璃板上，硅膠糊的鋪層厚度為0.4 mm ;將鋪層后的玻璃板置于100°C烘箱中烘干，制成層析板，置于干燥器中備用；用微量進樣器抽取樣液，在距離層析板底邊2 cm的水平線上輕輕接觸鋪層表面，在鋪層表面點樣，點樣的液體量不超過300 μ L，吹風機冷風吹干；按體積比4: 1，將沸程為60 90°C的石油醚和乙酸乙酯配成展開劑，所用試劑均為分析純；將點樣后的層析板放入注有展開劑的層析缸中，展開劑液面低于樣點1cm，層析板上的樣液不能滲入展開劑中，于暗處展開，當展開劑達到層析板頂部時，取出層析板，暗處風干；若風干層析板上的樣斑沒有展開，如圖1所示，則說明金盞花浸膏完全皂化，停止金盞花浸膏的皂化；若風干層析板上的樣斑展開，如圖2所示，則說明金盞花浸膏未完全皂化，繼續皂化金盞花浸膏，并按上述步驟重復檢測金盞花浸膏的皂化進程，直至風干層析板上的樣斑不再展開，停止皂化。未阜化金蓋花浸膏樣斑在層析板上向前伸展出很長距離，而完全阜化金蓋花浸膏在層析板上幾乎沒動，這是因為葉黃素酯在展開劑中溶解性好，而葉黃素單體在展開劑中溶解性差，展開劑在層析板上向上滲析時，含有葉黃素酯的未皂化金盞花浸膏樣液隨展開劑向上伸展，其色譜圖如圖3，未皂化金盞花浸膏樣在進樣0.715min時出現一最高峰，峰面積占全部峰面積的84.50%。而含有葉黃素單體的完全皂化金盞花浸膏樣液在層析板上則幾乎不移動，其色譜圖如圖4，完全皂化金盞花浸膏樣在進樣3.496min時現一最高峰，峰面積占全部峰面積的87.15%，在0.715min附近并沒有出現任何峰，說明浸膏中的葉黃素酯全部皂化。因此，可以用樣液在層析板上的伸展程度定性表示金盞花浸膏的皂化程度，樣液不伸展，說明皂化完全，樣液伸展，說明金盞花浸膏皂化不完全，樣液伸展的程度可以表示金盞花浸膏皂化的程度。對比例
用HPLC法檢測金盞花浸膏的皂化程度時:
I)試劑配制 按體積比10: 7: 6: 7將正己烷(分析純)、丙酮(分析純)、純酒精(分析純)和甲苯(分析純)混勻，配成HEAT混合物；
將10.0Og無水Na2SO4 (分析純)溶解，定容至100ml，配成10%硫酸鈉溶液。2)色譜分析條件
色譜柱:TR-413212 (TRACEREXTRSIL SI) 3ym 15X04。檢測波長:486nm。流動相:正已烷(色譜純):乙酸乙酯(色譜純)=75:25 (體積比)。流速:2.5ml/min,進樣量:25.00 μ 1，時間:8min。3)樣品的制備
3.1用精密天平(靈敏度0.1毫克)分別準確稱取30mg未皂化的金盞花浸膏和實施例中制成的樣液，分別放入50ml容量瓶底部，加入15 ml HEAT混合物，搖動3分鐘，使樣品全部溶解。3.2旋轉I分鐘后置于56°C熱水中10分鐘。3.3冷卻后，加入15ml正己烷于容量瓶內，然后用10%硫酸鈉溶液準確定容至50ml ;搖動3分鐘后置于黑暗中，直至清澈為止。3.4用移液管吸取上層清液1ml，置于25ml容量瓶內，用正己烷定容。
3.5用移液管吸取上述液Iml置于一小試管中，真空干燥,直至試管中液體全部蒸發。3.6在干燥后的試管中加入V(正已烷):V(乙酸乙酯)=75:25 (色譜純，過25μπι濾膜)的混合液1ml，輕輕搖動，使試管中的樣品全部溶解，用固相柱過濾，取25 μ I濾液分析。從實施例和對比例可以看出，本發明方法可以定性地測定金盞花浸膏的皂化程度，測定結果與HPLC法測定結果相符，可以用樣斑在層析板上的伸展程度定性表示金盞花浸膏皂化程度，樣斑不伸展，說明皂化完全，樣斑伸展，說明浸膏皂化不完全，樣斑伸展的程度可以表示浸膏皂化的程度。
權利要求
1.一種葉黃素酯皂化程度快速測定方法，利用葉黃素酯和葉黃素在不同溶劑中的溶解性，采用薄層層析法快速簡便的測定葉黃素酯皂化程度，其特征在于，該快速測定方法的具體步驟為: a)取金盞花浸膏皂化過程中生成的皂化液溶于四氫呋喃中，制成樣液； 清洗玻璃板，干燥； 將硅膠研磨成粘稠狀的硅膠糊； b)將硅膠糊均勻涂布在干燥后的玻璃板上，烘干，制成層析板； c)用微量進樣器抽取樣液，在層析板的娃膠鋪層表面點樣，冷風吹干； d)將石油醚和乙酸乙酯配成展開劑，將點樣后的層析板放入注有展開劑的層析缸中，展開劑液面低于樣點，層析板上的樣液不能滲入展開劑中，于暗處展開，當展開劑到達層析板頂部時，取出層析板暗處風干； e)若風干層析板上的樣斑沒有展開，則說明金盞花浸膏完全皂化，停止金盞花浸膏的皂化；若風干層析板上的樣斑展開，則說明金盞花浸膏未完全皂化，繼續皂化金盞花浸膏，并按上述步驟重復檢測金盞花浸膏的皂化進程，直至風干層析板上的樣斑不再展開，停止皂化。
2.按照權利要求1所述的葉黃素酯皂化程度快速測定方法，其特征在于，所述步驟a)中，將1.0Og皂化液溶于IOml四氫呋喃中制成樣液。
3.按照權利要求1所述的葉黃素酯皂化程度快速測定方法，其特征在于，所述步驟a)中，稱取7 g硅膠，加適 量0.1 mol.!/1硼酸溶液于研缽中充分研磨，形成粘稠狀的硅膠糊。
4.按照權利要求1所述的葉黃素酯皂化程度快速測定方法，其特征在于，所述步驟b)中，將硅膠糊均勻涂布在干燥后的玻璃板上，硅膠糊的鋪層厚度為0.4 mm ;將鋪層后的玻璃板置于100°C烘箱中烘干，制成層析板。
5.按照權利要求1所述的葉黃素酯皂化程度快速測定方法，其特征在于，所述步驟c)中，用微量進樣器抽取樣液，在距離層析板底邊2 cm的水平線上點樣，點樣的樣液量不超過300 μ L，吹風機冷風吹干。
6.按照權利要求1所述的葉黃素酯皂化程度快速測定方法，其特征在于，所述步驟d)中，按體積比4: 1，將沸程為60 90°C的石油醚和乙酸乙酯配成展開劑；將點樣后的層析板放入展開劑中，展開劑液面低于樣點1cm。
全文摘要
本發明提供了一種葉黃素酯皂化程度快速測定方法，將金盞花浸膏皂化過程中的皂化液溶于四氫呋喃，制成樣液；將硅膠糊均勻涂布于清洗干燥后的玻璃板上，制成層析板；用微量進樣器抽取樣液，在層析板上點樣后吹干；用石油醚和乙酸乙酯配成展開劑，將點樣后的層析板放入展開劑，于暗處展開，當展開劑到達層析板頂部時，取出層析板暗處風干；若風干層析板上的樣斑沒有展開，則金盞花浸膏完全皂化；若風干層析板上的樣斑展開，則金盞花浸膏未完全皂化，繼續皂化，重復檢測金盞花浸膏的皂化進程，直至風干層析板上的樣斑不再展開，停止皂化。本檢測方法利用葉黃素酯和葉黃素分子溶解性的不同，快速簡便的測定葉黃素酯皂化程度，測定結果準確，效果顯著。
文檔編號G01N30/90GK103091446SQ20131003807
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月31日 優先權日2013年1月31日
發明者楊憲忠, 周彥芳, 劉強, 何巖, 朱亞, 何友萍, 陳志國 申請人:甘肅省農墾農業研究院