專利名稱:一種甲醛固定液固定組織塊的方法
技術領域:
本發明屬于醫學組織病理學技術專業領域,尤其是一種甲醛固定液固 定組織塊的方法。
背景技術:
傳統醫學組織病理學技術中,4%甲醛固定液固定病理標本取材組織 塊, 一般是用重量體積比為1:10 20 (g/ml)的甲醛固定液多次浸泡處 理組織塊,總用時長不少于4h,使組織塊固定硬化,屬傳統沿襲的人為 經驗性設定作用過程的常規分步處理方法,組織塊固定過程尚無具有溯源 依據的監測方法;此外,由于各醫療單位病理科技術室設施條件、人員專 業技術能力的差異和人為工作習慣的不同,組織塊固定處理工藝不甚一 致,往往造成組織固定不良、效果不一,使切片組織細胞鏡下形態結構存 在差異,是影響組織病理學觀察診斷的主要技術因素,易導致組織病理學 觀察診斷出現偏差。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足,提供一種甲醛固定液固定組 織塊的方法,使組織塊的固定過程符合科學技術原理、具有溯源依據,組 織細胞結構固定良好穩定,能夠輔助提高組織病理學觀察診斷的準確性。 本發明解決其技術問題是通過以下技術方案實現的 一種甲醛固定液固定組織塊的方法,其特征在于其方法包括以下步
驟
(1) 、將組織塊浸泡于反應容器內的中性或微堿性甲醛固定液中并攪
拌;
(2) 、使用在線pH檢測計連續檢測上述固定液的pH值,當固定液的 pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然后更換固定 液;
(3) 、重復步驟(2),直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時長 時仍為》7.0,即達到組織塊處理的反應終點。
而且,所述的組織塊與中性或微堿性甲醛固定液的重量體積比為 1:10 20, g/ml。
而且,所述步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固定液的體積為基準逐次遞減20%。
而且,所述微堿性的pH值為7. 2 7. 6,所述微酸性的報警pH值為 6. 9 6. 5。
而且,步驟③中所述的pH值為7.0 7.6。 本發明的優點和有益效果為
1. 本發明在多次遞減固定液劑量的分步處理過程中,當某一次固定液 的PH值在等同于上一次處理所用時長時仍為^7. 0,即提示確定組織蛋白 質固定的反應終點,使組織塊固定過程具有溯源依據。
2. 本發明在組織塊固定過程中,采用在線pH檢測計連續檢測固定液 的pH值,當固定液的pH值由^7.0轉變為設定的微酸性pH值時,提示 更換固定液。因此本發明能使組織蛋白質氨基酸的甲醛反應始終處于中性 條件,保證了反應生成物的化學性質,使固定后的組織蛋白質性質穩定。
3. 使用本發明方法處理組織塊可以提高組織細胞結構的固定效果,切 片組織細胞鏡下形態結構良好穩定。避免了由于實驗室設施條件、人員專 業技術能力等因素造成的組織塊固定效果差、切片組織細胞鏡下形態結構 存在差異的現象,有效地輔助提高了組織病理學觀察診斷的準確性,為臨 床醫生做出正確的疾病診斷及制定治療方案提供了極大的幫助。
4. 本發明是一種符合科學技術原理、具有溯源依據的甲醛固定液固定 組織塊的方法,本發明用于商品型自動病理組織處理設備,可實現中性(或 微堿性)甲醛固定液固定組織塊過程的智能化全自動工作模式。
具體實施例方式
下面通過具體實施例對本發明作進一步詳述,以下實施例只是描述性 的,不是限定性的,不能以此限定本發明的保護范圍。
一種甲醛固定液固定組織塊的方法,其步驟包括
(1) .將組織塊浸泡于反應容器內的中性(或微堿性pH值=7. 2 7. 6) 甲醛固定液中并攪拌。組織塊與中性(或微堿性)甲醛固定液的重量體積 比為1:10 20 , g/ml。本發明中所涉及的甲醛固定液是由商品甲醛試劑 或多聚甲醛與中性(或微堿性)混合磷酸鹽混配的4%甲醛含量的溶液, 下同。
(2) .使用在線pH檢測計連續檢測上述固定液的pH值,當固定液的pH 值達到微酸性的報警pH值(pH值=6. 9 6. 5)時,記錄該次處理所用時 長,然后更換固定液。
(3) .重復步驟(2),直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時長時 仍為>7.0,即提示達到組織塊處理的反應終點,組織塊固定結束。本發明中,步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固定液的 體積為基準逐次遞減20%。
實施例1
(1) .將總質量為30g的若干塊15 X 15 X 3mm大小的組織塊浸泡于反應容 器內的300ml微堿性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測計連續檢測固定液的pH值,反應一段時間后,當 固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然后 將固定液傾倒出來。本實施例中的微酸性報警pH值為6. 8。
(3) .更換固定液,將240ml的微堿性甲醛固定液置于反應容器中與組織 塊繼續進行反應并計時,在不大于第一次處理所用時長內,若固定液的 pH值達到6. 8時,更換固定液并記錄第二次處理所用時長。
(4) .第三次用180ml的微堿性甲醛固定液處理并計時,在不大于第二 次處理所用時長內,若固定液的pH值檢測達到6.8時,更換固定液并記 錄第三次處理所用時長。
(5) .第四次用120ml的微堿性甲醛固定液處理并計時,若在等同于第 三次處理所用時長時,固定液的pH值檢測為7.6,即提示達到組織塊處 理的反應終點,組織塊固定結束。
實施例2
(l).將總質量為25g的若干塊15X15X3mm大小的組織塊浸泡于反應 容器內的300ml微堿性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測計連續檢測固定液的pH值,反應一段時間后,當 固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然后 將固定液傾倒出來。本實施例中的微酸性報警pH值為6. 5。
(3) .更換固定液,將240ml的微堿性甲醛固定液置于反應容器中與組織 塊繼續進行反應并計時,在不大于第一次處理所用時長內,若固定液的 pH值達到6. 5時,更換固定液并記錄第二次處理所用時長。
(4) .第三次用180ml的微堿性甲醛固定液處理并計時,在不大于第二 次處理所用時長內,若固定液的pH值檢測達到6.5時,更換固定液并記 錄第三次處理所用時長。
(5) .第四次用120ml的微堿性甲醛固定液處理并計時,若在等同于第 三次處理所用時長時,固定液的pH值檢測為7.0,即提示達到組織塊處 理的反應終點,組織塊固定結束。(1) .將總質量為30g的若干塊15X15X3咖大小的組織塊浸泡于反應 容器內的450ml中性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測計連續檢測固定液的pH值,反應一段時間后, 當固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然 后將固定液傾倒出來。本實施例中的微酸性報警pH值為6. 9。
(3) .更換固定液,將360ml的中性甲醛固定液置于反應容器中與組織 塊繼續進行反應并計時,在不大于第一次處理所用時長內,若固定液的 pH值達到6. 9時,更換固定液并記錄第二次處理所用時長。
(4) .第三次用270ml的中性甲醛固定液處理并計時,在不大于第二次 處理所用時長內,若固定液的pH值檢測達到6.9時,更換固定液并記錄 第三次處理所用時長。
(5) .第四次用180ml的中性甲醛固定液處理并計時,若在等同于第三 次處理所用時長時,固定液的pH值檢測仍為7.0,即提示達到組織塊處 理的反應終點,組織塊固定結束。
實施例4
(1) .將總質量為30g的若干塊15X 15X3mm大小的組織塊浸泡于反應 容器內的600ml中性甲醛固定液中并攪拌。
(2) .使用在線pH檢測計連續檢測固定液的pH值,反應一段時間后, 當固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然 后將固定液傾倒出來。本實施例中的微酸性報警pH值為6.9。
(3) .更換固定液,將480ml的中性甲醛固定液置于反應容器中與組織 塊繼續進行反應并計時,在不大于第一次處理所用時長內,若固定液的 pH值達到6. 9時,更換固定液并記錄第二次處理所用時長。
(4) .第三次用360ml的中性甲醛固定液處理并計時,在不大于第二次 處理所用時長內,若固定液的pH值檢測達到6.9時,更換固定液并記錄 第三次處理所用時長。
(5) .第四次用240ml的中性甲醛固定液處理并計時,若在等同于第三 次處理所用時長時,固定液的pH值檢測仍為7. 0,即提示達到組織塊處 理的反應終點,組織塊固定結束。
本發明的原理為
基于生物化學和有機化學相關理論的研究認為,甲醛固定液對組織塊
6的固定作用機理是甲醛能與組織蛋白質上幾乎所有的結構基團發生加成 反應,尤其氨基酸中的ci-氨基在常溫和中性(或弱堿性)條件下就容易 與甲醛反應生成一種相對穩定的二羥甲基化合物——N, N-二羥甲基氨基 酸,該反應也稱氨基酸的甲醛反應,是具有代表性的、主要的甲醛固定組 織蛋白質的化學反應。甲醛作為一種蛋白質交聯劑,其分子間的交聯作用 導致蛋白質本身結構改變,使組織變硬且失去彈性,從而抑制了一切細胞 機能,達到組織固定、組織硬化的目的。
R- CH( NH3+ )- C00一 + 2HCH0 — R- CH{ N(CH20H)2 }- ■ + H+
隨著蛋白質固定的化學反應進行,每2個甲醛分子結合掉1個-NH" 就會有l個H+釋放到固定液中,導致固定液中H+濃度逐漸增高,專業理論 中使用中性甲醛固定液的目的就在于保持固定液的PH值穩定。但是混合 磷酸鹽的緩沖能力是有一定限度的,反應生成的H+濃度超出其緩沖能力 后,固定液的pH值就趨向酸性變化,酸性溶媒條件不能反應生成性質相 對穩定的二羥甲基化合物,因此在蛋白質氨基酸的甲醛反應過程中,監測 固定液的pH值保持中性條件,既能保證生成產物的化學性質,又能作為
更換固定液的良好指標,還能提示確定組織蛋白質固定的反應終點,使組 織塊固定過程具有溯源依據。
權利要求
1、一種甲醛固定液固定組織塊的方法,其特征在于其方法包括以下步驟(1)、將組織塊浸泡于反應容器內的中性或微堿性甲醛固定液中并攪拌;(2)、使用在線pH檢測計連續檢測上述固定液的pH值,當固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然后更換固定液;(3)、重復步驟(2),直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時長時仍為≥7.0,即達到組織塊處理的反應終點。
2、 根據權利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法, 其特征在于所述的組織塊與中性或微堿性甲醛固定液的重量體積比 為1:10 20, g/ml。
3、 根據權利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法, 其特征在于所述步驟(2)中每次所更換固定液的體積以第一次所用固 定液的體積為基準逐次遞減20%。
4、 根據權利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法, 其特征在于所述微堿性的pH值為7. 2 7. 6,所述微酸性的報警pH 值為6. 9 6. 5。
5、 根據權利要求1所述的一種甲醛固定液固定組織塊的方法, 其特征在于步驟(3)中所述的pH值為7.0 7.6。
全文摘要
本發明涉及一種甲醛固定液固定組織塊的方法,其方法包括以下步驟(1)將組織塊浸泡于反應容器內的中性或微堿性甲醛固定液中并攪拌;(2)使用在線pH檢測計連續檢測上述固定液的pH值,當固定液的pH值達到微酸性的報警pH值時,記錄該次處理所用時長,然后更換固定液;(3)重復步驟(2),直至固定液的pH值在等同于上一次處理所用時長時仍為≥7.0,即達到組織塊處理的反應終點。本發明是一種符合科學技術原理、具有溯源依據的甲醛固定液固定組織塊的方法,本發明用于商品型自動病理組織處理設備,可實現中性(或微堿性)甲醛固定液固定組織塊過程的智能化全自動工作模式。
文檔編號G01N1/28GK101476999SQ200910067780
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月23日 優先權日2009年1月23日
發明者劉志蘭, 望 張, 張健飛, 梅興明, 趙寶忠 申請人:趙寶忠