一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種含兔耳草制劑的含量檢測方法，通過脫脂處理、水飽和正丁醇提取、大孔樹脂去雜濃縮等步驟得到供試品溶液，并進一步采用不同配比的甲醇和0.1%的磷酸為流動相進行梯度洗脫，對其中的松果菊苷予以分離檢測，操作較簡便，專屬性強，干擾較小，分離度高，在一定濃度范圍內線性較好，可用于含兔耳草制劑的含量檢測。
【專利說明】一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種制劑的含量檢測方法，特別涉及一種含有兔耳草的制劑的含量檢測方法。
【背景技術】
[0002]兔耳草為玄參科植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim.或全緣兔耳草L.1ntegraff.Smith.的干燥全草。夏秋花盛期采收，除去雜質，洗凈，陰干。本品為藏藥制劑中常用藥材，具有清熱解毒、行血調經的功效。目前，兔耳草作為原料藥材的成方制劑共有20多個,如二十五味大湯丸，二十五味大湯散，二十五味余甘子丸，二十五味余甘子散，二十五味竺黃散，二十五味獐牙菜散，二十五味肺病丸，二十五味獐牙菜丸，十味訶子湯散，八味主藥散，八味獐牙菜丸，八味獐牙菜散，九味青鵬散，九味竺黃散，九味獐牙菜丸，三十五味沉香丸，大月晶丸，智托潔白丸等等。
[0003]兔耳草現行標準為藏藥部頒標準，標準號:WS3-BC-0063-95。該標準只簡單敘述了兔耳草的形狀和鑒別。文章《藏藥短管兔耳草中松果菊苷和麥角留苷的RP-HPLC分析》介紹了一種以甲醇-1%冰醋酸溶液(28:72，V:V)為流動相，同時測定短管兔耳草中松果菊苷和麥角甾的方法。藥典2010年版記載了洪連(即兔耳草)以乙腈-甲醇-1%醋酸(10:15:75)為流動相的含量檢測方法。但以上方法只適用于藥材的含量檢測，在用于含有兔耳草制劑的含量檢測時，由于其他藥味干擾嚴重，同時主要檢測成分含量較少，均不能達到HPLC法含量檢測要求。故現階段急需一種具有通用性的含兔耳草制劑的含量檢測方法。
【發明內容】
[0004]為克服現有技術的不足，本發明提供了一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法。
[0005]術語說明:
[0006]本發明所述的梯度洗脫方式為根據時間梯度性地改變A、B兩種洗脫液的比例，以期將層析柱上不同的組分在合理的時間內洗脫出來的方法。
[0007]安兒寧顆粒、藏降脂膠囊、八味獐牙菜丸、九味青鵬散、九味竺黃散、智托潔白丸均為國家中成藥標準匯編(中成藥地方標準上升國家標準部分)記載的藥品名稱。標準編號如下:安兒寧顆粒:WS-10640(ZD-0640)-2002 ;藏降脂膠囊:WS_10864(ZD-0864)-2002 ;八味獐牙菜丸:WS3-BC-0241-95 ;九味青鵬散:WS3-BC-0247_95 ;九味竺黃散:WS3-BC-0248_95 ；智托潔白丸:WS3-BC-0334-95。
[0008]本發明的技術方案如下:
[0009]一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法，包括如下步驟:
[0010]A、色譜條件與系統適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長330-340nm ;理論板數按松果菊苷峰計算應不低于4000 ；
[0011]B、流動相:以甲醇為流動相A，以體積百分比0.1%的磷酸為流動相B ;按照梯度洗脫方式進行洗脫=Omin — 25min — 40min,上述時間段內，流動相A:20% — 35% — 60% ;流動相 B:80% — 65% — 40% ；
[0012]C、對照品溶液:取松果菊苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得；
[0013]D、供試品溶液:取相當于兔耳草0.2-lg的含有兔耳草制劑樣品粉末，精密稱定，濾紙包好，石油醚索氏提取法處理2-3h以除去脂溶性成分，處理后的樣品粉末轉移至棕色量瓶中，加入水飽和正丁醇40-60ml，浸泡20-40分鐘，超聲處理30-40分鐘，放冷，過濾，濾液蒸干后加IOOml水溶解，注入柱體積IOOml的DlOl大孔樹脂柱，以200_300ml的水沖洗，棄去沖洗液,再以體積百分比5%甲醇80-100ml沖洗，棄去沖洗液，加體積百分比80%甲醇IOOml沖洗，所得沖洗液在30-40°C蒸干，殘渣加IOml體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，過濾，取續濾液，即得；
[0014]E、測定法:取對照品溶液及供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算松果菊苷的含量。
[0015]本發明優選的，一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法，包括如下步驟:
[0016]Α、色譜條件與系統適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長334nm ；理論板數按松果菊苷峰計算應不低于4000 ；
[0017]B、流動相:以甲醇為流動相A，以體積百分比0.1%的磷酸為流動相B ;按照梯度洗脫方式進行洗脫=Omin — 25min — 40min,上述時間段內，流動相A:20% — 35% — 60% ;流動相 B:80% — 65% — 40% ；
[0018]C、對照品溶液:取松果菊苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得；
[0019]D、供試品溶液:取相當于兔耳草0.5g的含有兔耳草制劑樣品粉末，精密稱定，濾紙包好，石油醚索氏提取法處理3h以除去脂溶性成分，處理后的樣品粉末轉移至棕色量瓶中，加入水飽和正丁醇50ml，浸泡30分鐘，超聲處理40分鐘，放冷，過濾，濾液蒸干后加IOOml水溶解，注入柱體積IOOml的DlOl大孔樹脂柱，以300ml的水沖洗，再以體積百分比5%甲醇IOOml沖洗，棄去沖洗液，加體積百分比80%甲醇IOOml沖洗，所得沖洗液在30_40°C蒸干，殘渣加IOml體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，過濾，取續濾液，即得；
[0020]E、測定法:取對照品溶液及供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算松果菊苷的含量。
[0021]本發明所述的兔耳草為短管兔耳草或全緣兔耳草，優選短管兔耳草。
[0022]本發明所述的含有兔耳草的制劑是指含有兔耳草的原料藥，按常規工藝，加入常規輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，包括膠囊劑、丸劑、微丸、滴丸、片劑、軟膠囊、顆粒、口服液。
[0023]本發明優選的含有兔耳草的制劑包括安兒寧顆粒、藏降脂膠囊、八味獐牙菜丸、九味青鵬散、九味竺黃散或智托潔白丸。更為優選安兒寧顆粒或藏降脂膠囊。
[0024]有益效果
[0025]與現有技術相比，本發明的優點如下:
[0026]現有技術中無直接用于含兔耳草制劑的含量檢測方法，僅有針對兔耳草藥材的檢測方法，而該方法無法用于復方制劑的檢測。本發明的檢測方法通過脫脂處理、水飽和正丁醇提取、大孔樹脂去雜濃縮等步驟得到供試品溶液，并進一步采用不同配比的甲醇和體積百分比0.1%的磷酸為流動相進行梯度洗脫，對其中的松果菊苷予以分離檢測，操作較簡便，專屬性強，干擾較小，分離度高，在一定濃度范圍內線性較好，可用于含兔耳草制劑的含量檢測。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0027]圖1是安兒寧顆粒樣品溶液高效液相色譜圖；
[0028]圖2是松果菊苷對照品溶液高效液相色譜圖；
[0029]圖3是松果菊苷線性關系圖；
[0030]其中，圖1、圖2的橫坐標是時間，單位:分鐘(分鐘min);縱坐標是電壓，單位:伏特(Volts)。
【具體實施方式】
[0031 ] 下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。
[0032]實驗例1:安兒寧顆粒中短管兔耳草的含量檢測
[0033]1.儀器、試藥和供試樣品
[0034]儀器:Agilentl260Infinity型高效液相色譜儀；島津AUW220D電子天平。
[0035]對照品:松果菊苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:111670-200503)。
[0036]樣品:安兒寧顆粒(青海金訶藏藥藥業股份有限公司提供，批號分別為:20121110、20121114、201211 19)。
[0037]2.檢測波長的選擇
[0038]取松果菊苷對照品溶液，于190~500nm波長范圍內進行掃描,在334nm波長處有最大吸收，故根據紫外吸收圖譜選定334nm為檢測波長。
[0039]3.流動相選擇
[0040]研究發現，以甲醇為流動相A，以體積百分比0.1%的磷酸為流動相B，按表1方式進行洗脫，松果菊苷能達到很好的色譜分離效果。
[0041]表1洗脫方式I
[0042]
【權利要求】
1.一種含有兔耳草制劑的含量檢測方法，特征在于，包括如下步驟: A、色譜條件與系統適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長330-340nm；理論板數按松果菊苷峰計算應不低于4000 ； B、流動相:以甲醇為流動相A，以體積百分比0.1%的磷酸為流動相B ;按照梯度洗脫方式進行洗脫:0min — 25min — 40min,上述時間段內，流動相A:20% — 35% — 60% ;流動相B:80% — 65% — 40% ； C、對照品溶液:取松果菊苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得； D、供試品溶液:取相當于兔耳草0.2-lg的含有兔耳草的制劑樣品粉末，精密稱定，濾紙包好，石油醚索氏提取法處理2-3h以除去脂溶性成分，處理后的樣品粉末轉移至棕色量瓶中，加入水飽和正丁醇40-60ml，浸泡20-40分鐘，超聲處理30-40分鐘，放冷，過濾，濾液蒸干后加100ml水溶解，注入柱體積100ml的DlOl大孔樹脂柱，以200_300ml的水沖洗，棄去沖洗液,再以體積百分比5%甲醇80-100ml沖洗，棄去沖洗液，加體積百分比80%甲醇100ml沖洗，所得沖洗液在30-40°C蒸干，殘渣加IOml體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，過濾，取續濾液，即得； E、測定法:取對照品溶液及供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算松果菊苷的含量。
2.根據權利要求1所 述的含量檢測方法，特征在于，檢測波長為334nm。
3.根據權利要求1或2所述的含量檢測方法，特征在于，供試品溶液由如下方法制備:取相當于兔耳草0.5g的含有兔耳草的制劑樣品粉末，精密稱定，濾紙包好，石油醚索氏提取法處理3h以除去脂溶性成分，處理后的樣品粉末轉移至棕色量瓶中，加入水飽和正丁醇40-60ml，浸泡30分鐘，超聲處理40分鐘，放冷，過濾，濾液蒸干后加100ml水溶解，注入柱體積100ml的DlOl大孔樹脂柱，以300ml的水沖洗，再以體積百分比5%甲醇100ml沖洗，棄去沖洗液，加體積百分比80%甲醇100ml沖洗，所得沖洗液在30-40°C蒸干，殘渣加IOml體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，過濾，取續濾液，即得。
4.根據權利要求1或3所述的含量檢測方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制劑是指含有兔耳草的原料藥，按常規工藝，加入常規輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，包括膠囊劑、丸劑、微丸、滴丸、片劑、軟膠囊、顆粒、口服液。
5.根據權利要求4所述的含量檢測方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制劑為安兒寧顆粒、藏降脂膠囊、八味獐牙菜丸、九味青鵬散、九味竺黃散或智托潔白丸。
6.根據權利要求1或3所述的含量檢測方法，特征在于，所述的兔耳草為短管兔耳草。
7.根據權利要求5所述的含量檢測方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制劑為安兒寧顆粒或藏降脂膠囊。
8.根據權利要求1所述的含量檢測方法，特征在于，包括如下步驟: A、色譜條件與系統適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長334nm;理論板數按松果菊苷峰計算應不低于4000 ； B、流動相:以甲醇為流動相A，以體積百分比0.1%的磷酸為流動相B ;按照梯度洗脫方式進行洗脫:0min — 25min — 40min,上述時間段內，流動相A:20% — 35% — 60% ;流動相B:80% — 65% — 40% ；C、對照品溶液:取松果菊苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得； D、供試品溶液:取含有相當于短管兔耳草0.5g的安兒寧顆粒粉末Sg，精密稱定，濾紙包好，石油醚索氏提取法處理3h以除去脂溶性成分，處理后的樣品粉末轉移至棕色量瓶中，加入水飽和正丁醇50ml，浸泡30分鐘，超聲處理40分鐘，放冷，過濾，濾液蒸干后加100ml水溶解，注入柱體積100ml的DlOl大孔樹脂柱，以300ml的水沖洗，棄去沖洗液,再以體積百分比5%甲醇100ml沖洗，棄去沖洗液，加體積百分比80%甲醇100ml沖洗，所得沖洗液在30-40°C蒸干，殘渣加IOml體積比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，過濾，取續濾液，即得； E、測定法:取對照品溶液及供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算松果菊苷的`含量。
【文檔編號】G01N30/02GK103822993SQ201410096039
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月14日 優先權日:2014年3月14日
【發明者】孫山, 劉軍田, 任松鵬, 孫緒丁, 魏愛云 申請人:山東阿如拉藥物研究開發有限公司
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