一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法
【專利摘要】本發明涉及一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其步驟為：（1）配制標準溶液；（2）配制酶液；（3）建立標準曲線；（4）采用頂空-氣相色譜進行樣品檢測；（5）結果計算。本發明利用生物酶與頂空氣相色譜相結合的方式測定過氧化氫含量。本方法的有益效果在于，采用了上述的方法測定過氧化氫的含量，具有專一性強，準確度高，方便快捷、測定時間短，抗干擾能力強等優點，并適合樣品批量檢測。
【專利說明】一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及過氧化氫含量含量檢測【技術領域】，具體涉及一種利用生物酶結合頂空-氣相色譜測定過氧化氫含量的方法。
【背景技術】
[0002]過氧化氫(H2O2)俗名雙氧水，是一種具有強氧化性、腐蝕性的無色液體，可作為消毒劑、脫氯劑、漂白劑、氧化劑和聚合反應的引發劑等，被廣泛應用于工業、農業、化工、醫藥、造紙、國防等領域中。準確測定過氧化氫含量對提高過氧化氫作用效率，控制其反應過程具有重要意義。
[0003]目前，檢測過氧化氫的方法主要有下述幾類:常規滴定法、分光光度法、化學發光法、熒光光度法、色譜法、酶化學法、電化學分析法等。其中，碘量法是工廠實踐中應用最廣泛的過氧化氫測定方法，該方法操作簡單，但靈敏度低，干擾因素多，具有費時、費料、終點色變不明顯等不足。因此建立一種簡便、快速、準確測定過氧化氫含量的方法具有現實意義。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，克服目前測定過氧化氫含量的方法所存在的弊端。本發明的利用過氧化氫酶能夠降解過氧化氫產生氧氣的原理，然后采用頂空-氣相色譜法在所限定的條件下測定產生的氧氣量，得到樣品中過氧化氫的含量。本發明可以實現快速測定，操作簡單且易掌握，其分析結果準確度高，具有一定的實用性，適合批量檢測。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的。
[0006]一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其具體包括以下步驟:
[0007](I)配制過氧化氫標準溶液:將過氧化氫試劑按國家標準GB6684-2002進行化學法標定；
[0008](2)配制酶液:稱取適量的過氧化氫酶，加入緩沖液溶解，然后稀釋至一定刻度；
[0009](3)建立標準曲線:在多個頂空樣品瓶中均分別加入足量體積的所述酶液，并密封樣品瓶，然后用微量進樣器往不同頂空樣品瓶中依次加入不同量的所述過氧化氫標準溶液，將樣品瓶放于水浴鍋中，在適當溫度下反應后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，根據氧氣信號峰面積與過氧化氫量之間的對應關系得到一條標準曲線.[0010](4)樣品檢測:量取適量的待測樣品，將待測樣品用微量進樣器加入至已密封的，且裝有所述酶液的頂空樣品瓶中，將樣品瓶放于水浴鍋中，在適當溫度下反應后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，記錄下樣品的氧氣色譜峰面積；
[0011](5)結果計算:將步驟(4)所得峰面積與步驟(3)標準曲線進行比較，得到樣品中過氧化氫的含量。[0012]進一步優化的，步驟(I)中所述過氧化氫標準溶液的濃度為0.5?5.0mol/L。
[0013]進一步優化的，步驟(2)中所述酶液的濃度為0.5?10.0g/L。
[0014]進一步優化的，步驟(3)中所述加入的酶液體積為1.0?5.0mL，加入的過氧化氫標準溶液體積為0.0?2.0mL。
[0015]進一步優化的，步驟(3)和(4)中所述放置樣品瓶的水浴鍋溫度為25?50°C，反應時間為5?30min。
[0016]進一步優化的，步驟(3)和(4)中所述的頂空進樣器的操作條件為:進樣器加熱爐溫度65?90°C ;頂空瓶在烘箱中的平衡時間1.0?5.0min。
[0017]進一步優化的，步驟(3)和(4)中所述的氣相色譜操作條件為:柱溫為60?90°C;載氣為高純氮氣，其流速為3.5?4.5mL/min ;檢測器為熱導檢測器(T⑶)，檢測器溫度為180 ?200。。。
[0018]進一步優化的，步驟(4)中所述的取適量的待測樣品，其體積為0.1?3.0mL。
[0019]進一步優化的，上述方法具體包括如下步驟:
[0020](I)配制過氧化氫標準溶液:將過氧化氫試劑按國家標準GB6684-2002進行化學法標定。
[0021](2)配制酶液:準確稱0.05?1.0g過氧化氫酶，加入緩沖液溶解，然后稀釋至IOOmL,所得酶液中酶的含量為0.5?10.0g/L。
[0022](3)建立標準曲線:在一系列的頂空樣品瓶中分別加入1.0?5.0mL的酶液，并密封樣品瓶，然后往不同頂空樣品瓶中依次加入0.0?2.0mL濃度為0.5?5.0mol/L的過氧化氫標準溶液，將樣品瓶放于水浴鍋中，在25?50°C下反應5?30min時間后,將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，所得氧氣信號峰面積與過氧化氫量之間能得到一條標準曲線。
[0023](4)樣品檢測:準確量取0.1?3.0mL的待測樣品，將其用進樣器加入至已密封的，且裝有酶液的頂空樣品瓶中，將樣品瓶放于水浴鍋中，在25?50°C下反應5?30min時間后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，記錄下樣品的氧氣色譜峰面積。
[0024](5)結果計算:將步驟(4)所得峰面積與步驟(3)標準曲線進行比較，通過計算得到樣品中過氧化氫的含量。
[0025]與現有技術相比，本發明的優點和積極效果為:
[0026]( I)該方法操作簡便，專一性強；
[0027](2)該方法的準確性好，靈敏度較高；
[0028](3)測定過程時間短；
[0029](4)抗干擾能力強；
[0030]( 5 )適合批量檢測。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0031]圖1為實例中氧氣信號峰面積-過氧化氫量對應關系的標準曲線。
【具體實施方式】
[0032]下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。本發明并不局限于以下實施方式。實施例僅用于解釋本發明，而非限制本發明，對于涉及本發明的簡單變化均應屬于本發明的保護范圍。
[0033]實施例1過氧化尿素中過氧化氫含量的測定
[0034](I)配制過氧化氫標準溶液:準確量取2.0mL質量百分比濃度為30%的過氧化氫溶液，加入去離子水稀釋至IOOmL,然后按國家標準GB6684-2002進行化學法標定。
[0035](2)配制酶液:準確稱0.4g過氧化氫酶，加入磷酸鹽緩沖液溶解，然后稀釋至IOOmL0
[0036](3)建立標準曲線:在一系列的頂空樣品瓶中分別加入3.0mL的酶液，并密封樣品瓶，然后往不同頂空樣品瓶中依次加入0、0.1,0.25,0.5,0.75、1.0、1.5mL過氧化氫標準溶液，將樣品瓶放于水浴鍋中，在37°C下反應5min時間后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，由所得氧氣信號峰面積與過氧化氫量之間的對應關系得到一條標準曲線，如圖1所示。
[0037](4)樣品檢測:準確稱取5.0OOg過氧化尿素樣品，溶于去離子水中，然后加水定容至IOOmL得到過氧化尿素水溶液，作為待測樣品。準確量取0.2mL的待測樣品，將其用微量進樣器加入至已密封的，且裝有3mL酶液的頂空樣品瓶中，將樣品瓶放于水浴鍋中，在37°C下反應5min時間后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，記錄下樣品的氧氣色譜峰面積。所述的頂空樣品瓶、進樣器的操作條件為:進樣器加熱爐溫度70°C;頂空樣品瓶在烘箱中的平衡時間4.0min。所述的氣相色譜操作條件為:柱溫為70°C ;載氣為高純氮氣，其流速為3.5mL/min ;檢測器為熱導檢測器(T⑶)，檢測器溫度為200°C。
[0038](5)結果確定:將步驟(4)所得峰面積與步驟(3)標準曲線進行比較，通過得到樣品中過氧化氫的含量。測定數據結果如表1所述。
[0039]表1`
【權利要求】
1.一種通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于，包括下述的步驟: (1)配制過氧化氫標準溶液:將過氧化氫試劑按國家標準GB6684-2002進行化學法標定; (2)配制酶液:稱取適量的過氧化氫酶，加入緩沖液溶解，然后稀釋至一定刻度； (3)建立標準曲線:在多個頂空樣品瓶中均分別加入足量體積的所述酶液，并密封樣品瓶，然后用微量進樣器往不同頂空樣品瓶中依次加入不同量的所述過氧化氫標準溶液，將樣品瓶放于水浴鍋中，在適當溫度下反應后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，根據氧氣信號峰面積與過氧化氫量之間的對應關系得到一條標準曲線； (4)樣品檢測:量取適量的待測樣品，將待測樣品用微量進樣器加入至已密封的，且裝有所述酶液的頂空樣品瓶中，將樣品瓶放于水浴鍋中，在適當溫度下反應后，將其放置于樣品臺上，然后進行頂空-氣相色譜檢測，記錄下樣品的氧氣色譜峰面積； (5)結果計算:將步驟(4)所得峰面積與步驟(3)標準曲線進行比較，得到樣品中過氧化氫的含量。
2.根據權利要求1所述的測定過氧化氫含量的方法，其特征在于步驟(1)中所述過氧化氫標準溶液的濃度為0.5^5.0 mol/L。
3.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(2)中所述酶液的濃度為0.5~10.0 g/L。
4.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(3)中所加入的酶液體積為1.0-5.0 mL，加入的過氧化氫標準溶液體積為0.0-2.0mL。
5.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(3)和(4)中所述溫度均為25~50°C，反應時間為5~30min。
6.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(3)和(4)中所述的微量進樣器、頂空樣品瓶的操作條件為:進樣器加熱爐溫度65^900C ;頂空樣品瓶在烘箱中的平衡時間l.(T5.0 min。
7.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(3)和(4)中所述的氣相色譜操作條件為:柱溫為6(T90°C ;載氣為高純氮氣，其流速為3.5^4.5 mL/min ;檢測器為熱導檢測器(TCD)，檢測器溫度為18(T200°C。
8.根據權利要求1所述的通過測定氧氣濃度來確定過氧化氫含量的方法，其特征在于:步驟(4)中所述待測樣品的體積為0.1~3.0 mL。
【文檔編號】G01N30/02GK103713061SQ201310745895
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月30日 優先權日:2013年12月30日
【發明者】李海龍 申請人:華南理工大學
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
