能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條及其方法
【專利摘要】本發明屬于體外診斷領域，具體涉及一種能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條及其方法。所述試條的標記墊（3）包被有量子點標記的HBsAg單抗、HIVAg、HCVAg和TPAg的混合物，分析膜（7）的T帶（4）包被有HBsAg單抗、HIVAg、鼠抗人抗體和TPAg的混合物，分析膜（7）的C帶（5）包被有二抗。各被檢物標準曲線采用電子標簽進行儲存并安裝在試條上。所述試條采用具有信號檢測功能的檢測儀讀取電子標簽存貯的標準曲線并結合檢測儀測得的待測樣品對應的熒光強度而同步定量檢測樣品中的HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb濃度。
【專利說明】能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條及其方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于體外診斷領域，具體涉及一種能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條及其方法。
【背景技術】
[0002]乙肝、丙肝、艾滋病和梅毒是與血液安全相關的4種常見傳染病。我國衛生部規定，獻血員必須檢查乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒抗體(HCVAb)、艾滋病毒抗體(HIVAb)、梅毒螺旋體抗體(TPAb)，所有醫院和血液制品用血也必須檢查上述4種血液傳染病。
[0003]目前，對上述4種血液傳染病檢測常采用酶聯免疫吸附方法(ELISA)和膠體金免疫層析方法(Gold-1mmunochromatography Assay, GICA)。這些方法存在諸多不足:ELISA方法檢測樣品:①待檢樣品需要離心機先分離出血清，需要使用孵育箱、酶標儀、洗板機等儀器設備；②每次只能檢測一種指標檢測過程復雜，耗時，每一指標檢測至少需要40-60分鐘；④檢測一般需要攢夠一定數量的樣品才能進行；⑤不能實現現場快速檢測。GICA方法雖然能實現樣品現場快速檢測，但一次只能檢測樣品中的一種指標，而且只能定性檢測而不能定量檢測樣品。
[0004]樣品多種組分同步檢測，特別是多種組分同步快速定量檢測，對檢測領域樣品分析具有非常重要意義，其是人們一直追求的目標，是人們長期渴望解決而未能解決的問題。傳統上測定混合體系中樣品多種組分含量，多采用平行單組分分析法，即每個分析流程只測定其中一種組分含量，多次平行執行該流程，最后得到所有所需組分含量。分析所需時間長，消耗試劑多，分析通量低，勞動量大。
[0005]近年發展的納米量子點(quantum dots, QDs)突光發光效率高,激發譜線范圍寬，能“一元激發，多元發射”，發射譜線范圍窄且對稱，光漂白速度慢，熒光壽命長，粒徑與生物分子相近，表面修飾后能多功能化，不同粒徑和種類的量子點混合物產生的特征波長熒光光譜不交疊，非常適用于樣品多組分分析。
[0006]本發明結合QDs多組分分析的獨特優勢和免疫層析技術簡單快速優勢，公開一種能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條及其方法，以解決乙肝、丙肝、梅毒和艾滋病4種血液傳染病指標同步定量問題。
【發明內容】
[0007]本發明的第一個目的是公開一種能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，本發明的第二個目的是公開所述試條的制備方法、標準曲線制作方法、以及用所述試條同步定量檢測血液樣品HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb的方法。
[0008]本發明上述目的是通過如下技術方案實現的:
所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，包括順次搭接固定在底襯8上的樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6。
[0009]所述標記墊3為玻璃纖維膜。所述分析膜7為硝酸纖維素膜、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，其上具有檢測帶(即T帶)4和質控帶(即C帶)5。所述底襯8為聚脂或塑料板。
[0010]所述標記墊3包被有量子點a標記的HBsAg單抗、量子點b標記的HIVAg、量子點c標記的HCVAg、量子點d標記的TPAg的混合物。所述分析膜7的T帶4包被有HBsAg單抗、HIVAg、鼠抗人抗體和TPAg的混合物。所述分析膜7的C帶5包被有二抗。
[0011]本發明所述試條的標記墊3的量子點包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (OH)2,CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS, CaSe, CaTe, SrS, SrSe, SeTe、BaS、BaSe> BaTe> CdS:Mn> ZnS:Mn> CdS:Cu> ZnS:Cu> CdS:Tb> ZnS:Tb 中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點為核、二氧化硅為殼的核-殼型納米復合粒子。
[0012]本發明所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條的制備方法包括下述步驟:
A.量子點偶聯相關抗體/抗原:
a)取水溶性量子點用磷酸緩沖液(PBS)調pH=6-9，加入EDC(1_(3_ 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺鹽酸鹽)和NHS (N-羥基硫代琥珀酸亞胺)室溫活化10-60min ；
b)加被檢物相應抗體/抗原旋渦振蕩反應0.5-3h ；
c)加入牛血清白蛋白(BSA)，避光封閉反應0.5-2h;
d)離心純化產物；
取沉淀用PBS緩沖液重懸分散，4°C保存。
[0013]B.試條組件制備:
a)樣品墊1:選用纖維素膜作材料切成一定規格的膜塊，將該膜塊放入含有
0.1%-10%BSA和0.01%-10%Tween 20的磷酸緩沖液(PBS)中浸泡，取出，干燥備用。
[0014]b)紅細胞濾膜2:選紅細胞濾膜切成一定規格膜塊，干燥備用。
[0015]c)標記墊3:選用玻璃纖維膜切成一定規格的膜塊,加量子點a標記的HBsAg單抗、量子點b標記的HIVAg、量子點c標記的HCVAg和量子點d標記的TPAg的混合物溶液于該膜塊上，干燥膜塊備用。
[0016]d)分析膜7:選用纖維素膜切成一定規格的膜塊，自膜塊底邊起由下自上相隔一定距離分別噴點HBsAg單抗(0.5-10mg/ml)、HIVAg (0.5-lOmg/ml)、鼠抗人抗體(0.5-10mg/ml)和 TPAg (0.5-lOmg/ml)的混合物作 T 帶 4,噴點 0.5-lOmg/ml 二抗作 C 帶5，干燥膜塊備用。
[0017]吸水墊6:選用具有吸水作用的纖維膜切成一定規格的膜塊，干燥備用。
[0018]C.試條組件組裝:
上述制備好的試條組件按樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6順次搭接粘貼于底襯8上，切成一定規格的試條，裝入塑料盒中，與干燥劑一起裝入鋁箔袋內密封儲存。
[0019]本發明所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條定量檢測血液傳染病4項指標用的標準曲線的制備方法包括如下步驟:
Ca)配制HBsAg、HIVAb, HCVAb、TPAb標準品系列濃度，并滴加到量子點免疫層析試條上。
[0020](b)用檢測儀分別讀取T帶的熒光強度(ODt)和C帶的熒光強度(0D。)，計算獲得ODtADc 比值或 ODt/ (0Dt+0Dc)比值。
[0021]rc；以標準品系列濃度作X軸，0Dt/0Dc比值作Y軸，或以標準品系列濃度作X軸，ODt/ (0Dt+0Dc)比值作Y軸，得到熒光強度與濃度對應標準曲線。
[0022]本發明所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條定量檢測血液傳染病4項指標用的標準曲線的制備方法包括如下步驟:
用電子標簽存貯標準曲線數據。所述電子標簽包括具有信息存貯功能的RFID (射頻識別標簽)、二維碼、條碼、或IC卡芯片。
[0023]O)存貯有標準曲線數據的電子標簽安裝在量子點標記試條上，或安裝在裝載試條的試條盒上。
[0024]用具有信號檢測功能的檢測儀讀取電子標簽存貯的標準曲線并結合檢測儀測得的待測樣品對應的熒光強度而得到樣品中的HBsAg、HIVAb, HCVAb、TPAb濃度。
[0025]本發明具有如下有益效果:
Cl) 一次加樣即可同步完成血液樣品中HBsAg、HIVAb, HCVAb、TPAb 4項傳染病指標定量檢測。
[0026](2)所述試條的樣品墊I與標記墊3之間設有紅細胞濾膜2，該紅細胞濾膜(2)可能阻止血液中的紅細胞通過而只能讓其血清濾過，血液樣品毋需用離心設備等分離出血清，用全血就能直接進行檢測。
[0027](3)所述試條應用范圍廣泛，可用于:①獻血員血液篩查。②醫院就診病人血液檢查。③血液制品用血檢查。③各形式的從業人員體檢，包括出國前體檢、婚前體檢、征兵體檢、招生體檢及飲食、托幼行業體檢、和其他需要同時檢測HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb且檢測側重于陰性結果判定的各應用市場。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0028]圖1:本發明所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條的結構側視圖
圖2:本發明所述量子點標記試條同步定量檢測HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb用的標準曲線
圖3:本發明所述量子點標記試條同步定量檢測HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb的熒光光譜圖
上述圖1-2中，T表示檢測帶(Test), C表示質控帶(Control)
序號表示如下:
1、樣品墊，2、紅細胞濾膜，3、標記墊，4、檢測帶，5、質控帶，6、吸水墊，7、分析膜，8、底襯。
【具體實施方式】
[0029]下面實施例及其附圖僅是為了進一步說明本發明，本領域人員不應以此限制本發明的保護范圍。
[0030]實施例1:能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條結構
結合圖1予以說明。圖1中，所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，其包括順次搭接固定在底襯8上的樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6。
[0031]所述試條的標記墊3為玻璃纖維膜。所述分析膜7為硝酸纖維素膜、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，其上具有檢測帶(即T帶)4和質控帶(即C帶)5。所述底襯8為聚脂或塑料板。
[0032]所述標記墊3 包被有 CdSe/ZnS QD523 標記的 HBsAg 單抗(即 CdSe/ZnS QD523-HBsAgMe),CdSe/ZnS QD616 標記的 HIVAg(即 CdSe/ZnS QD616-HIVAg),CdSe/ZnS QD568 標記的 HCVAg(即 CdSe/ZnS QD568-HCVAg)、CdSe/ZnS QD457 標記的 TPAg (即 CdSe/ZnS QD457-TPAg)的混合物。所述分析膜7的T帶4包被有HBsAg單抗、HIVAg、鼠抗人抗體和TPAg的混合物。所述分析膜7的C帶5包被有二抗羊抗鼠抗體。
[0033]實施例2:能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條的制備方法所述試條的制備方法包括如下步驟:
A.量子點偶聯相關抗體/抗原:
a)取水溶性CdSe/ZnS QD523、CdSe/ZnS QD616、CdSe/ZnS QD568、CdSe/ZnS QD457 分別用PBS緩沖液調pH=6-9，分別加入EDC (1-(3- 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺鹽酸鹽)和NHS(N-羥基硫代琥珀酸亞胺)室溫活化10-60min ；
b)分別加入HBsAg Me、HIVAg、HCVAg、TPAg 旋渦振蕩反應 0.5_3h ；
c)分別加入牛血清白蛋白(BSA)，避光封閉反應0.5-2h;
d)離心純化各產物；
取各產物沉淀分別用PBS緩沖液重懸分散，得到CdSe/ZnS QD523-HBsAg Me、CdSe/ZnS QD616-HIVAg,CdSe/ZnS QD568-HCVAg、CdSe/ZnS QD457-TPAg 各量子點偶聯物溶液。4°C保存各量子點偶聯物溶液。
[0034]B.試條組件制備:
a)樣品墊1:選用纖維素膜作材料，將其切成具有一定規格的膜塊，將該膜塊放入含有0.1%-10%BSA和0.01%-10%Tween 20的磷酸緩沖液(PBS)中浸泡，取出，干燥備用。
[0035]b)紅細胞濾膜2:選紅細胞濾膜切成一定規格膜塊，干燥備用。
[0036]c)標記墊3:選用玻璃纖維膜作材料，將其切成具有一定規格的膜塊，加CdSe/ZnS QD523 標記的 HBsAg 單抗(即 CdSe/ZnS QD523-HBsAg Me)、CdSe/ZnS QD616 標記的 HIVAg(即 CdSe/ZnS QD616-HIVAg )、CdSe/ZnS QD568 標記的 HCVAg(即 CdSe/ZnS QD568-HCVAg )、CdSe/ZnS QD457標記的TPAg (即CdSe/ZnS QD457-TPAg)的混合物溶液于該膜塊上，干燥膜塊備用。
[0037]d)分析膜7:選用硝酸纖維素膜(NC膜)作材料，將其切成具有一定規格的膜塊，自膜塊底邊起由下自上相隔一定距離分別噴點HBsAg單抗(0.5-10mg/ml)、HIVAg(0.5-10mg/ml)、鼠抗人抗體(0.5-lOmg/ml)和 TPAg (0.5-lOmg/ml)的混合物作 T 帶 4,噴點0.5-10mg/ml 二抗質控物羊抗鼠抗體作C帶5，干燥膜塊備用。
[0038]吸水墊6:選用具有吸水作用的纖維素膜切成一定規格的膜塊，干燥備用；
C.試條組件組裝上述制備好的試條組件按樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6順次相互搭接粘貼于塑料底襯8上，切成一定規格的試條，裝入塑料盒中，與干燥劑一起裝入鋁箔袋內密封儲存。
[0039]實施例3:能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條標準曲線建立
Ca)用磷酸緩沖液(PBS)作稀釋液，將HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb標準品分別按下表配成系列濃度各9份。
【權利要求】
1.一種能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，包括順次搭接固定在底襯(8)上的樣品墊(I)、紅細胞濾膜(2)、標記墊(3)、分析膜(7)、吸水墊(6)，分析膜(7)具有T帶(4)和C帶(5),其特征在于:標記墊(3)包被有量子點a標記的HBsAg單抗、量子點b標記的HIVAg、量子點c標記的HCVAg和量子點d標記的TPAg的混合物，分析膜(7)的T帶(4)包被有HBsAg單抗、HIVAg、鼠抗人抗體和TPAg的混合物，分析膜(7)的C帶(5)包被有二抗。
2.根據權利要求1所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，其特征在于:所述標記墊(3)的量子點包括 ZnS、CdS、HgS, ZnSe, CdSe、HgSe、CdTe, ZnTe, ZnO, PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe, CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS, MgSe, MgTe, CaS, CaSe, CaTe, SrS, SrSe, SeTe, BaS, BaSe, BaTe,CdS:Mn> ZnS:Mn> CdS:Cu> ZnS:Cu> CdS:Tb> ZnS:Tb中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點為核、二氧化硅為殼的核-殼型納米復合粒子。
3.根據權利要求1所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條，其特征在于:所述標記墊(3)為玻璃纖維膜，所述分析膜(7)為硝酸纖維素膜、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，底襯(8)為聚脂或塑料板。
4.一種如權利要求1所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條的制備方法，其特征在于，該制備方法包括如下步驟: A.量子點偶聯相關抗體/抗原: a)取水溶性量子點用PBS緩沖液調pH=6-9，加入EDC(1_(3- 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺鹽酸鹽)和NHS (N-羥基硫代琥珀酸亞胺)室溫活化10-60min ； b)加被檢物相應抗體/抗原旋渦振蕩反應0.5-3h ； c)加入BSA避光封閉反應0.5-2h; d)離心純化產物；
取沉淀用PBS緩沖液重懸分散，4°C保存； B.試條組件制備: a)樣品墊(I):選用纖維素膜切成一定規格的膜塊，將該膜塊放入含有0.1%-10%BSA和0.01%-10%Tween 20的PBS中浸泡，取出，干燥備用； b)紅細胞濾膜(2):選紅細胞濾膜切成一定規格膜塊，干燥備用； c)標記墊(3):選用玻璃纖維膜切成一定規格膜塊,加量子點a標記的HBsAg單抗、量子點b標記的HIVAg、量子點c標記的HCVAg和量子點d標記的TPAg的混合物溶液于該膜塊上，干燥膜塊備用； d)分析膜(7):選用纖維素膜切成一定規格的膜塊，自膜塊底邊起由下自上相隔一定距離分別噴點 HBsAg 單抗(0.5-10mg/ml)、HIVAg (0.5-10mg/ml)、鼠抗人抗體(0.5-1Omg/ml)和TPAg (0.5-10mg/ml)的混合物作T帶(4),噴點0.5-lOmg/ml 二抗作C帶(5),干燥膜塊備用； W吸水墊(6):選用具有吸水作用的纖維素膜切成一定規格的膜塊，干燥備用； C.試條組件組裝: 上述制備好的試條組件按樣品墊(I)、紅細胞濾膜(2)、標記墊(3)、分析膜(7)、吸水墊(6)順次搭接粘貼于底襯(8)上，切成一定規格的試條，裝入塑料盒中，與干燥劑一起裝入鋁箔袋內密封儲存。
5.—種如權利要求1所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條定量檢測血液傳染病4項指標用的標準曲線制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: Ca)配制HBsAg、HIVAb、HCVAb、TPAb標準品系列濃度，并滴加到所述的量子點標記試條上； (b)用檢測儀分別讀取T帶的熒光強度(ODt)和C帶的熒光強度(0D。)，計算獲得ODt/ODc 比值或 ODt/ (0Dt+0Dc)比值； Tc)以標準品系列濃度作X軸，0Dt/0Dc比值作Y軸，或以標準品系列濃度作X軸，ODt/(0Dt+0Dc)比值作Y軸，得到熒光強度與濃度對應標準曲線。
6.—種如權利要求1所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條定量檢測血液傳染病4項指標的方法，其特征在于，該定量檢測方法包括下述步驟: (a)用電子標簽存貯標準曲線數據； O)存貯有標準曲線數據的電子標簽安裝在量子點標記試條上，或安裝在裝載試條的試條盒上； 用具有信號檢測功能的檢測儀讀取電子標簽存貯的標準曲線并結合檢測儀測得的待測樣品對應的熒光強度而得到樣品中的HBsAg、HIVAb, HCVAb, TPAb濃度。
7.根據權利要求6所述的能定量檢測血液傳染病多指標的量子點標記試條定量檢測血液傳染病4項指標的方法，其特征在于，所述電子標簽包括具有信息存貯功能的RFID、二維碼、條碼、或IC卡芯片。
【文檔編號】G01N33/558GK104198702SQ201410261244
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年6月13日 優先權日:2014年6月13日
【發明者】侯飛, 王春英, 馬義才, 熊妮婭 申請人:成都領御生物技術有限公司
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
