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一種蛋白質芯片的制作方法
【專利摘要】本實用新型屬于生物醫學檢測【技術領域】，具體為一種蛋白質芯片，包括呈方形的固相載體，固相載體的四角處均設有一陰性質控區和一陽性質控區，所述固相載體的中部設有至少一種炎癥因子識別區。本實用新型通過在固相載體的四個角處均設陰性質控區和陽性質控區，便于與各炎癥因子識別位點進行比較判斷，提高蛋白芯片檢測結果的準確性。每種炎癥因子識別區、每個陰性質控區和每個陽性質控區均設五個點，且呈點陣式排列，不僅可提高反應容量，還可提高檢測結果的準確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構成的固相載體可使樣品穩定固定在其上且保持活性。
【專利說明】一種蛋白質芯片
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及生物醫學檢測【技術領域】，尤其涉及一種蛋白質芯片。
【背景技術】
[0002]蛋白質芯片技術概念起源于20世紀80年代后期，是生命科學領域熱門的新技術之一。蛋白質芯片具有平行性、高通量、靈敏度高、樣品用量少、檢測速度快等優點。然而，由于蛋白質的化學成分和結構復雜多變，固定在芯片表面的蛋白質容易變性失活。因此，尋找合適的載體和表面修飾方法以保證固定足夠量的蛋白質并保持其天然活性成為研制蛋白質微陣列的關鍵步驟之一。
[0003]近年來經過科研人員的嘗試和研發，逐步形成了以濾膜、塑料、玻片和金屬膜等為主的固相載體。在這幾類載體中，玻片具有廉價、表面光滑、熒光背景低、性能穩定、抗體用量低等優點。但是，用玻片固定蛋白往往具有樣品易蒸發、不適合多步反應、容量較小和容易發生交叉污染等缺點。
[0004]通過改進蛋白質芯片的結構特點來克服反應容量小、樣品易蒸發的問題，以及提高檢測結果準確性是一種可行的方法，從而更充分發揮蛋白質芯片的優勢。
實用新型內容
[0005]本實用新型解決的技術問題是提供一種反應容量大、檢測結果準確性高的蛋白質
-H-* 1 I心/T ο
[0006]為解決上述技術問題，本實用新型采用以下技術方案:一種蛋白質芯片，包括呈方形的固相載體，所述固相載體的四角處均設有一陰性質控區和一陽性質控區，所述固相載體的中部設有至少一種炎癥因子識別區。
[0007]所述固相載體的中部設有若干種炎癥因子識別區，所述每種炎癥因子識別區由5個同種炎癥因子識別位點構成。
[0008]所述每個陰性質控區由5個陰性對照點組成；所述每個陽性質控區由5個陽性對照點組成。
[0009]所述炎癥因子識別位點、陽性對照點和陰性對照點在固相載體上呈矩陣式排列。
[0010]所述炎癥因子識別位點、陽性對照點和陰性對照點的體積均為1mm3。所述炎癥因子識別區中相鄰兩個炎癥因子識別位點的距離為1.5mm ;所述陰性質控區中相鄰兩個陰性對照點的距離為1.5mm ;所述陽性質控區中相鄰兩個陽性對照點的距離為1.5mm。
[0011]所述固相載體由玻片，以及玻片上由下至上依次設置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
[0012]所述陰性對照點為BSA陰性對照點，所述陽性對照點為二抗陽性對照點。
[0013]述炎癥因子識別位點包括CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。[0014]與現有技術相比，本實用新型的有益效果是:本實用新型通過在固相載體的四個角處均設陰性質控區和陽性質控區，便于與各識別位點進行比較判斷，提高蛋白芯片檢測結果的準確性。每種炎癥因子識別區、每個陰性質控區和每個陽性質控區均設五個點，且呈點陣式排列，不僅可提高反應容量，還可提高檢測結果的準確性。由玻片、氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層構成的固相載體可使樣品穩定固定在其上，且保持活性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為本實用新型的蛋白質芯片的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0016]為了更充分理解本實用新型的技術內容，下面結合具體實施例對本實用新型的技術方案作進一步介紹和說明。
[0017]實施例
[0018]本實施例提供的一種蛋白質芯片為用于檢測心血管疾病的蛋白質芯片。心血管疾病的炎癥因子包括CRP (C反應蛋白)、Myoglobin (肌紅蛋白)、cTnT (心肌肌鈣蛋白T)、NT-proBNP (N末端B型鈉尿肽)、CK-MB (肌酸激酶同工酶)、H-FABP (心型脂肪酸結合蛋白)、GPBB (糖原磷酸化酶同工酶BB)和D-Dimer (D 一二聚體)共8項生物標志物。
[0019]BSA為牛血清白蛋白。
[0020]參照圖1，本實施例提供的一種蛋白質芯片包括呈方形的固相載體1，固相載體I上設有炎癥因子識別區、陰性質控區和陽性質控區。所述固相載體I由玻片，以及玻片上由下至上依次設置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。在固相載體I上的四個角處分別設有一個陰性質控區和一個陽性質控區。每個陰性質控區由五個組成一排的陰性對照點3構成，陰性對照點3為BSA陰性對照點。每個陽性質控區由五個組成一排的陽性對照點2構成，陽性對照點2為二抗陽性對照點。固相載體I的每個角處的陰性質控區和陽性質控區平行排列。在固相載體I的中部設置八種炎癥因子識別區，每種炎癥因子識別區均由五個組成一排的相應的炎癥因子識別位點4構成。固相載體I上設置的炎癥因子識別位點4有CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。每個炎癥因子識別位點4及陽性對照點2和陰性對照點3的體積均為1mm3。陰性質控區中相鄰兩個陰性對照點3的距離為1.5mm ;陽性質控區中相鄰兩個陽性對照點2的距離為1.5mm ;炎癥因子識別區中相鄰兩個炎癥因子識別位點4的距離為1.5mm,并且炎癥因子識別位點4呈矩陣式排列。
[0021]蛋白質芯片試劑盒的使用:
[0022]將IOOyL血清樣品鋪于蛋白質芯片上，并將蛋白質芯片放置于搖床上，室溫反應lh。反應結束后用PBST清洗蛋白質芯片3次，每次5min。然后將500 μ L，0.5mg/mL的檢測劑鋪于蛋白質芯片上進行二次免疫反應lh。反應結束后用PBST清洗蛋白質芯片并吹干，然后將蛋白質芯片置于紫外成像儀中進行圖像掃描，用圖像分析軟件QuantArraysoftwareversion3000進行突光強度分析，并用標準曲線法計算血清樣品中CRP、Myoglobin、cTnT、NT-proBNP、CK-MB, H-FABP, GPBB 和 D-Dimer 的濃度。
[0023]以上所述僅以實施例來進一步說明本實用新型的技術內容，以便于讀者更容易理解，但不代表本實用新型的實施方式僅限于此，任何依本實用新型所做的技術延伸或再創造，均受本實用新型的保護。
【權利要求】
1.一種蛋白質芯片，包括呈方形的固相載體(1)，其特征在于，所述固相載體(I)的四角處均設有一陰性質控區和一陽性質控區，所述固相載體(I)的中部設有至少一種炎癥因子識別區。
2.根據權利要求1所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述固相載體(I)的中部設有若干種炎癥因子識別區，所述每種炎癥因子識別區由五個同種炎癥因子識別位點(4)構成。
3.根據權利要求2所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述每個陰性質控區由5個陰性對照點(3)組成；所述每個陽性質控區由5個陽性對照點(2)組成。
4.根據權利要求3所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)、陽性對照點(2)和陰性對照點(3)在固相載體(I)上呈矩陣式排列。
5.根據權利要求4所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)、陽性對照點(2 )和陰性對照點(3 )的體積均為Imm3。
6.根據權利要求5所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述固相載體(I)由玻片，以及玻片上由下至上依次設置的氨基修飾層、醛基修飾層和瓊脂糖修飾層組成。
7.根據權利要求3-6任一項所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述陰性對照點(3)為BSA陰性對照點，所述陽性對照點(3)為二抗陽性對照點。
8.根據權利要求7所述一種蛋白質芯片，其特征在于，所述炎癥因子識別位點(4)包括CRP識別位點、Myoglobin識別位點、cTnT識別位點、NT-proBNP識別位點、CK-MB識別位點、H-FABP識別位點、GPBB識別位點和D-Dimer識別位點。
【文檔編號】G01N33/573GK203519614SQ201320639952
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年10月16日 優先權日:2013年10月16日
【發明者】張二盈, 章國建 申請人:深圳市大愛醫療科技有限公司