一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法
【專利摘要】一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法，其特征在于步驟：取養殖海水80?llOmL于燒杯中，加入氟甲喹標準品lmg?2mg，超聲使其完全溶解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫；洗脫液氮吹至近干，乙醇復溶，定溶至3mL，過0.22?0.45ym微孔濾膜后得到溶液A;以正己烷與乙醇體積比為10?40:90?60做為流動相，并在流動相中添加體積含量為0.1%?0.3%的甲酸和乙酸銨水溶液（5mnol/L)對氟甲喹對映體進行分離；用高效液相色譜儀對上述溶液A進行檢測，選用CHIRALCEL0D-H手性柱，柱溫為室溫，流速為0.5mL/min?0.7mL/min,波長為254nm0本發明能成功實現氟甲喹手性對映體的拆分，從而檢測海水中氟甲喹對映體的殘留量，為海水養殖中氟甲喹的殘留風險評估及合理、安全使用提供依據。
【專利說明】一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 氟甲喹（FLU)為第二代氟喹諾酮類抗菌藥，是動物專用抗菌藥物，對治療革蘭氏 陰性菌感染，特別是對大腸桿菌、支原體、嗜水氣單胞菌引起的畜、禽及水產動物疾病有較 好療效。其作用機理主要是抑制DNA旋轉酶A亞單位，破壞它的活性，結果使脫氧核糖核酸、 核糖核酸及蛋白質的合成受干擾，使細胞不能再進行分裂，從而起到殺菌作用。由于氟甲喹 具有高安全性、耐受性和獨特的高滲透性，其在水產動物的細菌性疾病的預防和治療中已 經得到廣泛應用。氟甲喹在淡水中溶解度不高，但能溶于pH值較高的海水中，因此，氟甲喹 常用于海水魚的魚體浸浴消毒。然而，帶有氟甲喹殘留的廢水往往直接排入河流或海洋中， 這將直接或間接地危害環境及人類健康。已有研究發現高劑量氟甲喹可引起大鼠胚胎發育 畸變，雖然低劑量氟甲喹對人體的危害尚未見報道，但長期攝入有氟甲喹殘留的食品，其潛 在風險不容低估。
[0003] 氟甲喹是一種手性藥物，具有一個手性碳原子，兩個手性對映體，其對映體結構式 如圖1所示。手性藥物的不同對映體間往往顯示出不同的藥效學、藥動學和毒理學特征，因 此，對手性藥物的不同對映體進行檢測尤為重要。目前，針對氟甲喹外消旋體在水產品中的 殘留檢測研究不少，但是尚沒有針對氟甲喹對映體在海水中的殘留檢測。因此，開展檢測海 水中氟甲喹對映體的研究，將為氟甲喹在海水中殘留的風險評估以及合理、安全使用提供 依據。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法，采 用高效液相色譜法手性固定相法檢測海水中氟甲喹對映體的殘留量，可成功實現氟甲喹手 性對映體的拆分。
[0005] 本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種海水中氟甲喹手性對映體的 檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
[0006] 1)取養殖海水80?110mL于燒杯中，加入氟甲喹標準品1?2mg，超聲使其完全 溶解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫， 洗脫液收集于容量瓶中；
[0007] 2)將步驟1)的洗脫液氮吹至近干，用乙醇復溶，定溶至3mL，過0. 22?0. 45 μ m 微孔濾膜后得到溶液A;
[0008] 3)采用高效液相色譜儀對上述溶液A進行檢測；檢測時選用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，手性柱的柱溫為室溫，流動相為正己烷和乙醇，其體積比為40?10:60?90,流動相 中添加甲酸（色譜純，純度3 98wt% )和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為0. 1%? 0. 3%，乙酸銨水溶液濃度4. 5?5. 5mmol/L，檢測時的流速為0. 5mL/min?0. 7mL/min，波 長為254nm。
[0009] 作為改進，所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是經甲醇+水活化。
[0010] 作為優選，所述步驟3)的正己烷和乙醇的體積比為20:80。
[0011] 作為改進，所述步驟3)的CHIRALCEL 1C手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維 素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
[0012] 作為優選，所述乙酸銨水溶液濃度5mmol/L。
[0013] 作為優選，所述步驟3)的檢測時的流速為0. 6mL/min。
[0014] 最后，所述步驟3)流動相中添加甲酸和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為 0· 2%。
[0015] 與現有技術相比，本發明的優點在于：采用高效液相色譜法手性固定相法檢測海 水中氟甲喹對映體的殘留量，成功實現了氟甲喹手性對映體的拆分，從而可對海水中氟甲 喹對映體的殘留量進行檢測，為海水中氟甲喹的合理、安全使用提供理論依據。其中，對映 體在0.04mg/L?10mg/L濃度范圍內與其響應值呈良好的線性關系，左氟甲喹和右氟甲喹 的回歸方程及相關系數分別為 y = 113. 93χ-7· 2217、R2 = 0· 9994 及 y = 117. 71χ-9· 9342、 R2 = 0. 9998,樣品平均回收率分別為88. 53 %和89. 26%，日間精密度分別為5. 71 %和 4. 25%，定量限均為(λ 04mg/L。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1是本發明提供的氟甲喹對映體結構式；
[0017] 圖2是本發明實施例中氟甲喹的色譜圖。
【具體實施方式】
[0018] 以下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0019] 一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法，包括以下步驟：
[0020] (1)取養殖海水100mL于燒杯中，加入氟甲喹標準品lmg?2mg，超聲使其完全溶 解，取3?5mL過HLB固相萃取小柱（經5mL甲醇+5mL水活化），經5mL去離子水淋洗后用 5?10mL甲醇洗脫，洗脫液收集于10mL容量瓶中；
[0021] (2)將步驟（1)中的洗脫液甲醇氮吹至近干，殘液乙醇溶解并定溶至3mL，采用 0. 22 μ m微孔濾膜進行過濾后得到溶液A ;
[0022] (3)采用高效液相色譜儀對上述溶液A進行檢測；檢測時選用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，該手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯]，柱溫 為室溫；正己烷：乙醇按照40?10:60?90 (v:v)作為流動相；甲酸和乙酸銨水溶液的添 加量各為〇. 1 (v) %?0. 3 (v) % ;甲酸為色譜純，純度會98wt %，乙酸銨水溶液濃度4. 5? 5. 5mmol/L，檢測時的流速為 0· 5mL/min ?0· 7mL/min，波長為 254nm。
[0023] 在本實施例中，步驟（3)中使用正己烷與乙醇體積比分別為40:60、30:70、20:80 和10:90的流動相對氟甲喹進行手性拆分，拆分結果如表1所示，可以看出，隨著流動相中 乙醇比例的增大，分離度增加，但柱壓也隨之增高。因此，所使用流動相正己烷與乙醇的最 佳體積比為20:80,在該流動相配比條件下，對映體分離效果良好且柱壓較低。
[0024] 表 1
[0025]
【權利要求】
1. 一種海水中氟甲喹手性對映體的檢測方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取養殖海水80?llOmL于燒杯中，加入氟甲喹標準品1?2mg，超聲使其完全溶解， 取3?5mL過HLB固相萃取小柱，經4?6mL去離子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脫，洗脫 液收集于容量瓶中； 2) 將步驟1)的洗脫液氮吹至近干，用乙醇復溶，定溶至3mL，過0. 22?0. 45 μ m微孔 濾膜后得到溶液A; 3) 采用高效液相色譜儀對上述溶液A進行檢測；檢測時選用CHIRALCEL 0D-H手性 柱，手性柱的柱溫為室溫，流動相為正己烷和乙醇，其體積比為40?10:60?90,流動相 中添加甲酸和乙酸銨水溶液，使它們體積含量分別為〇. 1%?〇. 3%，甲酸為色譜純，純度 蘭98wt%，乙酸銨水溶液濃度為4. 5?5. 5mmol/L，檢測時的流速為0· 5mL/min?0· 7mL/ min,波長為 254nm。
2. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是 經甲醇+水活化。
3. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟3)的正己烷和乙醇的體積 比為20:80。
4. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟3)的CHIRALCEL 1C手性 柱的填料為5 μ m娃膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
5. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述乙酸銨水溶液濃度5mmol/L。
6. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟3)的檢測時的流速為 0. 6mL/min〇
7. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟3)流動相中添加甲酸和乙 酸銨水溶液，使它們體積含量分別為〇. 2%。
【文檔編號】G01N30/02GK104215710SQ201410459726
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月11日 優先權日:2014年9月11日
【發明者】高小峰, 聶晶, 歐陽小現, 王陽光, 楊立業, 吳偉建, 郁迪, 徐紅萍, 李維, 曾浩, 杜軍, 李玄 申請人:浙江海洋學院
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