一種金銀花對照提取物及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及中藥提取物和中藥質量控制【技術領域】，特別涉及一種金銀花對照提取物，含有質量比例為0.20~0.40:1.00:0.30~0.50:0.15~0.45:0.10~0.40:0.15~0.45的新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C，總質量分數超過70%。制備方法：水提醇沉得到粗提物；粗提物溶解調節pH為酸性，離心；上清液用大孔吸附樹脂柱、硅膠柱、凝膠柱分離達到目標含量。本發明的金銀花對照提取物，目標成分含量高，可作為混合對照品使用，用于處方中含有金銀花的中藥的質量控制，進行準確地定性定量測定，檢測高效、成本低，結果準確；制備成本較低。
【專利說明】一種金銀花對照提取物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥提取物和中藥質量控制【技術領域】，特別涉及一種金銀花對照提取物，還涉及金銀花對照提取物的制備方法。
【背景技術】
[0002]現行中藥標準中，單一成分控制質量的模式難以很好地反映中藥質量，采用多成分或特征色譜峰群綜合控制質量的方法越來越引起人們的重視。然而，商品化對照品的供不應求和高昂的檢測成本限制了多成分質量控制在實際生產、科研和監管領域的應用。使用對照提取物既可以解決單體對照品制備難度大、緊缺的問題，又可以達到多指標成分控制的目的，對中藥的質量控制和標準執行都具有十分重要的意義。
[0003]金銀花藥用歷史悠久，為常用的清熱解毒藥。臨床報道多用于內外科炎癥，如治療肺結核并發呼吸道感染，肺炎，急性細菌性痢疾，嬰幼兒腹瀉，子宮頸糜爛，眼科急性炎癥，外科化膿性疾患以及蕁麻疹等?？Х弱？鼘幩犷惓煞质瞧渲饕咕行С煞?，主要以綠原酸和異綠原酸B形式存在，在制備金銀花提取物和制劑過程中，上述兩種成分發生異構化，部分轉化為新綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A和異綠原酸C，并且達到一定比例。
[0004]現行藥品標準中，處方中含有金銀花的中藥一般僅以綠原酸作為指標成分，控制金銀花的投料。例如，《中國藥典》2010年版一部品種銀黃口服液等，《中國藥典》2010年版第一增補本品種銀黃顆粒、銀翹解毒片、銀翹解毒軟膠囊等。但是，綠原酸是一種多種植物共有的成分，甚至在廢棄煙葉中也能分離得到，提取率達到1.71%。所以，僅以綠原酸作為質量控制指標成分，控制這些中藥的質量顯然是不夠的，會給制假分子以可乘之機，以綠原酸代替金銀花藥材進行投料。藥品質量監管部門也認識到這一問題，《中國藥典》2010年版第二增補本品種銀黃片以及金銀花提取物的[鑒別]項對上述6種咖啡?？鼘幩峋鞒隽艘幎?。但其[含量測定]項下，仍僅對綠原酸的含量進行了規定，這并不能制止少投料的問題。為了杜絕該類中藥制劑存在的金銀花藥材不投料、少投料的問題，應該同時控制其中6種咖啡酰奎寧酸的含量。
[0005]由于這些成分在純化過程中容易相互轉化，難以獲得高純度的單體化合物，導致單一對照品價格昂貴，限制了用常規外標法來實現其含量測定的設想。我們課題組研究出一種一測多評法(QAMS )對銀黃片中6種咖啡酰奎寧酸的含量測定。QAMS采用僅測定一個價廉、易得的成分，實現多成分同步測定的模式，克服了多指標質量控制面臨的對照品短缺和高昂檢測成本問題。但研究中發現，該方法也存在一些問題，比如相對校正因子引入的誤差、待測成分色譜峰不易準確定位等。
[0006]《中國中藥雜志》第38卷第13期第2147頁有劉紹勇、張文明等發表的文章《對照提取物用于金銀花藥材的質量控制方法研究》，公開了使用金銀花對照提取物對金銀花藥材進行檢測的方法，其對照提取物中主要含有新綠原酸、綠原酸、咖啡酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C等6種成分，與含金銀花提取物的制劑(如銀黃片)所含的6種咖啡酰奎寧酸類成分不盡相同，缺少隱綠原酸，因而不能全面控制該類成分在制劑中的含量。并且其中新綠原酸、綠原酸、咖啡酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分的質量分數分別為3.81%、11.29%、20.99%、4.63%、7.04%、17.02%,質量比例約為
0.34:1.00:1.86:0.41:0.62:1.51，與制劑中的相應成分比例相差懸殊。測定同一制劑中上述成分含量時，使用同一對照提取物溶液，其中的某些成分可能會超出線性范圍，影響測定結果的準確性。綜上，為了全面、準確地控制含有金銀花提取物的藥品制劑質量，需要制備含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分，并且其比例與制劑相仿的金銀花對照提取物。
【發明內容】
[0007]為了解決以上現有技術中對金銀花提取物及其藥品制劑檢測中存在的檢測標準不全面、使用多種對照品檢測成本高的問題，本發明提供了一種可以同時對金銀花提取物及其藥品制劑中的6種咖啡?？鼘幩犷惓煞诌M行檢測的金銀花對照提取物，可用于處方中含有金銀花的中藥的質量控制，對上述6種成分進行準確地定性、定量測定。
[0008]本發明還提供了所述金銀花對照提取物的制備方法。
[0009]本發明是通過以下步驟得到的:
一種金銀花對照提取物，含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸 C 6 種成分，其質量比例為 0.20~0.40:1.00:0.30~0.50:0.15~0.45:0.10~0.40:0.15~0.45，6種成分占金銀花對照提取物的總質量分數超過70%。
[0010]所述的金銀花對照提取物，優選新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分的質量百分含量分別為8.41%、29.65%、12.05%、9.92%、6.32%、
11.91%。
[0011]所述的金銀花對照提取物，優選新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分的質量百分含量分別為9.50%、30.59%、9.92%、13.50%、6.45%、
5.94%。
[0012]所述的金銀花對照提取物的制備方法，包括以下步驟:
(1)取藥材金銀花，加水煎煮三次，三次分別加重量5~10倍的水煎煮0.5~1小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮至70°C時相對密度為1.13~1.18的濃縮液；濃縮液中加入乙醇，攪拌均勻，靜置12~24小時，取上清液減壓回收乙醇，干燥即得金銀花粗提物；
(2)將金銀花粗提物加水混勻，粗提物與水的重量比為1:1~5，超聲處理30-60分鐘，調節PH為酸性，混勻，離心得上清液；
(3)取步驟(2)離心后得到的上清液，以大孔吸附樹脂柱分離，金銀花粗提物與大孔樹脂填料重量體積比例為Ikg:2(T30L，以水為洗脫劑，洗脫2~3柱體積，棄去洗脫液，然后以甲醇或乙醇溶液洗脫3~4柱體積，收集洗脫液，減壓回收溶劑得干浸膏；
(4)取步驟(3)得到的干浸膏，加甲醇或乙醇溶液溶解，用硅膠柱分離，所得目標洗脫液減壓回收溶劑得干浸膏；
(5)取步驟(4)得到的干浸膏，加甲醇或無水乙醇溶解，用凝膠柱分離，所得目標洗脫液減壓回收溶劑得干浸膏；
(6)取步驟(5)得到的干浸膏，重復步驟(5)1~3次，以HPLC外標法分別測定6種目標成分的含量，直至新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分質量比例關系為 0.20~0.40:1.00:0.30~0.50:0.15~0.45:0.10~0.40:0.15~0.45，并且其
總質量分數超過70%。
[0013]所述的制備方法，優選步驟(1)濃縮液中加入乙醇的量為濃縮液體積的廣1.5倍。
[0014]所述的制備方法，優選步驟(2)調節粗提物水溶液pH范圍為1~4。
[0015]所述的制備方法，優選步驟(3)中大孔樹脂型號為D101、D201、D301、HP20、SP70、SP700、SP825、XAD-16 或 AB-8。
[0016]所述的制備方法，優選步驟(3)中甲醇或乙醇溶液的濃度為40、5%。
[0017]所述的制備方法，優選步驟(4)中用硅膠柱分離步驟如下:
步驟(3)得到的干浸膏，加甲醇或乙醇溶液溶解，與干浸膏重量f 2倍的硅膠進行拌樣，攪拌均勻，揮干溶劑，以硅膠柱分離，柱床硅膠與拌樣硅膠重量比為廣3:1，用二氯甲烷或三氯甲烷:甲醇或無水乙醇20:1~0裝柱，并作為初始洗脫劑，洗脫3~4個柱體積，棄去；用二氯甲烷或三氯甲烷:甲醇或無水乙醇9、:1作為洗脫劑，洗脫:3~6個柱體積，合并洗脫液，減壓回收溶劑得到干浸膏。
[0018]所述的制備方法，優選步驟(5)中凝膠柱分離步驟如下:
取步驟(4)得到的干浸膏，加甲醇或無水乙醇溶解，干浸膏重量與甲醇或無水乙醇體積比為Ig:1~5πι1,以凝膠柱分離，干浸膏溶液體積與凝膠柱柱體積比為1:10-20，用甲醇或無水乙醇洗脫4飛個柱體積，收集洗脫液，每0.1~0.3柱體積收集一份，以高效液相色譜儀檢測，合并含有6種目標成分的洗脫液，減壓回收溶劑得干浸膏。
[0019]本發明的有益效果:
1)本發明提供了一種金銀花對照提取物，其中目標成分含量高，可作為混合對照品使用，用于處方中含有金銀花的中藥的質量控制，對新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸Α、異綠原酸B、異綠原酸C等6種成分同時進行準確地定性定量測定，檢測高效、成本低，結果準確；
2)除硅膠柱填料外，制備方法中所用原料和溶劑均可回收利用，分離成本較低。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020]附圖1為實施例1步驟(1)得到的金銀花粗提物HPLC色譜圖；
附圖2為實施例1步驟(5)得到的金銀花對照提取物HPLC色譜圖；
附圖3為實施例2步驟(1)得到的金銀花粗提物HPLC色譜圖；
附圖4為實施例2步驟(5)得到的金銀花對照提取物HPLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0021]下面結合具體實施例對本發明進行進一步說明:
實施例1
(1)取金銀花10.5g，加水煎煮三次，第一、二次加100ml水煎煮1小時，第三次加50ml水煎煮1小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮至70°C相對密度為1.15，約15ml ;然后加入20ml乙醇，攪拌均勻，靜置12小時，取上清液減壓回收乙醇，經干燥即得金銀花粗提物
2.1go經HPLC外標法測定，該粗提物6種目標成分的總含量約為8.9%。粗提物的液相色譜圖見附圖1，其中6種咖啡?？鼘幩犷惓煞值暮恳娤卤?:表1金銀花粗提物中6種目標成分含量
【權利要求】
1.一種金銀花對照提取物，其特征在于含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分，其質量比例為0.20~0.40:1.00:0.30~0.50:0.15~0.45:0.10-θ.40:0.15~0.45，6種成分占金銀花對照提取物的總質量分數超過70%。
2.根據權利要求1所述的金銀花對照提取物，其特征在于新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸Α、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分的質量百分含量分別為8.41%,29.65%、12.05%,9.92%,6.32%、11.91%。
3.根據權利要求1所述的金銀花對照提取物，其特征在于新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸Α、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分的質量百分含量分別為9.50%,30.59%、9.92%、13.50%, 6.45%, 5.94%。
4.一種權利要求1所述的金銀花對照提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)取藥材金銀花，加水煎煮三次，三次分別加重量5~10倍的水煎煮0.5^1小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮至70°C時相對密度為1.13~1.18的濃縮液；濃縮液中加入乙醇，攪拌均勻，靜置12~24小時，取上清液減壓回收乙醇，干燥即得金銀花粗提物； (2)將金銀花粗提物加水混勻，粗提物與水的重量比為1:1~5，超聲處理30-60分鐘，調節PH為酸性，混勻，離心得上清液； (3)取步驟(2)離心后得到的上清液，以大孔吸附樹脂柱分離，金銀花粗提物與大孔樹脂填料重量體積比例為Ikg:20~30L，以水為洗脫劑，洗脫2~3柱體積，棄去洗脫液，然后以甲醇或乙醇溶液洗脫3~4柱體積，收集洗脫液，減壓回收溶劑得干浸膏； (4)取步驟(3)得到的干浸膏，加甲醇或乙醇溶液溶解，用硅膠柱分離，所得目標洗脫液減壓回收溶劑得干浸膏； (5)取步驟(4)得到的干浸膏，加甲醇或無水乙醇溶解，用凝膠柱分離，所得目標洗脫液減壓回收溶劑得干浸膏； (6)取步驟(5)得到的干浸膏，重復步驟(5)1~3次，以HPLC外標法分別測定6種目標成分的含量，直至新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 6種成分質量比例關系為 0.20~0.40:1.00:0.30~0.50:0.15~0.45:0.10~0.40:0.15~0.45，并且其總質量分數超過70%。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(1)濃縮液中加入乙醇的量為濃縮液體積的廣1.5倍。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(2)調節粗提物水溶液pH范圍為1~4。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中大孔樹脂型號為D101、D201、D301、HP20、SP70、SP700、SP825、XAD-16 或 AB-8。
8.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中甲醇或乙醇溶液的濃度為40-95%。
9.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(4)中用硅膠柱分離步驟如下: 步驟(3)得到的干浸膏，加甲醇或乙醇溶液溶解，與干浸膏重量1~2倍的硅膠進行拌樣，攪拌均勻，揮干溶劑，以硅膠柱分離，柱床硅膠與拌樣硅膠重量比為1~3:1，用二氯甲烷或三氯甲烷:甲醇或無水乙醇20:1~0裝柱，并作為初始洗脫劑，洗脫3~4個柱體積，棄去；用二氯甲烷或三氯甲烷:甲醇或無水乙醇9、:1作為洗脫劑，洗脫3飛個柱體積，合并洗脫液，減壓回收溶劑得到干浸膏。
10.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(5)中凝膠柱分離步驟如下:取步驟(4)得到的干浸膏，加甲醇或無水乙醇溶解，干浸膏重量與甲醇或無水乙醇體積比為1g:1~5m1,以凝膠柱分離，干浸膏溶液體積與凝膠柱柱體積比為1:10-20，用甲醇或無水乙醇洗脫4~5個柱體積，收集洗脫液，每0.1~0.3柱體積收集一份，以高效液相色譜儀檢測，合并含有6種目標成分的洗脫液，減壓回收溶劑得干浸膏。
【文檔編號】G01N33/15GK103823034SQ201410080316
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月6日 優先權日:2014年3月6日
【發明者】郭東曉, 林永強, 徐麗華, 林林, 尹寧寧, 汪冰 申請人:山東省食品藥品檢驗所
專業數控銑床產品供應商
20年生產經驗，實力工廠，精工品質，質量有保障
