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基于磁性分離和量子點(diǎn)標(biāo)記的鉛中毒快速檢測(cè)方法與試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種基于磁性分離和量子點(diǎn)(QDs)標(biāo)記的液體生物樣品中鉛的快速檢測(cè)方法，所述方法包括：1)制備抗鉛單克隆抗體；2)將所述抗鉛單克隆抗體與納米磁珠通過共價(jià)鍵偶聯(lián)，制備抗鉛免疫納米磁珠；3)向所述液體生物樣品中加入雙功能螯合劑、牛血清白蛋白(BSA)和三乙胺(TEA)，進(jìn)行溫育，之后加入所述抗鉛免疫納米磁珠充分混合，之后進(jìn)行磁分離，向磁分離得到的沉淀物中加入生物素化的BSA抗體和鏈霉親和素化的量子點(diǎn)(QDs)，使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光檢測(cè)。本發(fā)明還提供一種用于液體生物樣品中鉛的快速檢測(cè)的試劑盒。
【專利說明】基于磁性分離和量子點(diǎn)標(biāo)記的鉛中毒快速檢測(cè)方法與試劑
合
Sl
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物與新醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。具體地。本發(fā)明提供了一種基于磁性分離和量子點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)快速檢測(cè)血液中鉛含量的方法以及用于快速檢測(cè)血液中鉛含量的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]鉛(Pb)污染因其具有持久性、生物富集性和毒性而備受關(guān)注，一直是國際科學(xué)界的熱點(diǎn)研究課題之一。近年來，隨著我國工業(yè)化和城市化進(jìn)程的加快，鉛污染呈上升趨勢(shì)。通過工業(yè)“三廢”的排放進(jìn)入環(huán)境的重金屬鉛，甚至直接影響到了食物鏈和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，有很多地方糧食、蔬菜、水果等食物中鉛含量嚴(yán)重超標(biāo)或接近臨界值，對(duì)人類的健康構(gòu)成了極大威脅。2012年，刊登在美國《移民與難民研究》雜志上的一份關(guān)于“紐約健康和營養(yǎng)檢測(cè)調(diào)查報(bào)告”顯示，來自中國大陸的移民血液中鉛、鎘、汞等重金屬含量高于來自其他亞洲地區(qū)的移民。鉛比其他亞洲新移民高出44%。與此同時(shí)，在我國一些日用品(如，化妝品)中鉛含量嚴(yán)重超標(biāo)，進(jìn)一步增加了鉛中毒患者的數(shù)量。
[0003]目前，醫(yī)院檢測(cè)患者血鉛含量的常規(guī)方法為光譜法。主要包括:分光光度法(UV)、原子吸收光譜法(AAS)、原子熒光光譜法(AFS)和電感耦合等離子體-質(zhì)譜法(ICP-MS)。盡管這些方法成熟，結(jié)果可信度高，樣品需要進(jìn)行復(fù)雜的前處理，儀器昂貴，不適合進(jìn)行快速檢測(cè)和大量樣品的篩選。
[0004]包括鉛在內(nèi)的重金屬快速檢測(cè)方法目前主要有酶分析法、生物化學(xué)傳感器法、試紙法和免疫分析法。酶分析法靈敏度高，但選擇性較差，對(duì)單一重金屬離子的檢測(cè)存在一定的困難。生物化學(xué)傳感器法發(fā)展迅速，靈敏度、自動(dòng)化程度高，可應(yīng)用于環(huán)境在線監(jiān)測(cè)，但傳感器制作工藝較難，成本相對(duì)較高。試紙法雖然簡單方便，但只能對(duì)金屬離子進(jìn)行定性或半定量分析。上述方法主要集中在環(huán)境水樣的快速檢測(cè)，而用于生物樣品中重金屬的快速檢測(cè)鮮有報(bào)道。
[0005]免疫分析法是檢測(cè)重金屬離子的一種新方法，檢測(cè)速度快、靈敏度高、選擇性強(qiáng)，迄今為止，已經(jīng)成功用于水中金屬離子的檢測(cè)。使用特異性的雙功能螯合劑，可以螯合重金屬離子并與載體蛋白偶聯(lián)，形成完整的免疫原，通過雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備特異性單克隆抗體。將抗重金屬的單克隆抗體連接到新型的Fe3O4磁性納米顆粒表面，可以使Fe3O4磁性納米顆粒具有靶向識(shí)別和磁性分離的雙重功能，從而實(shí)現(xiàn)重金屬的富集，提高檢測(cè)靈敏度。
[0006]量子點(diǎn)(QDs)，又稱為半導(dǎo)體納米微晶粒，是一種直徑在I?IOOnm能夠接收激發(fā)光產(chǎn)生熒光的納米顆粒。與傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料相比，QDs具有量子產(chǎn)率高，光化學(xué)穩(wěn)定性高，不易光解等優(yōu)良的光學(xué)特性。將量子點(diǎn)與抗體結(jié)合用于熒光免疫分析的報(bào)道越來越多，利用親和素修飾量子點(diǎn)后，量子點(diǎn)可以很容易的與生物素化的抗體結(jié)合，為抗體和量子點(diǎn)提供了一種分子連接的橋梁，應(yīng)用這種方法檢測(cè)毒素，可以達(dá)到用有機(jī)染料進(jìn)行標(biāo)記的同等的檢測(cè)限。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備鉛單克隆抗體(PbMAb);活化的納米磁珠和QDs分別與PbMAb和二抗相連，制備免疫納米探針；利用免疫磁珠的可富集特性和QDs熒光信號(hào)的變化，以期建立多重信號(hào)協(xié)同放大、具有超高靈敏度的快速檢測(cè)人血液中Pb的新方法，具有重要的科學(xué)意義和極廣闊的應(yīng)用前景。
[0008]技術(shù)問題:本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前尚無的生物樣品中重金屬Pb的快速檢測(cè)方法，建立一種利用免疫磁珠高效分離與QDs熒光信號(hào)的變化，快速檢測(cè)血液中Pb含量的分析方法。
[0009]技術(shù)方案:本發(fā)明提供的基于磁性分離和量子點(diǎn)標(biāo)記的鉛中毒快速檢測(cè)方法與試劑盒包括如下步驟:
[0010]l)Pb免疫抗原合成:Pb、雙功能螯合劑[(R)-2-硫氰基-3-(4-氨基苯基)丙基]-(S-S)環(huán)己烷-1,2 二乙三胺五乙酸(p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA)、血藍(lán)蛋白(KLH)按照一定比例，在三乙胺(TEA)存在下，25°C振蕩反應(yīng)22h ;使用PBS緩沖液洗滌反應(yīng)產(chǎn)物，并通過超濾管濾掉未反應(yīng)的小分子物質(zhì)；使用上述緩沖液稀釋抗原，備用。
[0011]2)Pb檢測(cè)抗原合成:將Pb、p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA與牛血清白蛋白(BSA)在TEA的作用下合成檢測(cè)抗原。
[0012]3)抗Pb單克隆抗體(PbMAb)的制備與純化:小鼠免疫后制備抗Pb雜交瘤細(xì)胞，然后大量制備腹水型PbMAb，最后使用飽和(NH4)2SOjX淀法純化抗體，使用Sephacry S-300進(jìn)一步純化抗體。
[0013]4)抗Pb免疫磁珠(PbMAb-Fe3O4)制備:將PbMAb與Fe3O4納米磁珠偶聯(lián)，制備抗鉛免疫磁珠(PbMAb-Fe3O4)。
[0014]5)檢測(cè)方法的效果評(píng)價(jià):分別通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍，檢出限，精密度，加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)以及與實(shí)際樣品ICP/MS的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確性與可靠性。
[0015]有益效果:在我國鉛污染嚴(yán)重，建立簡便、快速的鉛中毒快速檢測(cè)方法不但對(duì)中毒病人的診斷、救治具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值，還將對(duì)提高我國公共衛(wèi)生管理水平和公共衛(wèi)生安全事件處置能力具有重要理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。
[0016]本發(fā)明根據(jù)熒光免疫的雙抗體夾心原理，利用免疫磁珠分離速度快、效率高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合QDs光化學(xué)穩(wěn)定性高，不易光解等優(yōu)良的光學(xué)特性，分別以免疫磁珠和QDs為載體連接PbMAb和二抗，使得快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)生物樣品中Pb的含量得以實(shí)現(xiàn)。
[0017]本發(fā)明僅用100 μ I血，十幾微升的試劑，在少于Ih的時(shí)間內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品中鉛含量的測(cè)定。由于使用的儀器為熒光酶標(biāo)儀，可以同時(shí)檢測(cè)96個(gè)樣品，成本低，省時(shí)高效。
[0018]更具體地，本發(fā)明提供以下各項(xiàng):
[0019]1.用于液體生物樣品中鉛的快速檢測(cè)的試劑盒，所述試劑盒包含:
[0020]抗鉛免疫納米磁珠，所述抗鉛免疫納米磁珠通過將抗鉛單克隆抗體與納米磁珠經(jīng)由共價(jià)鍵偶聯(lián)制備；
[0021]雙功能螯合劑；
[0022]牛血清白蛋白(BSA)；
[0023]三乙胺(TEA)；[0024]生物素化的BSA抗體；和
[0025]鏈霉親和素化的QDs。
[0026]2.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述納米磁珠是Fe3O4納米磁珠。
[0027]3.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述納米磁珠的粒徑為280nm。
[0028]4.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述雙功能螯合劑是p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA。
[0029]5.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述液體生物樣品選自尿液或血液。
[0030]6.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述液體生物樣品是血液。
[0031]7.根據(jù)I所述的試劑盒，其中所述抗鉛單克隆抗體利用鉛免疫抗原制備，所述鉛免疫抗原通過在三乙胺(TEA)的存在下將鉛、雙功能螯合劑(優(yōu)選為p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA)和血藍(lán)蛋白(KLH)混合來制備。
[0032]8.根據(jù)I所述的試劑盒,其中用于所述QDs的激發(fā)波長=405nm,發(fā)射波長=585nm。
[0033]9.基于磁性分離和量子點(diǎn)(QDs)標(biāo)記的液體樣品中鉛的快速檢測(cè)方法，所述方法包括:
[0034]I)制備抗鉛單克隆抗體；
[0035]2)將所述抗鉛單克隆抗體與納米磁珠通過共價(jià)鍵偶聯(lián)，制備抗鉛免疫納米磁珠；
[0036]3)向所述液體生物樣品中加入雙功能螯合劑(優(yōu)選為p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA)、牛血清白蛋白(BSA)和三乙胺(TEA)，進(jìn)行溫育，之后加入所述抗鉛免疫納米磁珠充分混合，之后進(jìn)行磁分離，向磁分離得到的沉淀物中加入生物素化的BSA抗體和鏈霉親和素化的量子點(diǎn)(QDs)，使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光檢測(cè)。
[0037]10.根據(jù)9所述的方法，其中所述納米磁珠是Fe3O4納米磁珠，其粒徑優(yōu)選為280nm。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0038]圖1是本發(fā)明鉛免疫抗原紫外光譜圖，圖2是本發(fā)明鉛檢測(cè)抗原紫外光譜圖。從圖中可以看出吸收峰發(fā)生偏移，說明抗原合成成功。
[0039]圖3是本發(fā)明小鼠血清抗鉛效價(jià)，圖4是本發(fā)明小鼠血清抗鉛特異性。從圖中可以看出，小鼠血清抗鉛效價(jià)為32000，抗鉛的特異性為32000左右，表明小鼠免疫成功。
[0040]圖5是本發(fā)明抗鉛雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)液上清液效價(jià)圖。從圖中看出我們篩選出了一株抗鉛特異性和效價(jià)均較高的細(xì)胞株。
[0041]圖6是本發(fā)明抗鉛雜交瘤細(xì)胞腹水效價(jià)圖。圖7是本發(fā)明抗鉛雜交瘤細(xì)胞腹水特異度圖。從圖中可以看出，小鼠雜交瘤細(xì)胞腹水抗鉛效價(jià)和特異度均能達(dá)到25600，說明腹水中存在特異性的抗鉛抗體。
[0042]圖8是純化后抗鉛單克隆抗體效價(jià)圖。從圖中可以看出，經(jīng)純化后的抗鉛單克隆抗體效價(jià)較高。
[0043]圖9是純化后抗鉛單克隆抗體凝膠電泳圖。從圖中可以看出純化后抗鉛單克隆抗體分子量為25KDa和50KDa，沒有異常條帶，純度較高。
[0044]圖10是納米磁珠與單克隆抗體反應(yīng)的示意圖。
【具體實(shí)施方式】[0045]通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的權(quán)利要求不僅限于實(shí)施例。
[0046]實(shí)施例1
[0047]l)Pb免疫抗原合成:將Pb (國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，GSB04-1742-2004)、雙功能螯合劑[(R) _2_硫氰基-3-(4-氨基苯基)丙基]-(S-S)環(huán)己烷_1，2 二乙三胺五乙酸(p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA) (Macroyclics，美國)和血藍(lán)蛋白(KLH) (Sigma，美國，H7017)以及三乙胺(TEA)(國產(chǎn)分析純)按照 Pb:p-SCN-Bn-CHX_A "-DTPA:KLH: TEA=9:12:200:13 (ff/ff/ff/ff)的比例，25°C振蕩反應(yīng)22h ;使用PBS緩沖液洗滌反應(yīng)產(chǎn)物，并通過超濾管(30KD)濾掉未反應(yīng)的小分子物質(zhì)；使用PBS緩沖液稀釋所獲得的Pb免疫抗原。
[0048]2) Pb 檢測(cè)抗原合成:將 Pb、p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA、牛血清白蛋白(BSA)(Sigma，美國，A1933)和 TEA 按照 Pb:p-SCN-Bn-CHX_A " -DTPA:BSA: TEA=9:12:200:13 (ff/ff/ff/ff)的比例合成檢測(cè)抗原。Pb免疫抗原和Pb檢測(cè)抗原的光譜鑒定結(jié)果如圖1、2所示。
[0049]實(shí)施例2
[0050]抗Pb單克隆抗體(PbMAb)的制備與純化:
[0051 ] 將1.0mg/ml的Pb免疫抗原與等體積弗氏完全佐劑(FCA)，通過注射器雙推法充分混勻，使其形成白色油包水乳狀物，即抗原乳化齊U。使用多點(diǎn)免疫法，免疫6周齡雌性Balb/C小鼠(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，211)，每隔2周免疫I次，共免疫5次。在進(jìn)行第2、3、4次免疫時(shí)，將Pb免疫抗原與等體積弗氏不完全佐劑(FIA)混合，以同樣劑量加強(qiáng)免疫，在第5次免疫時(shí),僅用Pb免疫抗原而不加佐劑。小鼠免疫后小鼠血清的效價(jià)與特異性如圖3-4所示。取抗血清效價(jià)最高的免疫小鼠制備脾細(xì)胞，按照參考文獻(xiàn)(Howard.G.C和Kaser.M.R的抗體制備與使用實(shí)驗(yàn)指南[Μ].北京:科學(xué)出版社，2010)將脾細(xì)胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，KG075)融合，篩選陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆，陽性率達(dá)到100%后將細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，結(jié)果如圖5所示。將陽性細(xì)胞注射到小鼠腹腔，抽取腹水，評(píng)價(jià)腹水效價(jià)，結(jié)果如圖6、7所示。腹水分別使用飽和(NH4)2SO4沉淀法和Sephacry S-300柱層析法純化腹水中的PbMAb。將純化的抗體進(jìn)行效價(jià)檢測(cè)和凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，結(jié)果分別如圖8和9所示。
[0052]實(shí)施例3
[0053]抗Pb免疫磁珠(PbMAb-Fe3O4)制備:因?yàn)榧{米磁珠(Dynabeads?M-280Tosylactivated, lifetechnologies,美國，14203)背景值低，抗體與微珠表面共價(jià)連接，是使蛋白質(zhì)復(fù)合物免疫沉淀的極佳選擇。微珠磁性聚集溫和而快速并且孵育耗時(shí)極短。因此納米磁珠選用.Dynabeads? M-280Tosylactivated,其粒徑為280nm。抗Pb免疫磁珠合成步驟如下:
[0054](I)取165 μ L納米磁珠,磁分離Imin,去除上清；
[0055](2)加入100 μ g抗鉛單克隆抗體和0.1M pH7.4的磷酸緩沖液反應(yīng)使體積變?yōu)?50 μ L，渦旋震蕩；
[0056](3)加 100 μ L3M (NH4) 2S040.1M ρΗ7.4 的磷酸緩沖液渦旋震蕩。
[0057](4) 37°C搖動(dòng)孵化 12_18h ；
[0058](5)磁分離2min,去除上清；[0059](6)移除磁鐵，加入ImL0.5%BSA0.01M pH7.4的磷酸緩沖液，37°C搖動(dòng)孵化Ih ；
[0060](7)磁分離2min,去除上清；
[0061](8)移除磁鐵，加入ImL0.1%BSA0.01M pH7.4的磷酸緩沖液，渦旋振蕩5_10s ；
[0062](9)磁分離2min,去除上清；
[0063](10)重復(fù)步驟 7-8 ；
[0064](11)用240 μ L0.1%BSA0.01M pH7.4的磷酸緩沖液重懸免疫磁珠。
[0065]納米磁珠與抗鉛單克隆抗體反應(yīng)原理如圖10所示。
[0066]實(shí)施例4
[0067]基于磁性分離和量子點(diǎn)標(biāo)記的鉛中毒的快速檢測(cè)方法:
[0068](I)向 0.1mL血樣中加入，13 μ 110 μ g/ml p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA、I μ 12.17mg/ml BSA 和 I μ 14.6Χ1θΛοΤΕΑ, 37°C搖床反應(yīng) 15min。
[0069](2)加入2 μ L抗Pb免疫磁珠反應(yīng)15min后磁分離2min。
[0070](3)加入4 μ L生物素化的BSA抗體(abeam,英國，ab7636)和I μ LlmM的鏈霉親和素化得量子點(diǎn)(Qdot?585Streptavidin Conjugate, lifetechnologies,美國，Q10113MP),37°C搖床反應(yīng)15min后磁分離2min。
[0071](4)用突光酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果檢測(cè)(Ex=405nm, Em=585nm)。
[0072]標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定:取健康人空白`血清100 μ L于200 μ L離心管中，加入不同濃度的鉛配制成濃度為l、10、100、500、1000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)血樣。按本發(fā)明的快速檢測(cè)方法處理，以濃度(C)對(duì)吸光度(OD)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C=70.7830D-825.713，R=0.948。該檢測(cè)方法線性范圍為l-1000ng/ml,最低檢出限為lng/ml。
[0073]加標(biāo)回收率測(cè)定:將0.1mL病人血清(北京朝陽醫(yī)院職業(yè)病與中毒醫(yī)學(xué)中心)分別加入50ng Pb然后將其按照本發(fā)明的快速檢測(cè)方法處理后檢測(cè)，通過測(cè)得量與加入量的比值，計(jì)算加標(biāo)回收率。加標(biāo)回收率為94.97%—108.56%。
[0074]精密度測(cè)定:配制鉛低、中、高3種濃度的血清樣品，按照本發(fā)明的快速檢測(cè)方法處理，進(jìn)樣測(cè)定。I天內(nèi)平行操作5次，計(jì)算日內(nèi)精密度。結(jié)果如表1所示。
[0075]表1:血清中鉛含量測(cè)定精密度(n=5)

濃度(ng/mL) RSD(%)
I8.0%
[0076]
100 8.1%
1000_4.4%
[0077]取病人血樣(北京朝陽醫(yī)院職業(yè)病與中毒醫(yī)學(xué)中心)按照本發(fā)明的快速檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)與ICP/MS法對(duì)照評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度，兩種方法的測(cè)定結(jié)果間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示建立的方法準(zhǔn)確性可靠，結(jié)果如表2所示。
【權(quán)利要求】
1.用于液體生物樣品中鉛的快速檢測(cè)的試劑盒，所述試劑盒包含: 抗鉛免疫納米磁珠，所述抗鉛免疫納米磁珠通過將抗鉛單克隆抗體與納米磁珠經(jīng)由共價(jià)鍵偶聯(lián)制備； 雙功能螯合劑； 牛血清白蛋白(BSA)； 三乙胺(TEA)； 生物素化的BSA抗體；和 鏈霉親和素化的QDs。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述納米磁珠是Fe3O4納米磁珠。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述納米磁珠的粒徑為280nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述雙功能螯合劑是p-SCN-Bn-CHX-A" -DTPA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述液體生物樣品選自尿液或血液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述液體生物樣品是血液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述抗鉛單克隆抗體利用鉛免疫抗原制備，所述鉛免疫抗原通過在三乙胺(TEA)的存在下將鉛、雙功能螯合劑(優(yōu)選為p-SCN-Bn-CHX-A " -DTPA)和血藍(lán)蛋白(KLH)混合來制備。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中用于所述QDs的激發(fā)波長=405nm，發(fā)射波長=585nm。
9.基于磁性分離和量子點(diǎn)(QDs)標(biāo)記的液體樣品中鉛的快速檢測(cè)方法，所述方法包括: 1)制備抗鉛單克隆抗體； 2)將所述抗鉛單克隆抗體與納米磁珠通過共價(jià)鍵偶聯(lián)，制備抗鉛免疫納米磁珠； 3)向所述液體生物樣品中加入雙功能螯合劑(優(yōu)選為p-SCN-Bn-CHX-A" -DTPA)、牛血清白蛋白(BSA)和三乙胺(TEA)，進(jìn)行溫育，之后加入所述抗鉛免疫納米磁珠充分混合，之后進(jìn)行磁分離，向磁分離得到的沉淀物中加入生物素化的BSA抗體和鏈霉親和素化的量子點(diǎn)(QDs)，使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光檢測(cè)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述納米磁珠是Fe3O4納米磁珠，其粒徑優(yōu)選為280nm。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103698527SQ201410014500
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2014年1月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月13日
【發(fā)明者】孫志偉, 黃沛力, 孫湖泊, 王萌萌, 王吉龍, 王暉, 郝鳳桐, 李惠玲 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)