一種睡蓮花的檢測方法
【專利摘要】本發明公開一種睡蓮花的檢測方法，包括睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體積百分數隨時間變化為：0～10min，由95%降至90%；10～20min，由90%降至75%；20～40min，由75%降至55%；40～50min，由55%降至15%；50～60min，由15%降至0%；再將從色譜圖上得到沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面積，標準曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的含量。本發明方法可以定量檢測睡蓮花中的沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素，且具有良好的準確度和重復性，從而實現睡蓮花質量的有效控制。
【專利說明】一種睡蓮花的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物檢測領域，具體涉及一種睡蓮花的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 睡蓮花為睡蓮科雪白睡蓮)的干燥花蕾，分布于我國 新疆的南部地區，具有降熱止咳、益心護腦、安神止痛功效，臨床主要用于感冒發熱、頭痛咳 嗽、咽痛等表癥，是維吾爾醫常用的單方或復方抗病毒藥中的主要藥物。對睡蓮花質量的有 效控制是保證藥物獲得穩定、可靠的療效的前提。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種睡蓮花的檢測方法，以提高現有睡蓮花的質量控制水 平。
[0004] 本發明實現上述目的所采用的技術方案如下： 一種睡蓮花的檢測方法，步驟包括： (1) 睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體 積百分數隨時間變化為：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的標準溶液繪制濃度-色譜峰面積的 標準曲線； (3) 從步驟（1)的色譜圖上得到沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面 積，再代入步驟（2)的標準曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮 素的含量。
[0005] 進一步，步驟（1)中，用甲醇將睡蓮花樣品配制成甲醇溶液。
[0006] 本發明方法可以定量檢測睡蓮花中的沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素， 且具有良好的準確度和重復性，從而可以實現對睡蓮花質量的有效控制。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0007] 圖1.供試樣品溶液的色譜圖； 圖2.標準溶液的色譜圖； 圖3.供試樣品溶液中沒食子酸的一級質譜圖； 圖4.標準溶液中沒食子酸的一級質譜圖； 圖5.供試樣品溶液中沒食子酸甲酯的一級質譜圖； 圖6.標準溶液中沒食子酸甲酯的一級質譜圖； 圖7.供試樣品溶液中煙花苷的一級質譜圖； 圖8.標準溶液中煙花苷的一級質譜圖； 圖9.供試樣品溶液中槲皮素的一級質譜圖； 圖10.標準溶液中槲皮素的一級質譜圖； 圖11.供試樣品溶液中沒食子酸的二級質譜圖； 圖12.標準溶液中沒食子酸的二級質譜圖； 圖13.供試樣品溶液中沒食子酸甲酯的二級質譜圖； 圖14.標準溶液中沒食子酸甲酯的二級質譜圖； 圖15.供試樣品溶液中煙花苷的二級質譜圖； 圖16.標準溶液中煙花苷的二級質譜圖； 圖17.供試樣品溶液中槲皮素的二級質譜圖； 圖18.標準溶液中槲皮素的二級質譜圖。
【具體實施方式】
[0008] 以下結合實施例及附圖對本發明做進一步詳細說明。
[0009] 6批睡蓮花藥材分別采購于新疆奇康哈博維藥有限公司、維吾爾藥業、維吾爾醫 院，經鑒定為睡蓮科雪白睡蓮妙?/Aaea 的干燥花蕾。沒食子酸對照品(批 號：110831-2012054,中國食品藥品檢定研究院)、沒食子酸甲酯對照品、煙花苷對照品（新 疆藥物研究所）、槲皮素對照品(批號=20111013,上海源葉生物科技有限公司） 液相色譜-質譜聯用儀：包括Agilent 1200高效液相色譜儀，1100型紫外檢測器，6310 ion trap液質聯用系統，美國Agilent公司。
[0010] 檢測過程如下： 1、供試樣品溶液的制備：將6批睡蓮花藥材分別粉碎，分別精確稱取1 g睡蓮花藥材粉 末，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL甲醇，稱重，超聲處理30 min (功率80 W，頻率 100 Hz)，放冷，再次稱重，用甲醇補足減失的質量，過濾，取濾液，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾， 備用。
[0011] 2、標準溶液的制備：精確稱取沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素，混合，用 甲醇溶解，得到一系列不同濃度的標準溶液。
[0012] 3、供試樣品溶液用液相色譜-質譜聯用儀進行測定，色譜條件：采用C18色譜 柱，以甲醇為流動相A、水為流動相B進行梯度洗脫，流速：lmL/min ;進樣量：20 μ L ;柱溫： 30°C，梯度洗脫時，流動相Β (水）體積百分數隨時間變化為：0?10 min，由95%線性降至 90% ;10 ?20 min，由 90% 線性降至 75% ;20 ?40 min，由 75% 線性降至 55% ;40 ?50 min， 由55%線性降至15% ;50?60 min，由15%線性降至0%。得到的色譜圖如圖1所示。
[0013] 4、將一系列不同濃度的標準溶液在相同的色譜條件進行測定。以濃度為橫坐標、 色譜峰面積為縱坐標繪制相應沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的濃度-色譜峰 面積標準曲線。得到沒食子酸的線性回歸方程為Y= 16065X - 462 (r = 0.9991)，沒食子 酸甲酯的線性回歸方程為Y = 74059X - 110. 43 (r = 0. 9991)，煙花苷線的性回歸方程為 Y = 8558. 6X - 360. 59 (r = 0· 9997)，槲皮素的線性回歸方程為 Y = 17285X - 76. 10 (r =0. 9991)。結果表明，沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素分別在0. 818?6. 428Pg、 0· 152?1.68Pg、l. 182?n.OOOPg和0· 124?1.02Pg范圍內具有良好的線性關系。得到 的色譜圖如圖2所示。
[0014] 如圖1和圖2的色譜圖可以看出，供試樣品出現與標準溶液保留時間一致的色譜 峰。
[0015] 相應聯用的質譜分析可進一步明確其中的A即為沒食子酸、B即為沒食子酸甲酯、 C即為煙花苷、D即為槲皮素。具體如下：質譜條件為：電噴霧負離子掃描模式（ESI+);霧 化氣(氮氣）壓力為30 psi ;離子噴霧電壓為3500 V ;干燥氣(氮氣）溫度為350°C ;干燥氣 流速為12 L/min ;-級質譜掃描范圍為m/z 100?650 ;二級質譜掃描范圍為m/z 100? 650。在全掃描一級質譜中，標準溶液中沒食子酸出現m/zl68. 7分子離子峰，供試樣品出現 的分子離子峰與之一致（圖3?4);標準溶液中沒食子酸甲酯出現m/zl82. 7分子離子峰， 供試樣品出現的分子離子峰與之一致（圖5?6);標準溶液中煙花苷出現m/z593. 3分子離 子峰，供試樣品出現的分子離子峰與之一致（圖7?8);標準溶液中槲皮素出現m/z300. 8分 子離子峰，供試樣品出現的分子離子峰與之一致（圖9?10)。在全掃描二級質譜中，以m/ zl68. 7作為母離子，破碎電壓0. 4 V，標準溶液中沒食子酸出現顯著的離子碎片m/zl24. 7， 供試樣品同樣出現相應的離子碎片（圖11?12);以m/zl82. 7作為母離子，破碎電壓0.4V， 標準溶液中沒食子酸甲酯出現顯著的離子碎片m/zl23. 7、m/zl67. 6,供試樣品同樣出現相 應的離子碎片（圖13?14);以m/z593. 3作為母離子，破碎電壓1 V，標準溶液中煙花苷出 現顯著的離子碎片m/z284. 7,供試樣品同樣出現相應的離子碎片（圖15?16);以m/z300. 8 作為母離子，破碎電壓〇. 6 V，標準溶液中槲皮素出現顯著的離子碎片m/zl06. 7、m/zl50. 6、 m/z 178. 6,供試樣品同樣出現相應的離子碎片（圖17?18)。
[0016] 由從步驟3得到的色譜圖上分別測出沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素 的色譜峰面積，并將得到的色譜峰面積代入步驟4相應的標準曲線或回歸線性方程，分別 得到6批睡蓮花藥材中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的含量如下：
【權利要求】
1. 一種睡蓮花的檢測方法，步驟包括： (1) 睡蓮花樣品上C18色譜柱，采用甲醇-水進行梯度洗脫，得到色譜圖，其中，水的體 積百分數隨時間變化為：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的標準溶液繪制濃度-色譜峰面積的 標準曲線； (3) 從步驟（1)的色譜圖上得到沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮素的色譜峰面 積，再代入步驟（2)的標準曲線，得出睡蓮花樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、煙花苷和槲皮 素的含量。
2. 根據權利要求1所述睡蓮花的檢測方法，其特征在于，步驟（1)中，用甲醇將睡蓮花 樣品配制成甲醇溶液。
【文檔編號】G01N30/02GK104267114SQ201410456354
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月10日 優先權日:2014年9月10日
【發明者】周曉英, 季志紅, 陳金成, 李潔, 李柯翱, 丁文歡 申請人:新疆奇康哈博維醫藥研究院（有限公司）
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