一種測定原花青素含量及鑒別的方法
【專利摘要】本發明公開一種測定原花青素含量及鑒別的方法，涉及一種用于天然物質、保健食品、藥品中原花青素含量的檢測方法，屬于有機化學領域。其特征在于：本發明用分析純甲醇作為溶劑，將試樣與分析純甲醇混合于40KHz超聲處理20min，以4000r/min離心后取上清液，制得試樣溶液。其有益效果在于：該檢測過程運用常規實驗設備及材料，便于方法推廣和應用；含量測定部分樣品前處理簡單，確定原花青素B2做為對照品，測定結果準確，避免了由于對照品不同而造成的結果差異；產品鑒別部分采用了可靠的HPLC方法，建立了不同來源原花青素類產品的特征譜圖，可有效鑒別其來源，方法專屬性強。
【專利說明】一種測定原花青素含量及鑒別的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種用于天然物質、藥品中原花青素含量的檢測方法，屬于有機化學領域，具體的說是一種測定原花青素含量及鑒別的方法。
【背景技術】
[0002]原花青素(Proanthocyanidins),也叫做縮合鞋質(condensedtannins)或前花青素，是一種由若干個兒茶素類化合物聚合而成，具有黃烷-3-醇結構的植物多酚類化合物，存在于自然界多種植物中，銀杏葉、葡萄籽、越橘、松樹皮、蓮房、玫瑰花等植物中均含有原花青素。研究表明原花青素不僅具有很強的抗氧化活性，同時還具有良好的抗腫瘤活性、血管內皮細胞保護作用、調節血壓功能、抗炎癥和過敏功能，是多種功能性食品的有效成分，因此近年來從植物中提取的各種原花青素廣泛用于各類保健食品中。
[0003]由于原花青素是一類成分及其復雜的化合物，同時又缺少商業可用的對照，因此，目前原花青素的含量測定方法主要有分光光度法、高效液相色譜法；鑒別方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法。
[0004]分光光度法的基本原理是利用原花青素在無機酸存在和加熱的條件下被降解，產生紅色花青素，在546nm處有最大吸收，測定原花青素類化合物。此方法具有代表性的是2007版的《保健食品評價與技術規范》。分光光度法雖能測得原花青素總量，但方法中規定原花青素對照品過于籠統，不宜購得，且該方法不能鑒別原花青素來源。
[0005]HPLC的基本原理是利用前處理將原花青素降解成花青素或樣品經過前處理后，再利用HPLC色譜柱將原花青素中的各類組分分離，再用標準品定量。前者雖能測定原花青素含量，但不能鑒別不同來源的產品；后者由于原花青素的組成比較復雜，選定的標準品不同，結果就不同，因此該方法很難準確定量絕大部分產品的原花青素。前者具有代表性的是GB/T22244-2008《保健食品中前花青素的測定》;后者具有代表性的是美國藥典(USP35)《葡萄籽原花青素》。
[0006]薄層色譜法的基本原理是利用原花青素類成分及其它雜質成分對固定相能力不同，使在移動相流過固定相的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的，再利用合適的顯色從而達到鑒別的目的。該方法對于原花青素類產品鑒別的專屬性差，因此也不能有效鑒別原花青素來源。具有代表性的是美國藥典(USP35)《葡萄籽原花青素》。由于不同來源原花青素的提取物產品價格差異大，各類原花青素產品大部分無統一的檢測標準或檢測標準低，特別是不同來源原花青素的鑒別報道甚少，導致一些非法商家用低價格的原花青素產品摻加到高價格產品中，以次充好，擾亂市場，并且危害食用者的健康和安全。
[0007]目前最常用的測定方法檢測時間都很長，反應時間均在半小時以上，不能做到快速檢測，由于在線檢測講究速度與準確度，目前這幾種方法都不能滿足便于方法推廣和應用的需求。
【發明內容】
[0008]本發明主要針對現有技術的不足，提出一種測定原花青素含量及鑒別的方法，其能對含原花青素的樣品在常溫常壓下進行，所需時間短且無毒，檢測結果準確。
[0009]為實現上述目的，本發明所述一種測定原花青素含量及鑒別的方法，其實現方法如下:
[0010]1、試樣溶液制備:稱取50-100mg試樣置于50mL容量瓶中，加入3OmL甲醇，以40KHz超聲處理20min，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，以4000r/min離心后取上清液，即試樣溶液；
[0011]2、標準曲線的繪制:精密稱取原花青素標準品B2 (≥99%) 10mg，溶于IOmL甲醇中，分別吸取該溶液0mL、0.lmL、0.25mL、0.5mL、l.0mLU.5mL置于具塞錐瓶中，采用與試樣相同的測定方法測吸光度，以濃度(mg/mL)為橫坐標、吸光度為縱坐標制標準曲線；
[0012]3、試樣測定:將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后，取出6mL置于具塞錐瓶中，再加入0.2mL硫酸鐵銨溶液和ImL試樣溶液，混勻，置98-100°C沸水浴回流，精確加熱40min后，立即置2-10°C冷水中冷卻15min后，于546nm波長處測吸光度，用標準曲線計算試樣中原花青素的含量。
[0013]本發明所述一種測定原花青素鑒別的方法，以乙腈作為流動相添加劑，通過梯度洗脫，實現原花青素試樣 的鑒別，具體步驟如下:
[0014]①標準樣品溶液制備:稱取樣品200mg置于50mL容量瓶中，加入分析純甲醇40mL,以40KHz超聲振蕩30min后冷卻至室溫定容,用微孔濾膜過濾后進樣測定；
[0015]②溶液制備:稱取樣品200mg置于50mL容量瓶中，加入分析純甲醇40mL，以40KHz超聲振蕩30min后冷卻至室溫定容,用0.45 μ m微孔濾膜過濾后進樣測定；
[0016]③色譜條件:色譜柱:PRP-125cmX4.6mmX 5 μ m,
[0017]流動相A:分析純乙腈
[0018]流動相B:0.3%磷酸水溶液
[0019]
【權利要求】
1.一種測定原花青素含量的方法，其特征在于: (1)試樣溶液制備:稱取50-100mg試樣置于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇，以40KHz超聲處理20min，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，以4000r/min離心后取上清液，即試樣溶液； (2)標準曲線的繪制:精密稱取原花青素標準品B2(≥99%) 10mg，溶于IOmL甲醇中，分別吸取該溶液OmL、0.lmL、0.25mL、0.5mL、l.0mLU.5mL置于具塞錐瓶中，采用與試樣相同的測定方法測吸光度，以濃度(mg/mL)為橫坐標、吸光度為縱坐標制標準曲線； (3)試樣測定:將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后，取出6mL置于具塞容器中，再加入0.2mL硫酸鐵銨溶液和ImL試樣溶液，混勻，置98_100°C沸水浴回流，精確加熱40min后，立即置2-10°C冷水中冷卻15min后，于546nm波長處測吸光度，用標準曲線計算試樣中原花青素的含量。
2.一種利用權利要求1所述測定方法鑒別物料中原花青素的方法，其特征在于:包括以下步驟:以乙腈作為流動相添加劑，通過梯度洗脫，實現原花青素試樣的鑒別，具體步驟如下: ①標準樣品溶液制備:稱取樣品200mg置于50mL容量瓶中，加入分析純甲醇40mL，以40KHz超聲振蕩30min后冷卻至室溫定容,用微孔濾膜過濾后進樣測定； ②溶液制備:稱取樣品200mg置于50mL容量瓶中，加入分析純甲醇40mL，以40KHz超聲振蕩30min后冷卻至室溫定容,用0.45 μ m微孔濾膜過濾后進樣測定； ③色譜條件:色譜柱:PRP-125cmX4.6mmX 5 μ m, 流動相A:分析純乙腈
3.如權利要求2所述測定方法鑒別物料中原花青素的方法，其特征在于:所述微孔濾膜孔徑為0.45 μ m。
【文檔編號】G01N30/06GK103954700SQ201410146549
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月12日 優先權日:2014年4月12日
【發明者】秦蓉, 王讓成, 李苗鴿, 錢英, 王濤, 任靜, 孫蕊艷, 萇釗, 翟巧麗 申請人:陜西衡道檢測技術有限公司
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