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一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法，其步驟：1）設(shè)計(jì)肌肉取樣管；2）準(zhǔn)備魚(yú)類(lèi)樣品：魚(yú)體新鮮未腐敗；3）取樣工具：將取樣用的不銹鋼手術(shù)刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預(yù)燒后待用；4）在魚(yú)體上切口：用預(yù)燒過(guò)的手術(shù)刀在魚(yú)體背鰭下方，脊椎上方；5）取肌肉：將預(yù)燒過(guò)的肌肉取樣管的一端從一個(gè)切口插入，平行于魚(yú)體向另一個(gè)切口方向旋轉(zhuǎn)；6）清洗：用去離子水沖洗掉肌肉上面的血液；7）烘干；8）研磨：將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預(yù)燒過(guò)的陶瓷研缽中研磨成粉末，保存。方法易行，操作簡(jiǎn)便，能夠有效的避免和減少了取樣過(guò)程中由于樣品采集裝置和樣品容器帶來(lái)的污染，烘干后的魚(yú)體肌肉樣品能夠長(zhǎng)期保存并保存穩(wěn)定。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分析測(cè)試領(lǐng)域，更具體涉及一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體背部白肌肉的取樣方法。

【背景技術(shù)】
[0002]穩(wěn)定同位素技術(shù)是利用氫、氮、碳、氧、硫等輕元素的穩(wěn)定同位素作為示蹤原子，研究各種生物化學(xué)的過(guò)程和機(jī)理，以及分子的微觀結(jié)構(gòu)與性質(zhì)之間關(guān)系的一項(xiàng)技術(shù)。該技術(shù)被廣泛地運(yùn)用于食品安全檢測(cè)和生態(tài)系統(tǒng)能量流動(dòng)，魚(yú)類(lèi)是我們食物的重要組成部分，也是水生態(tài)系統(tǒng)中重要的消費(fèi)者，因此，水產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)和水生態(tài)系統(tǒng)研究中經(jīng)常要用穩(wěn)定同位素技術(shù)分析魚(yú)類(lèi)肌肉樣品。然而，魚(yú)體肌肉樣品處理和保存過(guò)程中的不穩(wěn)定性，對(duì)同位素分析易產(chǎn)生干擾。因此，用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉樣品取樣必須方便快捷，能夠最大程度低排除干擾，樣品并能長(zhǎng)時(shí)間保存并保持穩(wěn)定。
[0003]由于穩(wěn)定同位素分析所需樣品量很少，樣品收到污染的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。樣品采集裝置和樣品容器，以及樣品間的交叉污染，都會(huì)使穩(wěn)定同位素分析的可靠性降低，此外，穩(wěn)定同位素分析的結(jié)果還會(huì)受到不同的采樣和處理方法的干擾。因此，本方法通過(guò)選取無(wú)穩(wěn)定同位素干擾或干擾極小的樣品采集裝置及樣品容器，對(duì)樣品采集裝置和樣品容器作排除干擾處理，并簡(jiǎn)化取樣過(guò)程，可有效減少樣品遭受干擾和污染的幾率，樣品經(jīng)低溫烘干處理后可長(zhǎng)期保存并保持穩(wěn)定，有利于提高魚(yú)類(lèi)穩(wěn)定同位素分析中的可靠性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是在于提供了一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法，方法易行，操作簡(jiǎn)便，能夠有效的避免和減少了取樣過(guò)程中由于樣品采集裝置和樣品容器帶來(lái)的污染，以及樣品交叉污染和取樣不規(guī)范給穩(wěn)定同位素分析帶來(lái)的干擾，經(jīng)過(guò)該方法取樣烘干后的魚(yú)體肌肉樣品能夠長(zhǎng)期保存并保存穩(wěn)定。
[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施:
一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法:其步驟是:
1.設(shè)計(jì)肌肉取樣管:選取內(nèi)徑為8— 1mm,外徑為9 一 1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取11 - 12cm長(zhǎng)度，一端截面與不銹鋼管長(zhǎng)徑成90°，另一端與不銹鋼管長(zhǎng)徑成30°，不銹鋼管30° —端的切口用砂紙打磨鋒利；
2.準(zhǔn)備魚(yú)類(lèi)樣品:選取魚(yú)類(lèi)樣本，要求魚(yú)體新鮮未腐敗。春季和秋季氣溫在10-18°C時(shí)魚(yú)體死亡樣品處理的時(shí)間不要超過(guò)2h，夏季樣品如不冷凍應(yīng)立即處理，冬季氣溫在-1-4°C時(shí)樣品最好也要在魚(yú)體死亡后48h之內(nèi)處理。樣本個(gè)體大小要保證能夠取到足夠的背部白肌肉，用清水清洗干凈魚(yú)體，晾干魚(yú)體表面水分，測(cè)量全長(zhǎng)、體重；
3.準(zhǔn)備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術(shù)刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預(yù)燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的氯化氫(HCl)中浸泡28 — 32分鐘，用去離子水反復(fù)清洗3 - 4次后干燥，編好標(biāo)簽待用； 4.在魚(yú)體上切口:用預(yù)燒過(guò)的手術(shù)刀在魚(yú)體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚(yú)體前方的部位垂直于脊椎作兩個(gè)切口，切口長(zhǎng)度不小于15mm，深度12-15mm，兩切口間距離39 — 41mm；
5.取肌肉:將預(yù)燒過(guò)的肌肉取樣管30°的一端從一個(gè)切口插入，平行于魚(yú)體向另一個(gè)切口方向緩慢旋轉(zhuǎn)，肌肉取樣管不要碰到魚(yú)體骨骼，直至肌肉取樣管的前端越過(guò)另一個(gè)切口，抽出肌肉取樣管，用預(yù)燒過(guò)的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的魚(yú)體組織，如骨骼、鱗片等；
6.清洗:用去尚子水將肌肉沖洗干凈，晾干后轉(zhuǎn)入編號(hào)的Eppendorf管；
7.烘干:在58— 62°C下烘干至恒重；
8.研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預(yù)燒過(guò)的陶瓷研缽中研磨成粉末，過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測(cè)試。
[0006]相同實(shí)驗(yàn)條件下培養(yǎng)的魚(yú)類(lèi)，運(yùn)用該取樣方法獲取和保存的魚(yú)體肌肉樣品，穩(wěn)定同位素分析結(jié)果不同魚(yú)體間的變異率遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18932.1-2002)處理方法間的變異。
[0007]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果:
本方法通過(guò)選取無(wú)穩(wěn)定同位素干擾或干擾極小的樣品采集裝置及樣品容器，對(duì)樣品采集裝置和樣品容器作排除干擾處理，并簡(jiǎn)化了取樣過(guò)程，可有效的減少了樣品遭受干擾和污染的幾率，樣品經(jīng)低溫烘干處理后可長(zhǎng)期保存并保持穩(wěn)定，有利于提高魚(yú)類(lèi)穩(wěn)定同位素分析中的可靠性。
[0008]相同實(shí)驗(yàn)條件下培養(yǎng)的異育銀鯽，運(yùn)用該取樣方法獲取和保存其中5條魚(yú)的肌肉樣品，用該方法獲取樣品穩(wěn)定同位素分析結(jié)果的平均變異遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于用現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18932.1-2002)處理方法間的變異。其中5條魚(yú)體間的碳穩(wěn)定同位素的平均變異率0.13%。，低于食物網(wǎng)中不同營(yíng)養(yǎng)級(jí)間碳同位素的平均差值0.4%o ；5條魚(yú)體間氮穩(wěn)定同位素的平均變異率為0.97%。，低于不同營(yíng)養(yǎng)級(jí)間氮穩(wěn)定同位素的平均差值3.4%。。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1為一種魚(yú)體背部白肌肉不銹鋼取樣管示意圖。
[0010]其中，I為肌肉取樣管內(nèi)徑，2為肌肉取樣管外徑，3為不銹鋼管截面與管體長(zhǎng)徑30°夾角，4為不銹鋼管截面與管體長(zhǎng)徑90°夾角，5為魚(yú)體肌肉取樣管(整體)，6為魚(yú)體肌肉取樣管的長(zhǎng)度。
[0011]圖2為一種魚(yú)體背部切口示意圖。
[0012]其中7為切口長(zhǎng)度，8為兩切口間的距離，9為切口位置及方向部位。

【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1:
下面結(jié)合具體圖示對(duì)本發(fā)明的進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明:
一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法:其步驟是:
1.設(shè)計(jì)肌肉取樣管:選取肌肉取樣管內(nèi)徑I為8或9或10mm，肌肉取樣管外徑2為9或9.5或1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取魚(yú)體肌肉取樣管的長(zhǎng)度6為9或10或Ilcm的一段，不銹鋼管截面一端與不銹鋼管截面與管體長(zhǎng)徑90° 4，另一端與不銹鋼管截面與管體長(zhǎng)徑30° 3，不銹鋼管截面與管體長(zhǎng)徑30° 3—端的切口用砂紙打磨鋒利，形成魚(yú)體肌肉取樣管5 ；
2.準(zhǔn)備魚(yú)類(lèi)樣品:選取魚(yú)類(lèi)樣本，要求魚(yú)體新鮮未腐敗，個(gè)體大小保證能夠取到足夠的背部白肌肉，用清水清洗干凈魚(yú)體，晾干魚(yú)體表面水分，測(cè)量全長(zhǎng)、體重；
3.準(zhǔn)備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術(shù)刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預(yù)燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的HCl中浸泡28或29或30或31或32分鐘，用去離子水反復(fù)清洗3或4次后干燥，編好標(biāo)簽待用；
4.在魚(yú)體上切口:用預(yù)燒過(guò)的手術(shù)刀在魚(yú)體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚(yú)體前方的切口位置及方向部位9垂直于脊椎作兩個(gè)切口，切口長(zhǎng)度7不小于15mm，深度12或13或14或15mm,兩切口間距離8為40mm ；
5.取肌肉:將預(yù)燒過(guò)的魚(yú)體肌肉取樣管5截面傾斜的一端從一個(gè)切口插入，平行于魚(yú)體向另一個(gè)切口方向緩慢旋轉(zhuǎn)，魚(yú)體肌肉取樣管5不要碰到魚(yú)體骨骼，直至魚(yú)體肌肉取樣管5的前端越過(guò)另一個(gè)切口，抽出肌肉取樣管，用預(yù)燒過(guò)的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的其它魚(yú)體組織，如骨骼、鱗片等；
6.清洗:用去尚子水將肌肉沖洗干凈，晾干后轉(zhuǎn)入編號(hào)的Eppendorf管；
7.烘干:在58或59或60或61或62°C下烘干至恒重；
8.研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預(yù)燒過(guò)的陶瓷研缽中研磨成粉末，過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測(cè)試。
【權(quán)利要求】
1.一種用于穩(wěn)定同位素分析的魚(yú)體肌肉的取樣方法，其步驟是: 1)設(shè)計(jì)肌肉取樣管:選取內(nèi)徑為8— 1mm,外徑為9 一 1mm的低碳奧氏體耐酸不銹鋼管，截取11 一 12cm長(zhǎng)度，一端截面與不銹鋼管長(zhǎng)徑成90°，另一端與不銹鋼管長(zhǎng)徑成30°，不銹鋼管30° —端的切口用砂紙打磨； 2)準(zhǔn)備魚(yú)類(lèi)樣品:選取魚(yú)類(lèi)樣本，魚(yú)體新鮮未腐敗，春季和秋季氣溫在10-18°C時(shí)魚(yú)體死亡樣品處理的時(shí)間不要超過(guò)2h，夏季樣品不冷凍處理，冬季氣溫在-1_4°C時(shí)樣品在魚(yú)體死亡后48h之內(nèi)處理，樣本個(gè)體大小取到背部白肌肉，用清水清洗干凈魚(yú)體，晾干魚(yú)體表面水分，測(cè)量全長(zhǎng)、體重； 3)準(zhǔn)備取樣工具:將取樣用的不銹鋼手術(shù)刀、鑷子、肌肉取樣管于酒精燈上預(yù)燒后待用，盛放肌肉樣品的5ml容量的Eppendorf管在10%的氯化氫中浸泡28 — 32分鐘，用去離子水反復(fù)清洗3 - 4次后干燥，編好標(biāo)簽待用； 4)在魚(yú)體上切口:用預(yù)燒過(guò)的手術(shù)刀在魚(yú)體背鰭下方，脊椎上方，靠近魚(yú)體前方的部位垂直于脊椎作兩個(gè)切口，切口長(zhǎng)度不小于15mm，深度12-15mm，兩切口間距離39 — 41mm； 5)取肌肉:將預(yù)燒過(guò)的肌肉取樣管30°的一端從一個(gè)切口插入，平行于魚(yú)體向另一個(gè)切口方向旋轉(zhuǎn)，肌肉取樣管不要碰到魚(yú)體骨骼，直至肌肉取樣管的前端越過(guò)另一個(gè)切口，抽出肌肉取樣管，用預(yù)燒過(guò)的鑷子取出肌肉樣品，不要取到背部白肌以外的魚(yú)體組織； 6)清洗:用去離子水沖洗掉肌肉上面的血液，晾干后轉(zhuǎn)入編號(hào)的Eppendorf管； 7)烘干:在58— 62 °C下烘干至恒重； 8)研磨:將烘干后的肌肉樣品轉(zhuǎn)入預(yù)燒過(guò)的陶瓷研缽中研磨成粉末，過(guò)80目孔徑篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)入Eppendorf管保存或送往測(cè)試。
【文檔編號(hào)】G01N1/04GK104198216SQ201410497767
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】連玉喜, 李為, 葉少文, 李鐘杰, 劉家壽, 張?zhí)昧? 苑晶 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所