一種電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的液相色譜串聯質譜測定方法
【專利摘要】一種電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的液相色譜串聯質譜測定方法，其特征在于：是將電子煙煙液樣品經稀釋后直接引入液相色譜-電噴霧電離-串聯質譜儀進行測定，采用內標法定量分析物。可快速、準確檢測出電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的含量水平。本發明為全新的電子煙煙液中煙草特有亞硝胺含量的測定方法，串聯質譜法更好的提高了方法的選擇性與準確性，NNK、NNN、NAT和NAB的定量限分別為0.08ng/mL，0.10ng/mL，0.12ng/mL和0.09ng/mL，方法的回收率范圍是90.9-108.1%，RSD＜12.1%。通過色譜柱以及洗脫條件的選擇與優化，較好的提高了色譜分離過程，縮短了色譜分析的時間，為6min。
【專利說明】一種電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的液相色譜串聯質譜測定方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于電子煙的理化檢驗【技術領域】，具體說是一種采用液相色譜-電噴霧電離-串聯質譜儀測定電子煙煙液中煙草特有亞硝胺含量的方法。
【背景技術】
[0002]4-(亞硝基甲氨基)-1_ β -吡啶基)-1- 丁酮(NNK)、#-亞硝基降煙堿(NNN)、#-亞硝基新煙草堿(NAT)和亞硝基假木賊堿(NAB)是廣泛存在于卷煙煙氣中的致癌物，并且這些物質只存在于煙草制品或者卷煙煙氣中，因此被稱為煙草特有亞硝胺(TSNAs)。國際癌癥研究機構(IARC)、Hecht研究團隊等，對加拿大政府名單中有害成分的毒性評價結果表明，并有足夠的證據認為，TSNAs中的NNK對實驗室動物有致癌性。因此，準確測定TSNAs在煙草制品及卷煙煙氣中的含量對人類健康的具有十分重要的意義，關于卷煙中的TSNAs測定的各種方法也常見于公開文獻中。
[0003]電子煙(electrical cigarette, e-cigarette)又名電子煙堿傳送系統(electronic nicotine delivery systems, ENDS),是一種外表類似于卷煙的新型煙堿攝入方式。多年來，電子煙以“保健”，“戒煙”，“清肺”等為宣傳口號，以網絡為主要營銷途徑，在中國地區銷量大增。但是，針對電子煙產品的成分測定，安全性評估等方面的研究還很少。最近有文獻報道在電子煙煙液中也存在少量的TSNAs，而關于電子煙煙液中TSNAs測定方法的報道很少。韓國學者建立了液液萃取、固相萃取-LC-MS/MS測定電子煙煙液中TSNAs的方法，但是其方法前處理比較繁瑣，包括液液萃取和固相萃取，不利于電子煙煙液中TSNAs的常規分析。因此，能否提供一種前處理簡單的、快速、高靈敏度的測定電子煙煙液中TSNAs的方法，已引起有關業內研究人員的關注。
【發明內容】
[0004]本發明的目的旨在克服現有技術缺陷，建立一種簡單、快速、選擇性好的測定電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的LC-MS/MS方法，該方法能快速、準確檢測電子煙填充液中煙草特有亞硝胺的含量，測定結果準確、測定干擾少。
[0005]本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:
一種電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的液相色譜串聯質譜測定方法，是對四種煙草特有亞硝胺:NNK、NNN, NAT和NAB的測定，具體包括以下工藝步驟:
a、準確稱取1.00 g電子煙煙液樣品，放入10 mL的容量瓶；
b、加入50PL的混合內標溶液，用100 mM的乙酸銨溶液定容到刻度，超聲10 min混合均勻以后即為樣品待測液；
C、標準工作液配制:用乙酸銨溶液配制不同濃度的NNK、NNN、NAT和NAB混合標準工作溶液；
d、液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS )測定，吸取上述配制好的不同濃度的混合標準工作溶液，注入LC-MS/MS系統，NNK, NNN, NAT和NAB的線性回歸方程分別為y=0.0462x-0.000362，y=0.0825x+0.00655, y=0.271x+0.00884 和 y=0.134x+0.0112，其中Y代表分析物的峰面積，X表示樣品中目標分析物的濃度，相關系數均大于0.999，對樣品待測液進行測定，測得分析物與內標峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。
[0006]在本發明中，所述混合內標為NNK-d4、NNN-d4、NAT_d4和NAB_d4，四種內標的濃度均為 5 Pg/mL。
[0007]所述NNK、NNN, NAT和NAB混合標準工作溶液濃度分別為1.02，5.08，10.2，20.3，30.5,40.6 和 50.8 ng/mL ；1.21,6.06，12.1,24.2,36.4,48.5 和 60.6 ng/mL ；0.90,4.49，
8.97，17.9,26.9, 35.9 和 44.9 ng/mL ；0.49，2.46,4.92,9.84，14.8,19.7 和 24.6 ng/mL。
[0008]在d 步驟中，選取 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 色譜柱，規格 150 mmX 2.1mm,3.5 Mm,流動相:溶劑A:0.1%乙酸水溶液和溶劑B:0.1%乙酸甲醇溶液，流動相流速為 200 μ L/min，梯度洗脫條件:0-3 min，50%A_10%A ;3_4 min, 10%A-0%A ；4-5 min, 0%A ；
5-5.5 min，0%A-50%A ；5.5-6 min，50%A，分析時間為 6 min，進樣量為 5 μ L。
[0009]在d步驟中，串聯質譜檢測器的條件:電噴霧離子源，多反應監測正離子掃描方式；電噴霧電壓:4500V，霧化氣:50 psi,氣簾氣:35 psi,輔助加熱氣:30 psi，射入電壓:10 V，駐留時間:40 ms ;NNK、NNN、NAT和NAB的監測離子對及其相應的碰撞能量見表1。
[0010]表1多反應監測模式下NNK、NNN: NAT和NAB的質譜參數_
【權利要求】
1.一種電子煙煙液中煙草特有亞硝胺的液相色譜串聯質譜測定方法，具體是對四種煙草特有亞硝胺:NNK、NNN, NAT和NAB的測定，其特征在于:包括以下工藝步驟: a、準確稱取1.0O g電子煙煙液樣品，放入10 mL的容量瓶； b、加入50PL的混合內標溶液，用100 mM的乙酸銨溶液定容到刻度，超聲10 min混合均勻以后即為樣品待測液； C、標準工作液配制:用乙酸銨溶液配制不同濃度的NNK、NNN、NAT和NAB混合標準工作溶液； d、液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)測定，吸取上述配制好的不同濃度的混合標準工作溶液，注入LC-MS/MS系統，NNK, NNN, NAT和NAB的線性回歸方程分別為y=0.0462x-0.000362，y=0.0825x+0.00655, y=0.271x+0.00884 和 y=0.134x+0.0112，其中Y代表分析物的峰面積，X表示樣品中目標分析物的濃度，相關系數均大于0.999，對樣品待測液進行測定，測得分析物與內標峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:所述混合內標為NNK-d4、NNN-d4、NAT-d4和NAB-d4，四種內標的濃度均為5 Pg/mL。
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:NNK、NNN,NAT和NAB混合標準工作溶液濃度分別為 1.02，5.08，10.2,20.3,30.5，40.6 和 50.8 ng/mL ；1.21,6.06，12.1,24.2，36.4，48.5 和 60.6 ng/mL ；0.90,4.49,8.97，17.9,26.9, 35.9 和 44.9 ng/mL ；0.49，2.46，4.92,9.84，14.8,19.7 和 24.6 ng/mL。
4.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:在d步驟中，選取AgilentZorbaxEclipse XDB-C18色譜柱，規格150 mmX2.1 mm, 3.5 Mm，流動相:溶劑A:0.1%乙酸水溶液和溶劑B:0.1%乙酸甲醇溶液，流動相流速為200 μ L/min，梯度洗脫條件:0_3 min,50%A-10%A ；3-4 min,10%A_0%A ;4_5 min, 0%Α ;5_5.5 min，0%A_50%A ；5.5-6 min，50%A，分析時間為6 min,進樣量為5 μ L。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于:在d步驟中，串聯質譜檢測器的條件:電噴霧離子源，多反應監測正離子掃描方式；電噴霧電壓:4500V，霧化氣:50 psi,氣簾氣:35 psi,輔助加熱氣:30 psi，射入電壓:10 V，駐留時間:40 ms ;NNK、NNN、NAT和NAB所選擇的定量離子對分別為 208.1-122.1，178.1-148.2，190.1-160.1 和 192.1-162.1。
【文檔編號】G01N30/88GK103837633SQ201410094994
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月16日 優先權日:2014年3月16日
【發明者】張小濤, 韓書磊, 陳歡, 劉彤, 吳帥賓, 侯宏衛, 胡清源 申請人:國家煙草質量監督檢驗中心
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