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一種前列腺腺體細胞線粒體損傷的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種前列腺腺體細胞線粒體損傷檢測的方法，包括以下檢測步驟：獲取前列腺液1-2ml，把前列腺液放入加有緩沖液的樣本瓶內(nèi)，在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B1ml；混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對檢測結(jié)果；本發(fā)明方法簡單、實用、快速、靈敏度高。
【專利說明】一種前列腺腺體細胞線粒體損傷的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種前列腺腺體細胞線粒體損傷檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002]線粒體是人體細胞中最重要的細胞器，是細胞的“動力工廠”。對受損前列腺上皮細胞線粒體的檢測包括對線粒體滲透轉(zhuǎn)換孔(mitochon2dria permeability transit1npore，MPTP)的檢測、膜磷脂的檢測、膜電位的檢測、2mtDNA損傷檢測、細胞內(nèi)鈣離子濃度檢測等。此類檢測操作十分復雜，需要精密的儀器設備，一般實驗室很難完成，使前列腺腺體細胞線粒體損傷檢測受到極大限制。在如上高難度檢測之前，使用一種操作簡單，成本低廉的方法，對前列腺腺體細胞線粒體是否損傷進行初步檢測，會對前列腺腺體細胞線粒體是否損傷起到啟示作用，對是否需要進一步進行如上高難度檢測起到指示作用。因此，研究發(fā)明一種前列腺腺體細胞線粒體損傷檢測技術(shù)具有很重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測前列腺腺體細胞線粒體損傷的方法操作復雜、設備昂貴、難以實施的問題，本發(fā)明提供了一種檢測前列腺液細胞游離亞鐵原卟啉、進而了解前列腺腺體細胞線粒體有否損傷的方法，本發(fā)明提供的方法簡單易行，成本低廉，可快速地檢測前列腺腺體細胞線粒體損傷。
[0004]本發(fā)明提供的前列腺腺體細胞線粒體損傷檢測的方法，包括以下檢測步驟:
1)獲取前列腺液l-2ml；
2)把前列腺液放入樣本瓶內(nèi)，樣本瓶內(nèi)預裝有醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml,使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液；優(yōu)選的，醋酸緩沖液PH值為4.5 ;
3)在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對檢測結(jié)果；
所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；優(yōu)選的，二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/L ；
所述試劑B為過氧化氫溶液；優(yōu)選的，過氧化氫溶液為1.5%。
[0005]在某些因素的作用下，前列腺腺體細胞穩(wěn)態(tài)失調(diào)，出現(xiàn)能量代謝重編程。前列腺上皮細胞代謝出現(xiàn)瓦博格氏效應，導致細胞內(nèi)低氧和還原態(tài)微環(huán)境，激活氧感受器和缺氧信號傳導通路，促使缺氧特異性轉(zhuǎn)錄因子-低氧誘導因子和第二信使-活性氧族活性增高，改變細胞色素等細胞蛋白的極性量值，使位居蛋白疏水核中的細胞游離亞鐵原卟啉(Cells Free Ferrous Protoporphyrin )析出。細胞游離亞鐵原卩卜啉催生多種自由基，弓丨起細胞膜脂質(zhì)、脂蛋白、細胞骨架、DNA等的氧化損傷，可使線粒體出現(xiàn)線粒體單價電子滲漏(univalent leak);胞內(nèi)Ca2+超載,觸發(fā)線粒體攝取Ca2+并使Ca2+在線粒體內(nèi)積聚；抑制線粒體內(nèi)脫氫酶的功能；以上改變可使線粒體腫脹、嵴斷裂崩解、鈣鹽沉積、外膜破裂和基質(zhì)外溢。細胞游離亞鐵原卟啉析出量與前列腺腺體細胞線粒體損傷程度呈正相關(guān)。細胞游離亞鐵原R卜啉析出后可在前列腺液中測及。作為檢測手段，測定前列腺液中細胞游離亞鐵原卟啉含量，即可提示前列腺腺體細胞線粒體是否損傷。
本發(fā)明提供的檢測方法，簡單實用，成本低廉，可快速的檢測出前列腺腺體細胞中不含細胞游離亞鐵原卟啉的樣本、含細胞游離亞鐵原卟啉的的樣本和可能含有細胞游離亞鐵原卟啉的的樣本，進而了解前列腺腺體細胞線粒體有否損傷，為進一步檢查做準備；本發(fā)明可檢測出的最低細胞游離亞鐵原卟啉的濃度可達5ng/ml，，靈敏度高。

【具體實施方式】
[0006]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
[0007]實施例1
1)獲取前列腺液1-2；
2)把前列腺液放入樣本瓶內(nèi)，樣本瓶內(nèi)預裝有PH值為4.5醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml，使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液；
3)在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對檢測結(jié)果；
所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；優(yōu)選的，二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/L ； 所述試劑B為1.5%過氧化氫溶液。
[0008]【判定標準】
樣本瓶內(nèi)液體不顯色或顯微藍色(一)陰性藍色(+ )陽性
深藍色 (++)強陽性
顯深藍色后即刻轉(zhuǎn)為深黃色或棕紅色 (+++) 強陽性顯示標本內(nèi)可能混有血液。若出現(xiàn)泡沫樣物，顯示標本內(nèi)可能混有血液較多。
[0009]驗證試驗:
分別取檢測為不顯色、顯示藍色和深藍色的樣品各三例，用質(zhì)譜分析儀進行細胞游離亞鐵原卟啉檢測，檢測結(jié)果如下:不顯色均未測及細胞游離亞鐵原卟啉；藍色為5 ng/ml，22ng/ml、131ng/ml ;深藍色為 207ng/ml、0.12 μ g/ml、0.37 μ g/ml。
[0010]通過以上數(shù)據(jù)可以看出，對細胞游離亞鐵原卟啉含量在5ng/ml以上的樣本，本檢測方法就可以初步的判斷，含量在20ng/L以上的滲液本檢測方法就可以確定為前列腺液中含有細胞游離亞鐵原卟啉，提示前列腺腺體細胞線粒體損傷，所以本檢測方法的實用性強。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明提供的前列腺腺體細胞線粒體損傷的檢測方法，包括以下檢測步驟: 1)獲取前列腺液l-2ml； 2)把前列腺液放入樣本瓶內(nèi)，樣本瓶內(nèi)預裝有醋酸緩沖液，緩沖液的量為2ml,使前列腺液與樣本保存液混勻，得樣本液； 3)在樣本瓶內(nèi)順序加入試劑A1ml，試劑B Iml ;混勻，2分鐘內(nèi)觀察顏色變化，與比色板比對檢測結(jié)果； 所述試劑A為二(4.二甲氨基苯基)甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液； 所述試劑B為過氧化氫溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的醋酸緩沖液的PH值為4.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的二(4.二甲氨基苯基)甲烷溶液濃度為0.002mol/Lo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的過氧化氫溶液的濃度為1.5%。
【文檔編號】G01N21/78GK104076033SQ201410329741
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】溫鑫, 崔子倫 申請人:青島貝爾奧生物科技有限公司